Name: differential scanning calorimetry — a method for assessing the thermal stability and conformation of protein antigen
Uploaded: 2017-03-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Differential Scanning Calorimetry â€” A Method for Assessing the Thermal Stability and Conformation of Protein Antigen at JoVE.com

הכותבים הם מאוד אסיר תודה ליוסף מנצ&#39;יני (לשעבר עם GE Healthcare), פאבל Czudec, תומאס קייג (מוגבל Malvern מכשירים) עבור תפקידם ההתקנה וההדרכה על קלורימטר סריקת הפרש, Sasmit Deshmukh וובסטר Magcalas לדיונים שלהם.

1. כלי Start-up <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את קלורימטר הסריקה דיפרנציאלי להגביר את הלחץ בתאים לדכא רתיחה של הדגימות וכן למנוע היווצרות בועות בטמפרטורות גבוהות. זו מושגת בדרך כלל על ידי אספקת חנקן לתוך המערכת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם החומר המהווים של התא (למשל, טנטלום, זהב, פלטינה, וכו &#39;), לכוון את הלחץ של אספקת גז חנקן על פי הלחץ המומלץ על ידי היצרן כדי למנוע נזק לתא. לדוגמה, להגדיר את הלחץ של אספקת גז חנקן עד 45 psi עבור המכשיר בשימוש לפתח הליך זה, ואת הלחץ מעל 80 psi עלולה לגרום נזק לתא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי כל מאגרי חומר ניקוי מלאים עד הנפח הנדרש. חומרי ניקוי נדרשו לכלול חומרי ניקוי ומים לשטוף ולנקות את התא בהתאמה אחרי כל סיבוב מדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הטמפרטורה של התא מחזיק מדגםלערך מתאים, רצוי 5 מעלות צלזיוס, כדי לשמור על שלמות המדגם לפני להתנסות. </li></ol> לדוגמא כנה 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Dialyze מדגם נגד החיץ אשר ישמש כנקודת ההתייחסות לצורך הניסוי. לחלופין, חיץ elution שנאספו על השלב האחרון של טיהור חלבונים (elution טור כלומר) ניתן להשתמש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את הריכוז של מדגם החלבון בשיטת קביעת ריכוז החלבון המתאימה ביותר כגון שיטת Kjedahl 33 או לורי שיטה 34. לשם השוואה אובייקטיבית של תוצאות, השתמש באותה השיטה בעקביות באותו המחקר. טווח הריכוז הנדרש עשוי להשתנות בהתאם לדגם של המכשיר. עבור המכשיר בשימוש בפרוטוקול זה, טווח עבודה עדיפה הוא 0.5 - 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגה למאגר מדגם ועיון בריק להיפטר microbubbles שיכולים לגרום נפח inaccurACY. שלב זה ניתן לדלג על מודלים קלורימטר חדשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש micropipette וטיפים סטרילי בתוך ארון biocontainment זרימה למינרית, טען את דגימות למאגר שלהם בזוגות לתוך 96 צלחות גם תואם עם המכשיר. מלא את שני הזוגות הראשונים של בארות עם חיץ ושני הזוגות האחרונים עם מים למאגר החיץ וסריקת המים בהתאמה. סריקות-חיץ חיץ לאמת את התאמתו של המכשיר לפני לדגום מדידה (הערכה כלומר טעות מכשור) וכן להקים בסיס; בעוד סריקות מים מנוהלות לנקות את התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסה את צלחת 96-היטב עם סרט אטים, ולהבטיח כי הבארות נסגרות כמו שצריך לפני שלקחת את הצלחת מתוך קבינט הבטיחות הביולוגי כדי למנוע זיהום מדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את הצלחת בתא מחזיק המדגם בכיוון הנכון. </li></ol> 3. הגדרת פרמטר הניסיון הערה: בהתאם instrumentation, ניתן לטעון דגימות לתוך התא באופן ידני או באמצעות מזרק, או באופן אוטומטי באמצעות autosampler. במקרה זה (כלומר הגדרה תעשייתית), גידול autosampler משמש כדי לחסוך זמן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות תוכנת הרכישה, הזן את המידע המדגם לפי סדר הצלחת הועמסה כאמור בסעיף 2.4. זן ריכוזים אם זמין, אחרת, זן ערכי ריכוז לתוך תוכנת ניתוח לפני ניתוח נתונים (סעיף 4.2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר באפשרות המבטיח ניקוי של תאים עם חומר ניקוי לפני כל סריקה מדגם, אשר צריכה להיות מלווה בצעדים לשטוף במים מרובים כדי להבטיח שאין שאריות דטרגנט נותר בתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הטמפרטורה ההתחלתית של הניסוי ל -20 מעלות צלזיוס, אבל זה יכול להשתנות בהתאם לידע הקודם של המדגם. עבור חלבונים ידועים, טמפרטורת התחלה שנקבעה מראש ניתן להשתמש, בעוד טמפרטורת התחלה נמוכה יכולה להיות מיושמת על דגימות ידועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את הטמפרטורה הסופיתהניסוי, למשל 100 ° C. הטמפרטורה הסופית עשויה להשתנות בהתאם על ידע קודם של המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את קצב הסריקה של הניסוי, למשל 60 ° C / שעה, המהווה את קצב הסריקה הטיפוסי. עם זאת, קצב סריקה עשוי להשתנות תלוי בידע מוקדם של המדגם, למשל 90 ° C / שעה, או 120 ° C / שעה. מומלץ לסרוק דגימות ידועות בשיעורי סריקה שונים כדי להעריך את קינטיקה של התגלגלות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות סריקה חוזרות לחקור את ההפיכות של תרמית התגלגלות. השתלשלות חלבון נחשבת הפיכה אם אנתלפיה שהתקבל עבור הסריקה השנייה הוא לפחות 80% מהשווי האנתלפיה עבור הסריקה הראשונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבעו את טרמוסטט שלאחר הניסוי עד 10 מעלות צלזיוס כדי לשמור על שלמות התאים של קלורימטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי פרמטרי הגדרת הניסוי נכונים לפני ביצוע הניסוי. אם הכל במקום, להתחיל בניסוי. </li></ol> 4. נתוניםalysis <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחזור נתונים גולמיים מהניסוי ובחר מדגם אחד בכל פעם לניתוח. סריקת התייחסות לחסר, חיץ כלומר, מן הסריקה המדגמת. הערה: חיסור הפניה מתבצע באופן אוטומטי על ידי דגמים חדשים של מכשירי DSC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זן ערך ריכוז מדגם אם זה הושמט כאמור בסעיף 3.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם ולחסר הבסיס מן thermogram רכשה לתת דין וחשבון על הבדלים ביכולות החום של מדינות שקופל ונפתח של חלבון אשר נגרמת על ידי חשיפה של קבוצות הידרופובי למים על התגלגלות. לינארי או הולם עקום מעוקב ניתן ליישם בהתאם לצורה של פרופיל DSC למדגם. לקבלת עקביות, אותו סוג של התאמה צריך לשמש במהלך מחקר, מחקר יציבות בזמן אמת למשל. צעד זה נדרש כדי לעבד את העקומה לשילוב השיא להשיג אנתלפיה של מעבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע אינטגרציה שיא באמצעות שאינו ליניארי לפחות בכושר מרובע. בהתבסס על המוצריידע ליישם שתי מדינות לשני עמים או מודל הלא שתי מדינות לשני עמים. שתי מדינות לשני עמי מודל יכול לשמש עבור מעברים תרמיים שיתופיים אחת, ועבור חלבונים לא-מוכרים, להחיל מודל מדינה ללא ושתיים עד ידע מוצר נוסף זמין. במידת צורך, להתאים עקומה הולמת באמצעות הפונקציה ההולמת העקומה איטרטיבי של של התוכנה והציוד עד שיגיעו השווי צ&#39;י המרובע נשאר קבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התוצאות שהתקבלו יציג את הערכים עבור נקודת האמצע של טמפרטורות המעבר (TM), אנתלפיה קלוריות (ΔH), ו אנתלפיה van&#39;t הוף (ΔH VH) של המדגם. </li></ol>

