Questo protocollo consente ai ricercatori di ottenere frazioni distinte di una cellula senza l'uso di attrezzature specializzate, reagenti costosi o tecniche complesse. Il vantaggio principale di questo protocollo è la semplicità delle tecniche che lo rendono modificabile e facile da eseguire. A dimostrare la procedura saranno Matt Deragon, Rob Haluska e Alexa Hodges.Tre studenti laureati del mio laboratorio. Per iniziare a centrifugare la sospensione cellulare preparata per creare un pellet. Rimuovere il supernatante e sospendere di nuovo il pellet a temperatura ambiente PBS. Centrifugare la sospensione cellulare a 400 xg per dieci minuti. Quindi rimuovere il supernatante e sospendere di nuovo il pellet cellulare nel tampone freddo ghiacciato. Preparare il buffer Una soluzione in base al protocollo di testo. Centrifugare la sospensione cellulare a 400 xg per dieci minuti e rimuovere il supernatante. Sospendere di nuovo il pellet nel tampone Una soluzione ad una concentrazione finale di 200 milioni di cellule per ml e pipettare delicatamente per rompere eventuali grumi. Dopo questo incubare la sospensione cellulare su un rotatore end over end a 4