MEH מומן על ידי HJ ואן קליב פרופסור באוניברסיטה של אילינוי, באורבנה-שמפיין. בנוסף, למימון אנו מודים האנושי גבול המדע לתוכנית (M.E.H. ות. ג) הקרן החברתית האירופאית ואת תקציב המדינה של הרפובליקה הצ'כית, פרויקט. לא. CZ.1.07/2.3.00/30.0041 (ל. ת. ג). אנו מודים האוקיינוס אופטיקה לכיסוי עלויות הפרסום.

אופטיקה האוקיינוס מסבסדת את דף בגין כתב היד הזה.

למרות ביצה דחייה ניסויים הם השיטה הנפוצה ביותר ללמוד קו-אבולוציה שבוחרים טפיל-פונדקאי66, ולאחד מאמצים למיגור לתקנן חומרים, טכניקות, או פרוטוקולים חסרים. . זה בעייתי במיוחד עבור meta-ניתוחים. אין מטא אנליזה, לידע שלנו, המארח ביצה דחייה עד כה יש מבוקר עבור מתודולוגי סתירות בין מחקרי...

טפילים שבוחרים מטילים את ביציהם ב קינים של מינים אחרים ייתכן ואז לגדל את צאצאם, לשלם את עלויות טיפול הורים1,2,3. מעשה זה של הונאה להערים על המחשב המארח של הטפיל, בילוש כדי לאתר את הטפיל מצד המארח מספק לחצים בררניים חזק על שני שחקנים. במקרים מסוימים של העופות הטפילות מיוחמת, הזיהוי של המחשב המארח של ביצי טפילים שונים בוחר עבור טפילים המחקים מארח ביצים, המייצרת ומירוץ החימוש האבולוציוני בין המחשב המארח וטפיל4. לומד הטפילות מיוחמת הוא חשוב כי זה מערכת מודל עבור חוקרים coevolutionary dynamics, קבלת ההחלטות ב- בר5. ביצה דחייה ניסויים הם אחת השיטות הנפוצות ביותר עבור העופות הטפילות שבוחרים את השדה ואת כלי חשוב המשתמשות האקולוגים לחקור אינטראקציות interspecific6.
במהלך הניסויים דחייה ביצה, חוקרים בדרך כלל להציג את הטבע או מודל ביצים ולא להעריך את התגובה של המחשב המארח הביצים ניסיוני על פני תקופה סטנדרטית. ניסויים אלה יכול לכלול החלפת ביצים אמיתי (כלומר להשתנות במראה) בין קינים7, או צביעה או ציור של משטחי אמיתי ביצים (לחלופין הוספת תבניות), חוזרים אותם קינים המקורי שלהם8, או יצירת מודל ביצים זה יש מניפולציות תכונות כגון צבע9, סיכוייכם10, גודל11, ו/או צורה12. התגובה מארח ביצים של המראה משתנה יכול לספק תובנות בעלות ערך לתוך התוכן מידע שהם משתמשים כדי להגיע של החלטת הדחייה ביצה13 ו שונה זה מושלם, צריך להיות שמעודדים תגובה14. קבלה אופטימלית הסף התיאוריה15 מדינות מארחים צריך לאזן את הסיכונים של בטעות לקבל ביצה טפילי (קבלה שגיאה) או בטעות הסרת משלהם ביצה (שגיאה של דחייה) על-ידי בדיקת ההבדל בין ביצים שלהם (או תבנית פנימית של הביצים האלו) את הביצים טפילית. בתור שכזה, סף קבלה קיים מעבר אשר מארחים להחליט שגירוי שונה גם לסבול. כאשר הטפילות סיכון נמוך, הסיכון של קבלת שגיאות הוא נמוך יותר מאשר כאשר הסיכון של טפיל הוא גבוה; לפיכך, החלטות בהקשר ספציפי, יעבור כראוי כמו סיכונים נתפס השינוי14,16,17.