<ol>
	<li>Gill, P., Moghadam, T. T., Ranjbar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+scanning+calorimetry+techniques:+applications+in+biology+and+nanoscience.">Differential scanning calorimetry techniques: applications in biology and nanoscience.</a> J. Biomol. Tech. 21 (4), 167-193 (2010).</li><li>Watson, E. S., O'Neil, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+microcalorimeter.">Differential microcalorimeter.</a> Patent. , (1966).</li><li>O'Neill, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Analysis+of+a+Temperature-Controlled+Scanning+Calorimeter.">The Analysis of a Temperature-Controlled Scanning Calorimeter.</a> Anal. Chem. 36 (7), 1238-1245 (1964).</li><li>O'Neil, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Specific+Heat+Functions+by+Differential+Scanning+Calorimetry.">Measurement of Specific Heat Functions by Differential Scanning Calorimetry.</a> Anal. Chem. 38 (10), 1331-1336 (1966).</li><li>Privalov, P. L., Monaselidze, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mol. Biol. 6, 7-33 (1975).</li><li>Privalov, P. L., Plotnikov, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiabatic+differential+microcalorimeter.">Adiabatic differential microcalorimeter.</a> &#1040;&#1076;&#1080;&#1072;&#1073;&#1072;&#1090;&#1080;&#1095;&#1077;&#1089;&#1082;&#1080;&#1081; &#1076;&#1080;&#1092;&#1092;&#1077;&#1088;&#1077;&#1085;&#1094;&#1080;&#1072;&#1083;&#1100;&#1085;&#1099;&#1081; &#1084;&#1080;&#1082;&#1088;&#1086;&#1082;&#1072;&#1083;&#1086;&#1088;&#1080;&#1084;&#1077;&#1090;&#1088;. , (1970).</li><li>Andronikashvili, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorimetric+study+of+the+nature+of+the+intramolecular+fusion+of+collagen,+isolated+from+transplantable+tumor.">Calorimetric study of the nature of the intramolecular fusion of collagen, isolated from transplantable tumor.</a> Dokl. Akad. Nauk. 183 (1), 212-214 (1968).</li><li>Andronikashvili, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Conformational Changes of Biopolymers in Solution. , 171-173 (1973).</li><li>Andronikashvili, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+transformation+and+changes+in+various+physic-chemical+properties+of+macromolecules+and+supramolecular+structures.">Malignant transformation and changes in various physic-chemical properties of macromolecules and supramolecular structures.</a> Biofizika. 32 (5), 782-799 (1987).</li><li>Velicelebi, G., Sturtevant, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamics+of+the+denaturation+of+lysozyme+in+alcohol-water+mixtures.">Thermodynamics of the denaturation of lysozyme in alcohol-water mixtures.</a> Biochemistry. 18 (7), 1180-1186 (1979).</li><li>Sturtevant, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+capacity+and+entropy+changes+in+processes+involving+proteins.">Heat capacity and entropy changes in processes involving proteins.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 74 (6), 2236-2240 (1977).</li><li>Sturtevant, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+applications+of+differential+scanning+calorimetry.">Biochemical applications of differential scanning calorimetry.</a> Annu. Rev. of Phys. Chem. 38, 463-488 (1987).</li><li>Jackson, W. M., Brandts, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamics+of+protein+denaturation.+A+calorimetric+study+of+the+reversible+denaturation+of+chymotrypsinogen+and+conclusions+regarding+the+accuracy+of+the+two-state+approximation.">Thermodynamics of protein denaturation. A calorimetric study of the reversible denaturation of chymotrypsinogen and conclusions regarding the accuracy of the two-state approximation.</a> Biochem. 9 (11), 2294-2301 (1970).</li><li>Privalov, P. L., Khechinashvili, N. N., Atanasov, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamic+analysis+of+thermal+transitions+in+globular+proteins.+I.+Calorimetric+study+of+chymotrypsinogen,+ribonuclease+and+myoglobin.">Thermodynamic analysis of thermal transitions in globular proteins. I. Calorimetric study of chymotrypsinogen, ribonuclease and myoglobin.</a> Biopolymers. 10 (10), 1865-1890 (1971).</li><li>Privalov, P. L., Khechinashvili, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+thermodynamic+approach+to+the+problem+of+stabilization+of+globular+protein+structure:+a+calorimetric+study.">A thermodynamic approach to the problem of stabilization of globular protein structure: a calorimetric study.</a> J. Mol. Biol. 86 (3), 665-684 (1974).</li><li>Privalov, P. L., Potekhin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+microcalorimetry+in+studying+temperature-induced+changes+in+proteins.">Scanning microcalorimetry in studying temperature-induced changes in proteins.</a> Methods Enzymol. 131, 4-51 (1986).</li><li>Veprintseva, O. D., Emelyanenko, V. I., Konstantinova, V. V., Shnyrov, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+importance+of+structural+changes+in+bacteriophage+T4+tail+proteins.">The importance of structural changes in bacteriophage T4 tail proteins.</a> Biofizika. 33, 954-961 (1988).</li><li>Shutilova, N., Semenova, G., Klimov, V., Shnyrov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-induced+functional+and+structural+transformations+of+the+photosystem+II+oxygen-evolving+complex+in+spinach+subchloroplast+preparations.">Temperature-induced functional and structural transformations of the photosystem II oxygen-evolving complex in spinach subchloroplast preparations.</a> Biochem. Mol. Biol. Int. 35 (6), 1233-1243 (1995).</li><li>Sanina, N. M., Kostetsky, E. Y. a., Shnyrov, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorimetric+investigation+of+phosphatidyl+choline+from+membranes+of+marine+invertebrates.">Calorimetric investigation of phosphatidyl choline from membranes of marine invertebrates.</a> J. Evol. Biokhim. Physiol. 23, 451-460 (1987).</li><li>Oreshkin, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conformational+changes+in+the+muscle+proteins+of+cured+beef+during+heating.">Conformational changes in the muscle proteins of cured beef during heating.</a> Meat Science. 16 (4), 297-305 (1986).</li><li>Kirkitadze, M., Hu, J., Tang, M., Carpick, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qualification+of+a+differential+scanning+calorimetry+method+for+biophysical+characterization+of+monoclonal+antibodies+and+protein+vaccine+antigens.">Qualification of a differential scanning calorimetry method for biophysical characterization of monoclonal antibodies and protein vaccine antigens.</a> Pharm. Bioprocess. 2 (6), 491-498 (2014).</li><li>Jiskoot, W., Daan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods for structural analysis of protein pharmaceuticals. 3, (2005).</li><li>Plotnikov, V. V., Brandts, M., Lin, L. N., Brandts, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+ultrasensitive+scanning+calorimeter.">A new ultrasensitive scanning calorimeter.</a> Anal. Biochem. 250 (2), 237-244 (1997).</li><li>Plotnikov, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+autosampling+differential+scanning+calorimeter+instrument+for+studying+molecular+interactions.">An autosampling differential scanning calorimeter instrument for studying molecular interactions.</a> Assay Drug Dev. Technol. 1 (1), 83-90 (2002).</li><li>Freire, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+scanning+calorimetry.">Differential scanning calorimetry.</a> Protein Stability and Folding: Theory and Practice. Method in Molecular Biology. 40, 191-218 (1995).</li><li>Freire, E., van Osdol, W. W., Mayorga, O. L., Sanchez-Ruiz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calorimetrically+determined+dynamics+of+complex+unfolding+transitions+in+proteins.">Calorimetrically determined dynamics of complex unfolding transitions in proteins.</a> Annu. Rev. Biophys. Biophys. Chem. 19, 159-188 (1990).</li><li>Johnson, C. R., Morin, P. E., Arrowsmith, C. H., Freire, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermodynamic+analysis+of+the+structural+stability+of+the+tetrameric+oligomerization+domain+of+p53+tumor+suppressor.">Thermodynamic analysis of the structural stability of the tetrameric oligomerization domain of p53 tumor suppressor.</a> Biochemistry. 34 (16), 5309-5316 (1995).</li><li>Kasimova, M. R., Sam, J. M., Freire, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+conformational+equilibrium+of+human+growth+hormone.">The conformational equilibrium of human growth hormone.</a> J. Mol. Biol. 277 (2), 409-418 (1998).</li><li>Saboury, A. A., Moosavi-Movahedi, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarification+of+calorimetric+and+van't+hoff+enthalpies+for+evaluation+of+protein+transition+states.">Clarification of calorimetric and van't hoff enthalpies for evaluation of protein transition states.</a> Biochem Edu. 22 (4), 210-211 (1994).</li><li>Privalov, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcalorimetry+of+proteins+and+their+complexes.">Microcalorimetry of proteins and their complexes.</a> Protein Structure, Stability, and Interactions. Method in Molecular Biology. 490, 1-39 (2009).</li><li>Dehghan-Nayeri, N., Rezaei-Tavirani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Interpretation+of+Protein+Structure+Through+Relationship+of+Melting+Point+(Tm)+and+Enthalpy+of+Unfolding+(&#916;HU).">The Interpretation of Protein Structure Through Relationship of Melting Point (Tm) and Enthalpy of Unfolding (&#916;HU).</a> Int J Anal Pharma Biomed Sci. 4 (1), 47-50 (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+testing+of+new+drug+substances+and+products.">Stability testing of new drug substances and products.</a> Guideline, ICH Harmonised Tripartite. 1 (2), (2003).</li><li>Kjeldahl, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neue+Methode+zur+Bestimmung+des+Stickstoffs+in+organischen+K&#246;rpern+(New+method+for+the+determination+of+nitrogen+in+organic+substances).">Neue Methode zur Bestimmung des Stickstoffs in organischen K&#246;rpern (New method for the determination of nitrogen in organic substances).</a> Zeitschrift f&#252;r analytische Chemie. 22 (1), 366-383 (1883).</li><li>Lowry, O. H., Rosebrough, N. J., Farr, A. L., Randall, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+measurement+with+the+Folin+phenol+reagent.">Protein measurement with the Folin phenol reagent.</a> J. Biol. Chem. 193 (1), 265-275 (1951).</li><li>H&#214;hne, G., Hemminger, W., Flammersheim, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Differential Scanning Calorimetry. , (2003).</li><li>Porter, L. L., George, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+thermodynamic+definition+of+protein+domains.">A thermodynamic definition of protein domains.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 109 (24), 9420-9425 (2012).</li><li>Frokjaer, S., Daniel, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+drug+stability:+a+formulation+challenge.">Protein drug stability: a formulation challenge.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4, 298-306 (2005).</li><li>Johnson, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+scanning+calorimetry+as+a+tool+for+protein+folding+and+stability.">Differential scanning calorimetry as a tool for protein folding and stability.</a> Arch. Biochem. Biophys. 531, 100-109 (2013).</li><li>Chiu, M. H., Elmar, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+scanning+calorimetry:+an+invaluable+tool+for+a+detailed+thermodynamic+characterization+of+macromolecules+and+their+interactions.">Differential scanning calorimetry: an invaluable tool for a detailed thermodynamic characterization of macromolecules and their interactions.</a> J. Pharm. Bioallied Sci. 3 (1), 39-59 (2011).</li><li>Hirst, J. D., Charles, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Helicity,+circular+dichroism+and+molecular+dynamics+of+proteins.">Helicity, circular dichroism and molecular dynamics of proteins.</a> J. Mol. Biol. 243 (2), 173-178 (1994).</li><li>Kirkitadze, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+modules+of+the+vaccinia+virus+complement+control+protein+are+not+in+extensive+contact.">Central modules of the vaccinia virus complement control protein are not in extensive contact.</a> Biochem. J. 344 (1), 167-175 (1999).</li><li>Freire, E., Sch&#214;n, A., Hutchins, B. M., Brown, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+denaturation+as+a+tool+in+the+formulation+optimization+of+biologics.">Chemical denaturation as a tool in the formulation optimization of biologics.</a> Drug disc today. 18 (19), 1007-1013 (2013).</li><li>Wen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+differential+scanning+calorimetry+for+thermal+stability+analysis+of+proteins:+qualification+of+DSC.">Applications of differential scanning calorimetry for thermal stability analysis of proteins: qualification of DSC.</a> J. Pharm. Sci. 101 (3), 955-964 (2012).</li></ol>

כל הכותבים הם עובדים ב סאנופי פסטר. העבודה מומנה על ידי סנופי פסטר, ודמי פרסום מאמר וידאו זה שולמו על ידי סאנופי פסטר. יש המחברים שום נטיות רלוונטיות או מעורבות פיננסית עם כל ארגון או גוף שיש לו סכסוך כספי עם הנושא או חומרים דנו בכתב היד. אלה כוללים תעסוקה, חברות ייעוץ, בעלות מניות או אופציות, או תמלוגים. אין סיוע בכתב נוצל בייצור של כתב היד הזה.

הליך זה כבר שולב בהצלחת חבילות בדיקת אפיון שונות, כוללים מחקרי יציבות השוואת מוצר 21. במחקרי יציבות בזמן אמת, DSC משמש כדי לפקח T מ, כמו גם להעריך את F א הביולוגי לאורך זמן כדי לקבוע את חיי המדף שלהם. באשר השוואת מוצר, הוא משמש כדי להעריך את ההשפעה של תהליך ושינוי מתקן וכן השפעת צעדי ייצור מפתח על קונפורמציה המבני של המון מיוצר. זה בדרך כלל כולל ההשוואה הישירה של ΔH של הרבה מיוצר למוצר הפנית כאזור המוצר האידיאלי. בנוסף, DSC הוכיחה להיות כלי אנליטי שימושי ללימודי ניסוח מוצר 37. ה- T מ &#39;של חלבון מאגרים שונים בריכוזים שונים שניתן להשתמש בהם כדי לקבוע את הניסוח כי ומציע את היציבות ביותרהחלבון. כדי להבטיח את האמינות של השיטה הזאת ואת האובייקטיביות של תוצאותיה, חשוב לשמור פרמטרי בדיקה עקביים מהריצה לרוץ בתוך אותו המחקר (למשל, מחקר ניסוח חיסון). עם זאת, ההליך יכול להיות שונה כדי להכיל הבדלים בתכונות הפיזיות של חלבונים שונים. דוגמא שינוי שניתן לעשות היא לשנות את קצב הסריקה של הניסוי 38, 39. חלבונים כי היו מועדים אגרגטים להרכיב כאשר מחומם נבחנו בקצב סריקה מהיר יותר (למשל, 120 ° C / שעה), כדי למנוע את התרומה של אגרגטים לפרופיל המעבר התרמי, כמו גם סתימה בנימי קלורימטר. ראוי לציין כי סריקת קצב יכול להשפיע על תוצאות ניסוי DSC 38. התרחבותה של שיא מעבר התרמית נצפתה עם הגדלת שיעורי סריקה בחלק פרוחלבונים; עם זאת, T מ &#39;נשאר קבוע למדי 38. יתר על כן, צעדי דיאליזת degassing להכנת מדגם הם גם מאוד קריטיים עבור תוצאות מדויקות 31. דיאליזה מבטיחה כי ההבדל היחיד בהרכב המדגם למאגר הוא החלבון; וכך, כל עודף החום נספג על ידי המדגם ניתן לייחס קיבולת החום של החלבון. Degassing מבטיחה ניתוח נפח מדויק, כמו אקסטרפולציה של פרמטר תרמודינמי מניחה שאירוע ההתגלגלות מתרחש תחת נפח קבוע ולחץ 31. החלק לחץ מתמיד של ההנחה היא מוסברת על ידי שמירת לחץ החנקן של מערכת כאמור בסעיף 1.1 של ההליך. בהשוואה לשיטות אחרות של בקביעת יציבותה של תצורות חלבון כגון מעגלי dichroism (CD) פלואורסצנטי Spectroscopies, DSC מציעה מספר יתרונות בתוך comהגדרה מסחרית לרבות חיסכון בעלויות ובזמן. ראשית, העיצוב adiabatic של קלורימטר סריקה ההפרש מאפשרת מדידה של יציבות תרמית עם דיוק טמפרטורה טובה יותר לעומת מדידות עם מכשור עבור דיסקים CD ו הקרינה Spectroscopies 6. שנית, בניגוד CD, את הדיוק של נתוני DSC אינו תלוי helicity של החלבון 39, 40; עם זאת, CD מספק מידע נוסף על ההתגלגלות של המבנה מהשני, אשר יהיה חינם אל DSC 41. בנוסף, שמירת לחץ קבוע של מערכת DSC מאפשר לבדיקה עם טווח רחב של טמפרטורות ללא רותחים המדגם; וכך, מגוון רחב של חלבונים ניתן לבדוק על ידי DSC. בעוד DSC היא גישה מהירה יחסית וישירה כדי לקבוע את יציבות התרמית של תרופות ביולוגיות, זה לא בלי מגבלות. ראשית, הבסיסקו צעד חיסור מציג צורה כלשהי של חוסר עקביות אנושית לתוך ניתוח נתונים הגולמי; וכך, וריאציות בתוצאות ניתן להבחין בין משתמשים שונים. שנית, calorimeters סריקת ההפרש יש מגבלות ריכוז מינימאליות אשר עלול להיות קשה להשיג בקנה מידת ייצור בתפזורת. שלישית, ΔH של denaturation תרמית ההפיכה אינו מוחלט; מה שמרמז על כך נגזר ΔG (אינדיקטור של יציבות חלבון) בתרחישים דומים יכול להיות מטעה. יתר על כן, השיטה מתאימה ביותר דגימות מטוהרות. נוכחות של זיהומים עשויה גם לגרום שינוי T מ אם קיימת אינטראקציה עם החלבון תחת חקירה, או המראה של מעברי תרמית חדשים אם אין אינטראקציה. במקרה כל תכונות נוספות אלה על thermograms ניתן לייחס בטעות דגימות, ובכך להשפיע על הפרשנות של התוצאות. למרות מגבלות אלה, DSC נשאר שיטה אמינה שיכולה לספק מידע מפורט על התרמודינמית החלבון ה התגלגלות תהליך אם מיושם כהלכה 42. לסיכום, DSC מציע יתרון משמעותי ככלי הודעה קונפורמציה למוצרי חיסון הביניים שלהם. שני הפרמטרים, T מ &#39;ΔH, שנאספו עבור מערך של הרבה של אותו מוצר יכול להיות הבסיס האמפירי, שניתן להשתמש בהם כדי לבחון את ההשפעה של שינויים בתהליך, ניסוח, ותנאי אחסון על מבנה שלישוני ויציבות של חלבון אנטיגנים נגיפיים 21, 43.