התיאוריה סף קבלה אופטימלית מניח מארחים לבסס החלטות על רציף וריאציה של פנוטיפים המארח, טפיל. לכן, מדידת מארח התגובות פנוטיפים טפיל שונים יש צורך לבסס אוכלוסיה המארח (עם וריאציה פנוטיפי משלו) איך סובלני הוא מגוון פנוטיפים טפילי. עם זאת, כמעט כל מחקרים קודמים צריכים לסמוך על הביצה קטגורית צבע maculation וטיפולי (למשל, מימטי/הלא-מימטי). רק אם מארח הדקה פנוטיפים לא משתנים, אשר אינה ציפייה מעשית מבחינה ביולוגית, כל התגובות יהיה כמו ישירות (ללא קשר למידת חיקוי). אחרת, מודל "מימטי" ביצה ישתנו ב עד כמה דומה זה מארח ביצים בתוך ובין האוכלוסיות, שעשויה להוביל לבלבול בעת השוואת הממצאים18. התיאוריה מרמזת על מארח החלטות מבוססים על ההבדל בין הביצה טפיליות משלהם14, לא בהכרח צבע מסוים ביצה טפילית. לכן באמצעות סוג מודל ביצה בודדת אינה גישה אידיאלי כדי לבדוק השערות על סף החלטה מארח או יכולות אפליה, אלא אם ההבדל מורגש רק (להלן JND) בין ביצה סוג מודל צבע הביצה בודדים מארח משתנה של עניין. זה חל גם על מחקרים ניסיוניים להחליף או להוסיף ביצים טבעי לבחון תגובות מארח מגוון צבעים19טבעי. עם זאת, בעוד מחקרים אלה לאפשר וריאציה של פנוטיפים המארח, טפיל, הם מוגבלים על ידי וריאציה טבעי נמצאו תכונות6, במיוחד בעת שימוש ביצים conspecific7.
לעומת זאת, חוקרים להכין ביצים מלאכותי של צבעים מגוונים חופשיים מן האילוצים של וריאציה טבעי (למשל, הם יכולים לחקור את התגובות superstimuli20), ומאפשר להם לחקור את גבולות התפיסה מארח6. מחקרים אחרונים השתמשה טכניקות הרומן כדי למדוד את המארח תגובות על פני מגוון פנוטיפי, על ידי ציור ביצים ניסיוני שנועד להתאים ואפילו לעלות על הטווח הטבעי של וריאציה של קליפת הביצה9 וצבעי ספוט21. לומדת המחשב המארח התגובות ביצים עם צבעים לאורך מעברי צבע יכול לחשוף תהליכים קוגניטיביים שבבסיס משום תחזיות תיאורטיות, כמו ספי קבלה15 או חיקוי coevolved4, מבוססים על הבדלים רציף בין תכונות. לדוגמה, על-ידי שימוש בגישה זו, Dainson. et al. 21 הקים כי כאשר הניגוד כרומטית בין הקרקע הדקה הגיוון צבע ספוט גבוה יותר, רובין אמריקאי ציור migratorius נוטה לדחות את הביצים בצורה חזקה יותר. ממצא זה מספק תובנות על כיצד מארח זה מעבד מידע, במקרה זה דרך הבחינה, כדי להחליט אם להסיר ביצה טפילית. על-ידי התאמה אישית של תערובות צבע, החוקרים שניתן לטפל בדיוק רב הדמיון בין ביצה ניסיוני הצבע וצבע ביצה של המחשב המארח, בעוד האחדת גורמים אחרים מבלבלים כגון איתור תבניות10, ביצה בגודל22 וביצה בצורת23.
כדי לעודד את נוספת metareplication ושכפול24 ביצה קלאסי ושהיו דחייה בעבודה, חשוב כי מדענים משתמשים אשר מתוקננים מעבר טקסונומי (מארח שונים מינים)7,22, שטח (אוכלוסיות מארח שונים)7,22,25,26 וזמן (עונות רבייה שונים)7,22,25,26 ,27, אשר נעשה רק לעתים רחוקות. מתודולוגיות שלא היו מתוקננת28 מאוחר יותר הוצגו להוביל לתוצאות artefactual29,30. נייר זה משמש סט של הנחיות עבור חוקרים המבקשים לשכפל את זה סוג של ניסוי דחייה ביצה זה בוחן את התגובות וריאציה רציף והוא מבליט מספר מושגים חשובים מתודולוגי: החשיבות של שליטה קינים, אפריורי השערות, metareplication, pseudoreplication, ואת צבע ניתוח ספקטרלי. למרות ניסויים דחייה ביצה שולטים במגרש של קו-אבולוציה מארח העופות-טפיל, פרוטוקולים מקיפה לא קיימת עדיין. לכן, קווים מנחים אלה יהיה משאב יקר-ערך כדי להגדיל את אינטר - ו אינטרה-lab הדיר כמו המבחן האמיתי של כל השערה טמון metareplication, כלומר, חוזר כל מחקרים על פני האמיניות, מרחב וזמן24, אשר והכוונה מתבצעת רק כאשר משתמשים בשיטות עקבי29,30,31.

<table><tbody><tr><td>Replicator Mini +</td><td>Makerbot</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Cobalt Turquoise Light</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28382</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Titanium White</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28489</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Cobalt Green</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28381</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Cobalt Turquoise</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28449</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Burnt Umber</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28433</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Red Iron Oxide</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28486</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Cadmium Orange</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28437</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Raw Umber Light</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28391</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Yellow Ochre</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28491</td><td></td></tr><tr><td>Professional Acrylic Paint Mars Black</td><td>Winsor &amp;amp; Newton</td><td>28460</td><td></td></tr><tr><td>Paint Brush</td><td>Utrecht</td><td>206-FB</td><td>Filbert brush</td></tr><tr><td>Paint Brush</td><td>Utrecht</td><td>206-F</td><td>Flat brush</td></tr><tr><td>Hair Dryer</td><td>Oster</td><td>202</td><td></td></tr><tr><td>Fiber optic cables</td><td>Ocean Optics Inc.</td><td>OCF-103813</td><td>1 m custom bifurcating fiber optic assembly with blue zip tube (PVDF), 3.8mm nominal OD jeacketing and 2 legs</td></tr><tr><td>Spectrometer</td><td>Ocean Optics Inc.</td><td>Jaz</td><td>Spectrometer unit with a 50 um slit width, installed with a 200-850 nm detector (DET2B-200-850), and grating option # 2.</td></tr><tr><td>Battery and SD card module for spectrometer</td><td>Ocean Optics Inc.</td><td>Jaz-B</td><td></td></tr><tr><td>Light source</td><td>Ocean Optics Inc.</td><td>Jaz-PX</td><td>A pulsed xenon light source</td></tr><tr><td>White standard</td><td>Ocean Optics Inc.</td><td>WS-1-SL</td><td>made from Spectralon</td></tr><tr><td>OHAUS Adventurer Pro Scale</td><td>OHAUS</td><td>AV114C</td><td>A precision microbalance</td></tr><tr><td>Gemini-20 portable scale</td><td>AWS</td><td>Gemini-20</td><td>A standard scale</td></tr><tr><td>Empty Aluminum Paint Tubes (22 ml)</td><td>Creative Mark</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Telescopic mirror</td><td>SE</td><td>8014TM</td><td></td></tr><tr><td>GPS</td><td>Garmin</td><td>Oregon 600</td><td></td></tr><tr><td>220-grit sandpaper</td><td>3M</td><td>21220-SBP-15</td><td>very fine sandpaper</td></tr><tr><td>400-grit sandpaper</td><td>3M</td><td>20400-SBP-5</td><td>very fine sandpaper</td></tr><tr><td>color analysis software: &amp;lsquo;pavo&amp;rsquo;, an R package</td><td>for use in, &lt;em&gt;R: A language and environment for statistical computing&lt;/em&gt;</td><td>v 1.3.1</td><td>https://cran.r-project.org/web/packages/pavo/index.html</td></tr><tr><td>UV clear transparent</td><td>Flock off!</td><td>UV-001</td><td>A transparent ultraviolet paint</td></tr><tr><td>Plastic sandwich bags</td><td>Ziploc</td><td></td><td>Regular plastic sandwich bags from Ziploc that can be purchased at the supermarket.</td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>34120</td><td>11 x 21 cm kimwipes</td></tr><tr><td>Toothbrush</td><td>Colgate</td><td></td><td>Toothbrush</td></tr></tbody></table>

probing the limits of egg recognition using egg rejection experiments along phenotypic gradients