סריקה calorimetry דיפרנציאלי (DSC) היא שיטה ניסיונית אשר מודד את ההבדל ישירות ספיגת אנרגיית חום המתרחשים קרוב משפחה מדגם עזר במהלך שינוי הטמפרטורה מוסדר 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 10,, 11, 12. שבוצעה במשך קלורימטר סריקת הפרש, השיטה כרוכה החדרת אנרגית חום לתוך תא מדגם תא התייחסות בו זמנית תוך הגדלת הטמפרטורה זהה של התאים הם לאורך זמן 2, 13,14. בשל הבדל בהרכב המדגם ואת ההתייחסות, כמות האנרגיה שונה תידרש כדי להעלות את הטמפרטורה של התאים 2, 12, 13. לפיכך, כמות העולה על האנרגיה הנדרשת כדי לפצות על הבדלי הטמפרטורה בין התאים נמדד בקורלציה ישירות תכונות תרמודינמיות ספציפיים של המדגם 1, 3. ב -1960, MJ אוניל וא ווטסון של פרקין אלמר פתחו את קלורימטר סריקת ההפרש הראשון למדוד את זרימת החום של חומרים מוצקים 2, 3, 4. במקביל, PL Privalov ו- DR Monaseldze EL של המכון לפיזיקה, הרפובליקה של גאורגיה (ברית המועצות לשעבר) יצר קלורימטר adiabatic ההפרש ייחודי שיכול לשמש FOr ביוכימיים מחקר 5, 6. בהמשך לכך, צוות של Andronikashvili במכון לפיסיקה, הרפובליקה של גאורגיה, דיווח קיבולת החום של ביומולקולות כגון חלבונים סיביים כדוריים, DNA, RNA באמצעות DSC 7, 8, 9. מספר צוותים בראשות Sturtevant 10, 11, 12, ברנדט 13, ו Privalov 14, 15, 16 מתמקדת בפיתוח של תיאוריה ויישומים מעשיים של DSC לחקור את הפרטים התרמודינמית של התגלגלות חלבון. שווי DSC בלימוד מבנים מולקולריים גדולים כמו פאגים, הכלורופלסט, גבישים נוזליים פוספוליפידים, וחלבוני בשר גם דווח 17 </<html> sup&gt;, 18, 19, 20. DSC הפכה כעת שבשגרה במחקר של תרופות ופיתוח עבור הערכת יציבות תרמית של ביומולקולות, במיוחד חלבונים 1, 21, 22. זהו בעיקר בשל התקדמות מבחינת רגישות ואוטומציה של המכשור המשמש לביצוע הניסוי 23, 24. כאן, התוצאה הסופית של הניסוי DSC, כלומר, קיבול חום טוחנת כפונקציה של הטמפרטורה, משמש כדי להעריך את הפרמטרים הבאים התרמודינמית (שינוי קיבול חום (ΔCp), אנתלפיה (ΔH), האנטרופיה (ΔS) אנרגיה חופשית, ו גיבס (ΔG)) באמצעות המשוואה הבאה: eq1.jpg &quot;/&gt; (1) <img alt="משוואה 2" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq2.jpg" /> (2) <img alt="משוואה 3" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq3.jpg" /> (3) <img alt="משוואה 4" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq4.jpg" /> (4) <img alt="משוואה 5" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq5.jpg" /> (5) איפה Cp נמדד קיבול חום; q הוא זרימת החום לתוך החומר למבחן; T 0 ו- T הם הטמפרטורות התחלתי וסופי של המעבר בהתאמה 22, 25. כמו כן ראוי לציין כי המשוואות לעיל חלות לחלבונים חד תחום שיכול לעבור מעבר של שתי מדינות והפיכות תרמית התגלגלות 22. ניתוח של חלבונים מורכבים יותר (למשל, חלבונים שאינם שתי מדינות לשני עמים, ו oligomers) hותעיף דווח על ידי ואח &#39;פריירה. 26; ג&#39;ונסון et al. 27; ו Kasimova et al. 28. על מנת לקבוע האם חלבון עובר המעבר של שתי מדינות או צורות ביניים במהלך denaturation תרמית, אנתלפיה נגזר באופן ניסיוני (ΔH; התייחס גם קאל ΔH אנתלפיה קלוריות כמו) מושווה אנתלפיה נגזר באמצעות המשוואה van&#39;t הוף כדלקמן (גם המכונה אנתלפיה van&#39;t הוף; ΔH VH): <img alt="משוואה 6" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq6.jpg" /> (6) איפה T מ &#39;היא הטמפרטורה האמצע של המעבר, R הוא קבוע הגזים האידיאלי (1.987 cal mol -1 K -1) ו- Y הוא חלק קטן מהאוכלוסייה חלבון במדינת פרש 16, 29. אםΔH VH שווה ΔH קאל; או ΔH VH / ΔH קאל שווה ל -1, אז החלבון עובר מעבר &quot;הכל או לא כלום&quot; (כלומר מעבר של שתי מדינות) 16, 25, 29. עם זאת, אם ΔH VH הוא פחות מ ΔH קאל; או ΔH VH / ΔH קאל הוא פחות מ 1, החלבון עובר מעבר הלא שתי מדינות לשני עמים 16, 25, 29. יחס ΔH VH / ΔH קאל גם תואם את חלקם של מבנה החלבון שנמס כיחידה שיתופית התרמודינמית או התחום 26. הפרמטרים התרמודינמית הנ&quot;ל כגון ΔG ו ΔH לספק מידע שימושי על יציבות התרמית של חלבונים, כולל תרופות ביולוגיות<html> 30. עם זאת, הדגש יהיה מונח על T מ &#39;ΔH בפרסום זה, כפי שהם על הערכים המדווחים עבור פרוטוקול זה. מ T היא טמפרטורת נקודת האמצע של המעבר, שבו המקופל והמדינות הפרשיות של החלבון הן בשיווי המשקל (כלומר, ΔG = 0) 25, 31. ככל T מ &#39;של חלבון, גבוה יותר יציבות תרמית שלה 31. ΔH תואמת את השטח מתחת לשיא (ים) של קיבול חום לעומת גרף טמפרטורה (הידוע גם בשם thermogram) שנוצר בסוף הניסוי DSC 16, 25. זוהי האנרגיה הנדרשת כדי לפגל חלבונים והוא יכול לשמש כדי להעריך את החלק היחסי פעיל (א F) בניסוח חלבון (כלומר, חלקם של חלבונים עם קונפורמציה פעיל מדגם) באמצעות המשוואה הבאה: jove_content &quot;&gt; <img alt="משוואה 7" src="/files/ftp_upload/55262/55262eq7.jpg" /> (7) איפה ΔH הוא אנתלפיה נגזר באופן ניסיוני של מדגם החלבון ו- Q הוא אנתלפיה שנקבע הפניה היטב מאופיינת או חלבון סטנדרטי 22. האמידה של F היא משמעותית לניטור היציבות בזמן האמת של מוצרים, כמו גם ביצוע מחקרי יציבות בתנאי קיצון כנדרשת בהנחיות ICH 32. גם השוואה של ΔH מספק מידע על הקומפקטיות של קונפורמציה מבנה שלישוני של חלבון 31. פרוטוקול זה מפרט נוהל להערכת יציבות התרמית של חלבונים בסביבה תעשייתית כבר נעשה שימוש נרחב לגיבוש חיסונים. הוא פותח באמצעות קלורימטר סריקת הפרש אוטומטי שיוצר f תוצאות לשחזוראו ריכוזי חלבון נמוך כמו 300 מיקרוגרם / מ&quot;ל.