טפילים שבוחרים מטילים את ביציהם ב קינים של נקבות אחרות, עוזב את ההורים המארחים לבקוע, גוזליהן. טפילים שבוחרים כיצד לומד לתפעל מחשבים מארחים לתוך לגדל את צאצאיהם ולגלות כיצד מארחים הטפילות לספק תובנות חשובות בתחום הביולוגיה coevolutionary. טפילים מיוחמת, כגון בקוקיות, cowbirds, להשיג יתרון אבולוציוני כי אין להם לשלם את העלויות של גידול את צאצאיהם. עם זאת, עלויות אלה בחר עבור המארח הגנות נגד בכל שלבי טפילים, כולל ביצים, שלהם צעירים, ומבוגרים התפתחותית. ביצה דחייה ניסויים הם השיטה הנפוצה ביותר המשמשות ללימוד מארח את ההגנות. במהלך ניסויים אלה, חוקר מקומות ביצה ניסיוני בקן המארח, מפקח על מה מחשבים מארחים מגיבים. צבע לעיתים קרובות מטופל, הצפי הוא כי הסבירות של אפליה ביצה ואת מידת dissimilarity בין המארח לבין ביצה ניסיוני קשורים באופן חיובי. נייר זה משמש מדריך עבור ניסויים ביצה דחייה של המתארת שיטות ליצירת צבעים עקביים ביצה לניתוח ממצאי ניסויים אלה. תשומת לב מיוחדת ניתנת שיטה חדשה הכוללת ביצים צבעוניות באופן ייחודי לאורך מעברי צבע בעל הפוטנציאל לחקור צבע הטיות בזיהוי המארח. ללא תקינה, זה בלתי אפשרי להשוות בין ממצאים בין מחקרים באופן משמעותי; פרוטוקול תקני בתוך שדה זה יאפשר יותר ויותר מדויק ותוצאות דומות לניסויים נוספים.

יצירת מודלים צבעוני ביצה
השתקפות ספקטרום של תערובות צבע מותאם אישית וביצים טבעי מוצגים איור 1A-D. תערובות צבע שימוש במחקרים הטפילות שבוחרים כדאי מקרוב להתכתב עם מדידות השתקפות טבעי מבחינת הצורה ספקטרלי (...

Watch this Scientific Journal Video about Probing the Limits of Egg Recognition Using Egg Rejection Experiments Along Phenotypic Gradients at JoVE.com

Probing the Limits of Egg Recognition Using Egg Rejection Experiments Along Phenotypic Gradients

חיטוט מעבר לגבולות ביצים זיהוי באמצעות ניסויים דחייה ביצה לאורך מעברי צבע פנוטיפי

פרוטוקול זה מספק הנחיות להפעלת ביצה דחייה ניסויים: חלוקה טכניקות ציור ניסיוני ביצה מודלים כדי לחקות את הצבעים של ביצים טבעי ציפור, ביצוע עבודת שטח, וניתוח הנתונים שנאספו. פרוטוקול זה מספק שיטה אחידה עבור ניסויים דחייה ביצה דומות.

Brood parasites lay their eggs in other females' nests, leaving the host parents to hatch and rear their young. Studying how brood parasites manipulate ...

probing-limits-egg-recognition-using-egg-rejection-experiments-along

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Behavior

8.2K Views.  Long Island University-Post. פרוטוקול זה מספק הנחיות להפעלת ביצה דחייה ניסויים: חלוקה טכניקות ציור ניסיוני ביצה מודלים כדי לחקות את הצבעים של ביצים טבעי ציפור, ביצוע עבודת שטח, וניתוח הנתונים שנאספו. פרוטוקול זה מספק שיטה אחידה עבור ניסויים דחייה ביצה דומות.

Video: Probing the Limits of Egg Recognition Using Egg Rejection Experiments Along Phenotypic Gradients

Upright Imaging of Drosophila Egg Chambers

Drosophila melanogaster oogenesis provides an ideal context for studying varied developmental processes since the ovary is relatively simple in architecture, is well-characterized, and is amenable to genetic analysis. Each egg chamber consists of germ-line cells surrounded by a single epithelial layer of somatic follicle cells. Subsets of follicle cells undergo differentiation during specific stages to become several different cell types. Standard techniques primarily allow for a lateral view of egg chambers, and therefore a limited view of follicle cell organization and identity. The upright imaging protocol describes a mounting technique that enables a novel, vertical view of egg chambers with a standard confocal microscope. Samples are first mounted between two layers of glycerin jelly in a lateral (horizontal) position on a glass microscope slide. The jelly with encased egg chambers is then cut into blocks, transferred to a coverslip, and flipped to position egg chambers upright. Mounted egg chambers can be imaged on either an upright or an inverted confocal microscope. This technique enables the study of follicle cell specification, organization, molecular markers, and egg development with new detail and from a new perspective.

Upright Imaging of Drosophila Egg Chambers

The upright imaging method described in this protocol allows for the detailed visualization of the poles of a developing Drosophila melanogaster egg. This end-on view provides a new perspective into the arrangements and morphologies of multiple cell types in the follicular epithelium.

הדמיה זקופה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; לשכות ביצה

Drosophila melanogaster oogenesis provides an ideal context for studying varied developmental processes since the ovary is relatively simple in ...

Developmental Biology

Functional Cloning Using a Xenopus Oocyte Expression System

Identification of genes responsible for embryonic induction poses a number of challenges; to name a few, secreted molecules of interest may be low in abundance, may not be secreted but tethered to the signaling cell(s), or may require the presence of binding partners or upstream regulatory molecules. Thus in a search for gene products capable of eliciting an early lens-inductive response in competent ectoderm, we utilized an expression cloning system that would allow identification of paracrine or juxtacrine factors as well as transcriptional or other regulatory proteins. Pools of mRNA were injected into Xenopus oocytes, and responding tissue placed directly on the oocytes and co-cultured. Following functional cloning of ldb1 from a neural plate stage cDNA library based on its ability to elicit the expression of the early lens placode marker foxe3 in lens-competent animal cap ectoderm, we characterized the mRNA expression pattern, and assayed developmental progression following overexpression or knockdown of ldb1. This system is suitable in a very wide variety of contexts where identification of an inducer or its upstream regulatory molecules is sought using a functional response in competent tissue.

Functional Cloning Using a Xenopus Oocyte Expression System

We describe a Xenopus oocyte and animal cap system for the expression cloning of genes capable of inducing a response in competent ectoderm, and discuss techniques for the subsequent analysis of such genes. This system is useful in the functional identification of a wide range of gene products.

שיבוט פונקציונלי שימוש<em&gt; Xenopus</emמערכת ביטוי ביצית&gt;

Identification of genes responsible for embryonic induction poses a number of challenges; to name a few, secreted molecules of interest may be low in ...

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

The study of development has been greatly aided by the use of the chick embryo as an experimental model.  The ease of accessibility of the embryo has allowed for experiments to map cell fates using several approaches, including chick quail chimeras and focal dye labeling.  In addition, it allows for molecular perturbations of several types, including placement of protein-coated beads and introduction of plasmid DNA using in ovo electroporation.  These experiments have yielded important data on the development of the central and peripheral nervous systems.  For many of these studies, it is necessary to open the eggshell and reclose it without perturbing the embryo's growth.  The embryo can be examined at successive developmental stages by re-opening the eggshell.  While there are several excellent methods for opening chicken eggs, in this article we demonstrate one method that has been optimized for long survival times.  In this method, the egg rests on its side and a small window is cut in the shell.  After the experimental procedure, the shell is used to cover the egg for the duration of its development.  Clear plastic tape overlying the eggshell protects the embryo and helps retain hydration during the remainder of the incubation period.  This method has been used beginning at two days of incubation and has allowed survival through mature embryonic ages.

The ease of accessibility of the embryo has allowed for experiments to map cell fates using several approaches, including chick quail chimeras and focal dye labeling. In this article we demonstrate one egg preparation method that has been optimized for long survival times.

עוף Windowing ביצים למחקרים התפתחותיים

The study of development has been greatly aided by the use of the chick embryo as an experimental model.  The ease of accessibility of the embryo has ...