<table><tbody><tr><td>Differential Scanning Calorimeter</td><td>Malvern Instruments Ltd</td><td>28428948 (Via GE Healthcare)</td><td>Has an autosampler for automated dispensing of samples into the cell to reduce human effort and errors.</td></tr><tr><td>Contrad 100</td><td>Decon Laboratories Inc</td><td>1504</td><td>Dilute with water to 20% before use</td></tr><tr><td>500 &amp;micro;L Polypropylene round bottom 96 well plate</td><td>Canadian Life Science</td><td>ML072100</td><td>Equivalent plates from other suppliers (&lt;em&gt;e.g.&lt;/em&gt;, VW) can also be used</td></tr><tr><td>MicroCal ThermoVac&amp;nbsp;</td><td>Malvern Instruments Ltd</td><td>N/Ap</td><td>provided with the Cap VP DSC</td></tr><tr><td>Biosafety cabinet&amp;nbsp;</td><td>Labconco</td><td>Logic+ - A2</td><td>biocontainment laminar flow cabinet for sample preparation</td></tr><tr><td>Slide-A-Lyzer dialysis cassette</td><td>Thermo Scientific</td><td>66810 or 66380</td><td>to equilibrate the sample and buffer</td></tr></tbody></table>

differential scanning calorimetry &#8212; a method for assessing the thermal stability and conformation of protein antigen

סריקת calorimetry דיפרנציאלי (DSC) הוא שיטה אנליטית אשר מודדת את קיבולת חום הטוחנת של דגימות כפונקציה של טמפרטורה. במקרה של דגימות חלבון, פרופילי DSC לספק מידע על יציבות תרמית, ובמידה מסוימת הוא מעין &quot;טביעת אצבע&quot; מבנית שיכול לשמש כדי להעריך קונפורמציה מבני. הדבר מתבצע באמצעות קלורימטר סריקת הפרש המודד את טמפרטורת מעבר התרמית (נמסה בטמפרטורה; T מ &#39;) ואת האנרגיה הנדרשת כדי לשבש את יחסי הגומלין לייצוב המבנה השלישוני (אנתלפיה; ΔH) של חלבונים. נעשות השוואות בין הניסוחים כמו גם הרבה ייצור, והבדלי ערכים הנגזרים להצביע על הבדלים יציבים תרמית קונפורמציה מבני. נתונים הממחישים את שימוש DSC בסביבה תעשייתית עבור מחקרי יציבות, כמו גם ניטור צעדי ייצור עיקריים מופיעים הוכחה ליעילות של פרו זהtocol. לשם השוואה לשיטות אחרות להערכת יציבות התרמית של תצורות חלבון, DSC היא חסכונית, דורשת כמה צעדי הכנת מדגם, וגם מספקת פרופיל התרמודינמית מלא של תהליך התגלגלות החלבון.