Biology

Identification of Critical Conditions for Immunostaining in the Pea Aphid Embryos: Increasing Tissue Permeability and Decreasing Background Staining

The pea aphid Acyrthosiphon pisum, with a sequenced genome and abundant phenotypic plasticity, has become an emerging model for genomic and developmental studies. Like other aphids, A. pisum propagate rapidly via parthenogenetic viviparous reproduction, where the embryos develop within egg chambers in an assembly-line fashion in the ovariole. Previously we have established a robust platform of whole-mount in situ hybridization allowing detection of mRNA expression in the aphid embryos. For analyzing the expression of protein, though, established protocols for immunostaining the ovarioles of asexual viviparous aphids did not produce satisfactory results. Here we report conditions optimized for increasing tissue permeability and decreasing background staining, both of which were problems when applying established approaches. Optimizations include: (1) incubation of proteinase K (1 &#181;g/ml, 10 min), which was found essential for antibody penetration in mid- and late-stage aphid embryos; (2) replacement of normal goat serum/bovine serum albumin with a blocking reagent supplied by a Digoxigenin (DIG)-based buffer set and (3) application of methanol rather hydrogen peroxide (H2O2) for bleaching endogenous peroxidase; which significantly reduced the background staining in the aphid tissues. These critical conditions optimized for immunostaining will allow effective detection of gene products in the embryos of A. pisum and other aphids.

A protocol of whole-mount immunostaining on aphid embryos is presented, in which critical conditions for decreasing background staining and increasing tissue permeability are addressed. These conditions are specifically developed for effective detection of protein expression in the embryonic tissues of aphids.

זיהוי של תנאים קריטיים לImmunostaining באפונה בכנימות עוברים: הגדלת רקמות חדירות והפחתת מכתים רקע

The pea aphid Acyrthosiphon pisum, with a sequenced genome and abundant phenotypic plasticity, has become an emerging model for genomic and developmental ...

Injecting Gryllus bimaculatus Eggs

Altering gene function in a developing organism is central to different kinds of experiments. While tremendously powerful genetic tools have been developed in traditional model systems, it is difficult to manipulate genes or messenger RNA (mRNA) in most other organisms. At the same time, evolutionary and comparative approaches rely on an exploration of gene function in many different species, necessitating the development and adaptation of techniques for manipulating expression outside currently genetically tractable species. This protocol describes a method for injecting reagents into cricket eggs to assay the effects of a given manipulation on embryonic or larval development. Instructions for how to collect and inject eggs with beveled needles are described. This relatively straightforward technique is flexible and potentially adaptable to other insects. One can gather and inject dozens of eggs in a single experiment, and survival rates for buffer-only injections improve with practice and can be as high as 80%. This technique will support several types of experimental approaches including injection of pharmacological agents, in vitro capped mRNA to express genes of interest, double-stranded RNA (dsRNA) to achieve RNA interference, use of clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) in concert with CRISPR-associated protein 9 (Cas9) reagents for genomic modification, and transposable elements to generate transient or stable transgenic lines.

Injecting Gryllus bimaculatus Eggs

Here we present a protocol to inject cricket eggs, a technique which serves as a foundational method in many experiments in the cricket, including, but not limited to, RNA interference and genomic manipulation.

הזרקת גרללוס ביצי ביצה

Altering gene function in a developing organism is central to different kinds of experiments. While tremendously powerful genetic tools have been ...

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. When selecting sites to deposit their eggs, female flies are capable of ranking the relative attractiveness of their options and choosing the &#34;greater of two goods.&#34; However, most egg-laying preference assays are not practical if one wants to take a systematic genetic screening approach to search for the circuit basis underlying this simple decision-making process, as they are population-based and laborious to set up. To increase the throughput of studying of egg-laying preferences of single females, we developed custom chambers that each can simultaneously assay egg-laying preferences of up to thirty individual flies as well as a protocol that ensures each female has a high egg-laying rate (so that their preference is readily discernable and more convincing). Our approach is simple to execute and produces very consistent results. Additionally, these chambers can be equipped with different attachments to allow video recording the egg-laying animals and to deliver light for optogenetics studies. This article provides the blueprints for fabricating these chambers and the procedure for preparing the flies to be assayed in these chambers.

High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster

This protocol describes a high throughput assay for testing egg-laying preferences of Drosophila melanogaster at single-animal resolution. This assay provides a simple, efficient, and scalable platform to identify genes and circuit components that control a simple decision-making process.

Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט<em&gt; תסיסנית</em

Recently, egg-laying preference of Drosophila has emerged as a genetically tractable model to study the neural basis of simple decision-making processes. ...

Neuroscience

A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae

Many animals, including the fruit fly, Drosophila melanogaster, are capable of discriminating minute differences in&#160;environmental temperature, which enables them to seek out their preferred thermal landscape. To define the temperature preferences of larvae over a defined linear range, we developed an assay using a temperature gradient. To establish a single-directional gradient, two aluminum blocks are connected to independent water baths, each of which controls the temperature of individual blocks. The two blocks set the lower and upper limits of the gradient. The temperature gradient is established by placing an agarose-coated aluminum plate over the two water-controlled blocks so that the plate spans the distance between them. The ends of the aluminum plate that is set on the top of the water blocks defines the minimum and maximum temperatures, and the regions in-between the two blocks form a linear temperature gradient. The gradient assay can be applied to&#160;larvae of different ages and can be used to identify mutants that exhibit phenotypes, such as those with mutations affecting genes encoding TRP channels and opsins, which are required for temperature discrimination.

A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae

Here, we present a protocol to determine the preferred environmental temperature of Drosophila larvae using a continuous thermal gradient.

וזמינותו שינוי טמפרטורה כדי לקבוע העדפות תרמי של הזחלים דרוזופילה

Many animals, including the fruit fly, Drosophila melanogaster, are capable of discriminating minute differences in&#160;environmental temperature, which ...

Drosophila Egg Collection and Dechorionation: A Method to Remove the Outermost Egg Layer

Source: Koyle, M. L., et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/54219/" target="_blank">Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions</a>. J. Vis. Exp. (2016).
The Drosophila embryo is surrounded by protective outer membranes. To gain access to the embryo, the chorion&#8211;the outermost of the membranes&#8211;is often removed. This video describes a commonly used method of dechorionation using sodium hypochlorite. The example protocol demonstrates the procedure while employing sterile techniques necessary for axenic or gnotobiotic animal rearing.

דרוזופילה איסוף ביצים ודכוריוניציה: שיטה להסרת שכבת הביצה החיצונית ביותר

Source: Koyle, M. L., et al. Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions. J. Vis. Exp. (2016).
The Drosophila ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Drosophila melanogaster (fruit fly)

Embryo

Mating and Egg Staging: A Method to Generate Embryos and Sort Them by Developmental Stage

Source: Hostelley T.L., et al. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/56187/" target="_blank">Sample Preparation and Analysis of RNASeq-based Gene Expression Data from Zebrafish</a>. J. Vis. Exp. (2017)
The article describes a protocol to generate zebrafish embryos through natural mating and sorting their developmental stages. The protocol is used further for analysis of pancreatic &#946;-cells by using transgenic fishes.

הזדווגות וביציות בימוי: שיטה ליצירת עוברים ומייונם לפי שלב התפתחותי

Source: Hostelley T.L., et al. Sample Preparation and Analysis of RNASeq-based Gene Expression Data from Zebrafish. J. Vis. Exp. (2017)
The article ...

Danio rerio (zebrafish)

Egg Laying Assay: A Method to Quantify the Egg-Laying Behavior of C. elegans

Source: Lee, S. Y. and Kang, K. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/video/60419/measuring-effects-bacteria-chemicals-on-intestinal-permeability">Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of&#160;Caenorhabditis elegans</a>.&#160;J. Vis. Exp. (2017).
C. elegans egg-laying behavior can provide important information in developmental, reproductive, and anatomical studies.&#160; This video introduces the important steps of an egg laying assay and shows a sample experiment in which a drug is tested for reproductive toxicity.

בדיקת הטלת ביצים: שיטה לכימות התנהגות הטלת הביצים של C. elegans

Source: Lee, S. Y. and Kang, K. Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of&#160;Caenorhabditis elegans.&#160;J. Vis. Exp. 
...

חיטוט מעבר לגבולות ביצים זיהוי באמצעות ניסויים דחייה ביצה לאורך מעברי צבע פנוטיפי

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

הדמיה זקופה של

שיבוט פונקציונלי שימוש