הנתונים הגולמיים מרוב ניסויי DSC מוצגים בתור שטף חום לעומת גרף טמפרטורה, כמו קלורימטר למעשה מודד את הפער בשיעור של זרימת חום לתוך התמיסה מדגם חיץ 35. לכן, אם שני התאים (כלומר תאי מדגם הפניה) מכילים פתרונות זהים במהלך ניסוי, את הנתונים הגולמיים מן הסריקה צריכים להיות קו ישר בלי שום שיאים נצפים. כל שיא נצפה ניתן לייחס טעות מדידה (פגום למשל או מזוהם תאים), וזאת הסיבה פועלת סריקות חיץ לפני לדגום ניתוח הוא מבחן התאמת מערכת נאות. איור 1 מדגים את התוצאה של סריקת חיץ אופיינית המציין כי קלורימטר היה במצב עבודה טוב לפני לדגום ניתוח. איור 2 מציג את הנתונים הגולמיים עבור ניסוי DSC שבוצעו על diffהמון erent של שתי דגימות חלבון. כפי שנרמז קודם לכן, הפסגות ציינו הם הבדלי שטף החום על מדגם המאגרים שלהם. הבדלים בריכוז מדגם יכולים לגרום וריאציות קיבול חום שרשם קלורימטר; עם זאת, הווריאציות הללו הן מנורמלות במהלך ניתוח מדגם כאמור בסעיף 4.2 של ההליך. ריכוזים גבוהים יותר גם יכולים לחשוף תחומי התרמודינמית נוספים לא תורם המעבר בריכוזים נמוכים. בנוסף, כל מעבר מייצג תחום התרמודינמית שעשויה לכלול תחומים מבניים אחד או יותר של החלבון 36. במקרה זה, החלבון 1 יש שלושה תחומים מבניים שנמסים בשיתוף פעולה. איור 3 מציג את התוצאות שנוצרו מהניתוח של הנתונים הגולמיים עבור חלבון 1 ו -2 מוצגים באיור 2, כלומר, לאחר חיסור בסיס וסיבי עקומת איטרטיביtting. Thermograms וכתוצאה מכך כבר מנורמל לסריקת שיעור (מתבצע באופן אוטומטי על ידי אלגוריתם שנקבע מראש בתוכנת הניתוח) וריכוז; ובכך, הצגת התוצאות של ניסוי קיבול חום השוואה מול גרפי טמפרטורה. תוכנת הניתוח משתמשת בנתוני קיבולת החום לעומת גרפי טמפרטורה, כגון T מ &#39;ΔCp, לגזור פרמטרים תרמודינמיים אחרים באמצעות וריאציות של המשוואות שניתנו לעיל תלוי cooperativity של חלבון התגלגלות. כאשר בודקים דגימות ידועות, הגדרת טווח הטמפרטורה המתאימה הוא חיוני. אחרת, thermograms שלם עלול לגרום, כפי שמודגם באיור 4. למרות T מטר מ- פרופילים כאלה ניתן לגזור, ΔH לא ניתן לקבוע במדויק. לכן, המדגם חייב להערכה מחדש עם טווח טמפרטורות גדול יותר כדי ללכוד את המעבר התרמי לחלוטין. כמה חלבונים גם מחדשטופס adily אגרגטים לאחר denaturation המלא, ותוצאה הוא קיבול חום שלאחר מעבר הגדלה: לעתים קרובות זה נראה כמו thermogram שלם כפי שמודגם באיור 2B. עם זאת, retesting עם טמפרטורה סופית גבוהה יכול לעזור לאשר אם יש התרחשות של מעבר קונפורמציה באותו האזור של thermogram או שזה רק האפקט קליט החום של אגרגטים חלבון. יציבות תרמית היא אחת התכונות הפיסיקליות המשמעותיות ביותר של חלבונים ומוצרים מבוססי חלבון בענף 37. בתחום התרופות, הוא משמש כדי לקבוע את היציבות של התרופות הביולוגיות בתנאים שונים, כולל כריות ניסוח וגורמים סביבתיים כגון לחות וטמפרטורה. כמו כן הוא משמש כדי לפקח צעד ייצור מפתח (למשל, טיהור רעלים) על מנת להבטיח עקביות קונפורמציה בין המון ייצור. <strong<html> &gt; דמוי 5 ו -6 להמחיש את שימוש DSC לבחון את ההשפעות של תנאים דטוקסיפיקציה ומחסני כימיקלי בהתאמה על יציבות קונפורמציה מבנית של שני חלבונים שונים. ההבדלים המשמעותיים ב TM ו ΔH להצביע על שינויי קונפורמציה ושפלת חלבון בהתאמה. בנוסף, אובדן המעבר השלישי באיור 6 נוסף ממחיש את השפלתה של תחום אשר אושר על ידי ירידה במשקל מולקולרי כאשר הדגימות נותחו באמצעות כרומטוגרפיה בגודל הדרה עם פיזור אור רב-זווית (SEC-יונקים) ( מידע לא מוצג). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/55262/55262fig1.jpg" /> איור 1: סורק הצפה. דמיון השיפוע של כל סריקה ללא פסגות נצפות מציין כי המכשיר נמצא במצב עבודה טוב שנוצר תוצאות לשחזור.//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55262/55262fig1large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/55262/55262fig2.jpg" /> איור 2: נתונים גולמיים שנאספו מניסויי DSC. גרפים אלה הם ייצוגים טובים של נתונים לא המוסברים (גלם) שנרכשו לאחר ריצות ניסיון (קרי בטרם חיסור עקום בסיס הולם). כל שורה מייצגת הרבה ייצור. חלבון 2 נוטה לצבור יותר בקלות על חימום, וכתוצאה מכך עלייה בקיבולת חום מעל 100 מעלות צלזיוס באזור-המעבר פוסט של thermogram. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55262/55262fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/55262/55262fig3.jpg" /><br/&gt; איור 3: נתח נתוני DSC. גרפים אלה הם ייצוגים טובים של נתוני DSC נתחו (כלומר, לאחר חיסור מחקר ולאחר עקומה הולמת). הקו הכחול מייצג את thermogram לאחר חיסור בסיס, ואילו הקו האדום מייצג את העקומה עם בכושר הטוב ביותר אל thermogram. (א) T מ &#39;ΔH עבור חלבון 1 לדוגמא # 12 הם 80.16 ° C ו- 1.69 x 10 6 cal / mol בהתאמה. (ב) מ T ו ΔH עבור חלבון 1 לדוגמא # 13 הם 80.15 ° C ו- 1.71 x 10 6 cal / mol בהתאמה. (ג) T מ &#39;ΔH עבור חלבון 2 לדוגמא # 21 הם 75.01 ° C ו- 4.08 x 10 6 cal / mol בהתאמה. (ד) מ T ו ΔH עבור חלבון 2 לדוגמא # 22 הם 75.67 ° C ו- 4.22 x 10 6 cal / mol בהתאמה. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55262/55262fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי</a>לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/55262/55262fig4.jpg" /> איור 4: Thermogram Incomplete. נתונים גולמיים לאסוף עבור חלבון 1 ונותח טווח טמפרטורות לקוי. הטמפרטורה הסופית של הניסוי נקבע ל -90 מעלות צלזיוס אשר לא להתאים את פרופיל המעבר כולו של חלבון לעומת הניסוי עבור איור 2 א אשר נקבע ל -120 מעלות צלזיוס. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55262/55262fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/55262/55262fig5.jpg" /> איור 5: ניתחו נתונים מראה את ההשפעה של ניקוי רעלים כימיים על מבנה שלישוני של חלבון 1. (א) חלבון 1 הוא רעלן קונפורמציה המקורית שלו ואת חהS M T שלה ב 56.84 מעלות צלזיוס, ΔH ב 2.57 x 10 5 cal / mol. (ב) טופס detoxified של חלבון 1 (toxoid כלומר) יש T מ וערכים ΔH של 81.01 ° C ו- 1.89 x 10 6 cal / mol בהתאמה. לפיכך, ניתן להסיק כי צעד הגמילה הציג צורה כלשהי של וריאציה על קונפורמציה המבני של חלבוני 1 אשר מקנה יציבות רבה יותר (מ T גבוה) בצורת detoxified שלה. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55262/55262fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/55262/55262fig6.jpg" /> איור 6: נתח נתונים מראים את ההשפעה של תנאי אחסון על הקונפורמציה של חלבון 3. גרפים אלו ממחישים את ההשפעה של טמפרטורת אחסון (2 - 8 ° C) על יציבות מבנה שליישונים של פרוחלבון 3 למעלה מ -30 שבועות. T מ וערכים ΔH עבור חלבון 3 בבית (א) 8 וה ה -38 בשבוע (B) של אחסון ניתנים בטבלה 1 להלן. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55262/55262fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <table fo:keep-together.within-page="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> לִטעוֹם </td><td> Tm 1 (° C) </td><td> ΔH 1 (cal / mol) </td><td> Tm 2 (מעלות צלזיוס) </td><td> ΔH 2 (cal / mol) </td><td> Tm 3 (° C) </td><td> ΔH 3 (cal / mol) </td></tr><tr><td> חלבון 3 מאוחסן ב 2-8 מעלות צלזיוס למשך 8 שבועות </td><td> 61.91 </td><td> 1.71 x 10 5 </td><td> 75.54 </td><td> 2.17 x 10 5 </td><td> 90.29 </td><td> 4.17 x 10 5 </td></tr><tr><tד&gt; חלבון 3 מאוחסן ב 2-8 מעלות צלזיוס למשך 38 שבועות </td><td> 61.87 </td><td> 1.66 x 10 5 </td><td> 75.18 </td><td> 1.46 x 10 5 </td><td> 90.22 </td><td> 5.76 x 10 5 </td></tr></tbody></table> טבלה 1: TM ו ΔH ערכים עבור חלבון 3 בבית שבוע 8 וה ה -38 של אחסון של 2 - 8 מעלות צלזיוס. למרות ערכי m T בשתי נקודות הזמן דומים, ההבדל בערכי ΔH מציין כי המבנה שליישונים של חלבון 3 נפגם כדי כך בחלוף 30 שבועות בתנאי האחסון שצוין.

Watch this Scientific Journal Video about Differential Scanning Calorimetry â€” A Method for Assessing the Thermal Stability and Conformation of Protein Antigen at JoVE.com

Differential Scanning Calorimetry &#8212; A Method for Assessing the Thermal Stability and Conformation of Protein Antigen

סריקת calorimetry דיפרנציאלי המודד את טמפרטורת מעבר התרמית (ים) ו אנרגית חום כוללת הנדרשת כדי לפגל חלבון. תוצאות שהתקבלו משמשות כדי להעריך את יציבות התרמית של אנטיגנים חלבון בניסוחי חיסון.

Calorimetry סריקה דיפרנציאל - שיטה להערכת יציבות תרמית ומבנה של Antigen חלבון

Differential scanning calorimetry (DSC) is an analytical technique that measures the molar heat capacity of samples as a function of temperature. In the ...

differential-scanning-calorimetry-method-for-assessing-thermal

Universidad de Cartagena UDEC

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Physics

Biochemistry

Unit 1

The First Law of Thermodynamics

SCIENTISTS IN ACTION

38.6K Views.  Sanofi Pasteur Limited.  סריקת calorimetry דיפרנציאלי המודד את טמפרטורת מעבר התרמית (ים) ו אנרגית חום כוללת הנדרשת כדי לפגל חלבון. תוצאות שהתקבלו משמשות כדי להעריך את יציבות התרמית של אנטיגנים חלבון בניסוחי חיסון. 

Video: Differential Scanning Calorimetry — A Method for Assessing the Thermal Stability and Conformation of Protein Antigen

Measuring Biomolecular DSC Profiles with Thermolabile Ligands to Rapidly Characterize Folding and Binding Interactions

Differential scanning calorimetry (DSC) is a powerful technique for quantifying thermodynamic parameters governing biomolecular folding and binding interactions. This information is critical in the design of new pharmaceutical compounds. However, many pharmaceutically relevant ligands are chemically unstable at the high temperatures used in DSC analyses. Thus, measuring binding interactions is challenging because the concentrations of ligands and thermally-converted products are constantly changing within the calorimeter cell. Here, we present a protocol using thermolabile ligands and DSC for rapidly obtaining thermodynamic and kinetic information on the folding, binding, and ligand conversion processes. We have applied our method to the DNA aptamer MN4 that binds to the thermolabile ligand cocaine. Using a new global fitting analysis that accounts for thermolabile ligand conversion, the complete set of folding and binding parameters are obtained from a pair of DSC experiments. In addition, we show that the rate constant for thermolabile ligand conversion may be obtained with only one supplementary DSC dataset. The guidelines for identifying and analyzing data from several more complicated scenarios are presented, including irreversible aggregation of the biomolecule, slow folding, slow binding, and rapid depletion of the thermolabile ligand.

We present a protocol for rapid characterization of biomolecular folding and binding interactions with thermolabile ligands using differential scanning calorimetry.

מדידת למערכות ביולוגיות DSC פרופילים עם Thermolabile ליגנדים לאפיין במהירות קיפול ואיגוד אינטראקציות

Differential scanning calorimetry (DSC) is a powerful technique for quantifying thermodynamic parameters governing biomolecular folding and binding ...

Designing Silk-silk Protein Alloy Materials for Biomedical Applications

Fibrous proteins display different sequences and structures that have been used for various applications in biomedical fields such as biosensors, nanomedicine, tissue regeneration, and drug delivery. Designing materials based on the molecular-scale interactions between these proteins will help generate new multifunctional protein alloy biomaterials with tunable properties. Such alloy material systems also provide advantages in comparison to traditional synthetic polymers due to the materials biodegradability, biocompatibility, and tenability in the body. This article used the protein blends of wild tussah silk (Antheraea pernyi) and domestic mulberry silk (Bombyx mori) as an example to provide useful protocols regarding these topics, including how to predict protein-protein interactions by computational methods, how to produce protein alloy solutions, how to verify alloy systems by thermal analysis, and how to fabricate variable alloy materials including optical materials with diffraction gratings, electric materials with circuits coatings, and pharmaceutical materials for drug release and delivery. These methods can provide important information for designing the next generation multifunctional biomaterials based on different protein alloys.

Blending is an efficient approach to generate biomaterials with a broad range of properties and combined features. By predicting the molecular interactions between different natural silk proteins, new silk-silk protein alloy platforms with tunable mechanical resiliency, electrical response, optical transparency, chemical processability, biodegradability, or thermal stability can be designed.

עיצוב פרוטאין משי משי חומרי סגסוגת עבור יישומים ביו

Fibrous proteins display different sequences and structures that have been used for various applications in biomedical fields such as biosensors, ...

Bioengineering

How to Stabilize Protein: Stability Screens for Thermal Shift Assays and Nano Differential Scanning Fluorimetry in the Virus-X Project

The Horizon2020 Virus-X project was established in 2015 to explore the virosphere of selected extreme biotopes and discover novel viral proteins. To evaluate the potential biotechnical value of these proteins, the analysis of protein structures and functions is a central challenge in this program. The stability of protein sample is essential to provide meaningful assay results and increase the crystallizability of the targets. The thermal shift assay (TSA), a fluorescence-based technique, is established as a popular method for optimizing the conditions for protein stability in high-throughput. In TSAs, the employed fluorophores are extrinsic, environmentally-sensitive dyes. An alternative, similar technique is nano differential scanning fluorimetry (nanoDSF), which relies on protein native fluorescence. We present here a novel osmolyte screen, a 96-condition screen of organic additives designed to guide crystallization trials through preliminary TSA experiments. Together with previously-developed pH and salt screens, the set of three screens provides a comprehensive analysis of protein stability in a wide range of buffer systems and additives. The utility of the screens is demonstrated in the TSA and nanoDSF analysis of lysozyme and Protein X, a target protein of the Virus-X project.

A protocol is presented to rapidly test the thermal stability of proteins in a variety of conditions through thermal shift assays and nano differential scanning fluorimetry. Buffer systems, salts and additives, together comprising three unique stability screens, are assayed with proteins to identify suitable buffers for functional and structural studies.

איך לייצב את חלבון: מסכי יציבות תרמית משמרת מבחני ו ננו דיפרנציאלית סריקה Fluorimetry בפרוייקט וירוס-X

The Horizon2020 Virus-X project was established in 2015 to explore the virosphere of selected extreme biotopes and discover novel viral proteins. To ...

Nano-Differential Scanning Fluorimetry for Screening in Fragment-based Lead Discovery

Thermal shift assays (TSAs) examine how the melting temperature (Tm) of a target protein changes in response to changes in its environment (e.g., buffer composition). The utility of TSA, and specifically of nano-Differential Scanning Fluorimetry (nano-DSF), has been established over the years, both for finding conditions that help stabilize a specific protein and for looking at ligand binding by monitoring changes in the apparent Tm. This paper presents an efficient screening of the Diamond-SGC-iNEXT Poised (DSi-Poised) fragment library (768 compounds) by the use of nano-DSF, monitoring Tm to identify potential fragment binding. The prerequisites regarding protein quality and concentration for performing nano-DSF experiments are briefly outlined followed by a step-by-step protocol that uses a nano-liter robotic dispenser commonly used in structural biology laboratories for preparing the required samples in 96-well plates. The protocol describes how the reagent mixtures are transferred to the capillaries needed for nano-DSF measurements. In addition, this paper provides protocols to measure thermal denaturation (monitoring intrinsic tryptophan fluorescence) and aggregation (monitoring light back-scattering) and the subsequent steps for data transfer and analysis. Finally, screening experiments with three different protein targets are discussed to illustrate the use of this procedure in the context of lead discovery campaigns. The overall principle of the method described can be easily transferred to other fragment libraries or adapted to other instruments.

Monitoring changes in the melting temperature of a target protein (i.e., thermal shift assay, TSA) is an efficient method for screening fragment libraries of a few hundred compounds. We present a TSA protocol implementing robotics-assisted nano-Differential Scanning Fluorimetry (nano-DSF) for monitoring intrinsic tryptophan fluorescence and light back-scattering for fragment screening.

פלואורימטריה סריקה ננו-דיפרנציאלית להקרנה בתגלית עופרת מבוססת שבר

Thermal shift assays (TSAs) examine how the melting temperature (Tm) of a target protein changes in response to changes in its environment (e.g., buffer ...

A Package of Established Analytical Tools to Investigate the Solid-State Alteration of Lipid-Based Excipients

Lipid-based excipients (LBEs) are low-toxic, biocompatible, and natural-based, and their application supports the sustainability of pharmaceutical manufacturing. However, the major challenge is their unstable solid-state, affecting the stability of the pharmaceutical product. Critical physical properties of lipids for their processing-such as melt temperature and viscosity, rheology, etc.-are related to their molecular structure and their crystallinity. Additives, as well as thermal and mechanical stress involved in the manufacturing process, affect the solid-state of lipids and thus the performance of pharmaceutical products thereof. Therefore, understanding the alteration in the solid-state is crucial. In this work, the combination of powder x-ray diffraction and differential scanning calorimetry (DSC) is introduced as the gold standard for the characterization of lipids' solid state. X-ray diffraction is the most efficient method to screen polymorphism and crystal growth. The polymorphic arrangement and the lamella length are characterized in the wide- and small-angle regions of x-ray diffraction, respectively. The small-angle x-ray scattering (SAXS) region can be further used to investigate crystal growth. Phase transition and separation can be indicated. DSC is used to screen the thermal behavior of lipids, estimate the miscibility of additives and/or active pharmaceutical ingredients (API) in the lipid matrix, and provide phase diagrams. Four case studies are presented in which LBEs are either used as a coating material or as an encapsulation matrix to provide lipid-coated multiparticulate systems and lipid nanosuspensions, respectively. The lipid solid-state and its potential alteration during storage are investigated and correlated to the alteration in the API release. Qualitative microscopical methods such as polarized light microscopy and scanning electron microscopy are complementary tools to investigate micro-level crystallization. Further analytical methods should be added based on the selected manufacturing process. The structure-function-processability relationship should be understood carefully to design robust and stable lipid-based pharmaceutical products.

This publication shows the application of x-ray diffraction and differential scanning calorimetry as gold standards for investigating the solid-state of lipid-based excipients (LBEs). Understanding the solid-state alteration in LBEs and its effect on the performance of pharmaceutical products thereof is the key factor for manufacturing robust lipid-based dosage forms.

חבילה של כלים אנליטיים מבוססים כדי לחקור את השינוי במצב מוצק של חומרים פעילים מבוססי ליפידים

Lipid-based excipients (LBEs) are low-toxic, biocompatible, and natural-based, and their application supports the sustainability of pharmaceutical ...

Chemistry

<meta charset="utf8"></head><body>מבחני הזזה תרמית בתפוקה גבוהה עבור אינטראקציות חלבון-ליגנד

Utilizing Thermal Shift Assay to Probe Substrate Binding to Selenoprotein O

Defining the biological importance of proteins with unknown functions poses a significant obstacle in understanding cellular processes. Although bioinformatic and structural predictions have contributed to the study of unknown proteins, in vitro experimental validations are often hampered by the optimal conditions and cofactors required for biochemical activity. Cofactor binding is not only essential for the activity of some enzymes but may also enhance the thermal stability of the protein. One practical application of this phenomenon lies in utilizing the change in thermal stability, as measured by alterations in the protein's melting temperature, to probe ligand binding. 
Thermal shift assay (TSA) can be used to analyze the binding of different ligands to the protein of interest or find a stabilizing condition to perform experiments such as X-ray crystallography. Here we will describe a protocol for TSA utilizing the pseudokinase, Selenoprotein O (SelO), for a simple and high-throughput method for testing metal and nucleotide binding. In contrast to canonical kinases, SelO binds ATP in an inverted orientation to catalyze the transfer of AMP to the hydroxyl side chains of proteins in a posttranslational modification known as protein AMPylation. By leveraging the shift in the melting temperatures, we provide crucial insights into the molecular interactions underlying SelO function.

<meta charset="utf8"></head><body>מחבר זרקור: קידום מחקרים מבניים וביוכימיים של חלבונים באמצעות מבחני שינוי תרמי

Here, we present the thermal shift assay, a high-throughput, fluorescence-based technique used to investigate the binding of small molecules to proteins of interest.

שימוש בבדיקת הזזה תרמית לבדיקת קשירת מצע לסלנופרוטאין O

Defining the biological importance of proteins with unknown functions poses a significant obstacle in understanding cellular processes. Although ...

Determination of Protein-ligand Interactions Using Differential Scanning Fluorimetry

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most of these require access to specialist equipment, and often require a degree of expertise to effectively establish reliable experiments and analyze data. Differential scanning fluorimetry (DSF) is being increasingly used as a robust method for initial screening of proteins for interacting small molecules, either for identifying physiological partners or for hit discovery. This technique has the advantage that it requires only a PCR machine suitable for quantitative PCR, and so suitable instrumentation is available in most institutions; an excellent range of protocols are already available; and there are strong precedents in the literature for multiple uses of the method. Past work has proposed several means of calculating dissociation constants from DSF data, but these are mathematically demanding. Here, we demonstrate a method for estimating dissociation constants from a moderate amount of DSF experimental data. These data can typically be collected and analyzed within a single day. We demonstrate how different models can be used to fit data collected from simple binding events, and where cooperative binding or independent binding sites are present. Finally, we present an example of data analysis in a case where standard models do not apply. These methods are illustrated with data collected on commercially available control proteins, and two proteins from our research program. Overall, our method provides a straightforward way for researchers to rapidly gain further insight into protein-ligand interactions using DSF.

Differential scanning fluorimetry is a widely used method for screening libraries of small molecules for interactions with proteins. Here, we present a straightforward method to extend these analyses to provide an estimate of the dissociation constant between a small molecule and its protein partner.

נחישות של אינטראקציות חלבון ליגנד שימוש דיפרנציאל סריקת Fluorimetry

A wide range of methods are currently available for determining the dissociation constant between a protein and interacting small molecules. However, most ...

Biology

זיהוי רגישות גבוהה של קשירת תרכובת-חלבון באמצעות פלואורסצנטיות

Detection of CD40 Protein-Umbelliferone Interaction via Differential Scanning Fluorescence

The investigation of interactions between different molecules is a crucial aspect of understanding disease pathogenesis and screening for drug targets. Umbelliferone, an active ingredient in Tibetan medicine Vicatia thibetica, exhibits an immunomodulatory effect with an unknown mechanism. The CD40 protein is a key target in the immune response. Therefore, this study employs the principle of differential scanning fluorescence technology to analyze the interactions between CD40 protein and umbelliferone using fluorescent enzyme markers. Initially, the stability of the protein fluorescent orange dye was experimentally verified, and the optimal dilution ratio of 1:500 was determined. Subsequently, it was observed that the temperature melting (Tm) value of CD40 protein tended to decrease with an increase in concentration. Interestingly, the interaction between CD40 protein and umbelliferone was found to enhance the thermal stability of CD40 protein. This study represents the first attempt to detect the binding potential of small molecule compounds and proteins using fluorescence microplates and fluorescent dyes. The technique is characterized by high sensitivity and accuracy, promising advancements in the fields of protein stability, protein structure, and protein-ligand interactions, thus facilitating further research and exploration.

מחבר זרקור: ייעול שיטות PCR לשיפור הנגישות והיעילות

This protocol describes a unique method for detecting the binding between compounds and protein molecules, offering the advantages of minimal protein sample loss and high data accuracy.

זיהוי אינטראקציה של חלבון-אומבליפרון CD40 באמצעות פלואורסצנטיות סריקה דיפרנציאלית

The investigation of interactions between different molecules is a crucial aspect of understanding disease pathogenesis and screening for drug targets. ...

Calorimetry סריקה דיפרנציאל - שיטה להערכת יציבות תרמית ומבנה של Antigen חלבון

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

מדידת למערכות ביולוגיות DSC פרופילים עם Thermolabile ליגנדים לאפיין במהירות קיפול ואיגוד אינטראקציות

עיצוב פרוטאין משי משי חומרי סגסוגת עבור יישומים ביו

איך לייצב את חלבון: מסכי יציבות תרמית משמרת מבחני ו ננו דיפרנציאלית סריקה Fluorimetry בפרוייקט וירוס-X

פלואורימטריה סריקה ננו-דיפרנציאלית להקרנה בתגלית עופרת מבוססת שבר

חבילה של כלים אנליטיים מבוססים כדי לחקור את השינוי במצב מוצק של חומרים פעילים מבוססי ליפידים

שימוש בבדיקת הזזה תרמית לבדיקת קשירת מצע לסלנופרוטאין O

שימוש בבדיקת הזזה תרמית לבדיקת קשירת מצע לסלנופרוטאין O

שימוש בבדיקת הזזה תרמית לבדיקת קשירת מצע לסלנופרוטאין O

נחישות של אינטראקציות חלבון ליגנד שימוש דיפרנציאל סריקת Fluorimetry

זיהוי אינטראקציה של חלבון-אומבליפרון CD40 באמצעות פלואורסצנטיות סריקה דיפרנציאלית