מימון מהמכון הלאומי האמריקאי לבריאות (מעניק R01EB008678, R01DK096075, R01DK084053, R00DK088962 וDK103500 F32), CIMIT פרויקט מס &#39;12-1732 ובתי החולים Shriners לילדים הוא הודה בהכרת תודה. ברצוננו להודות בהכרת תודה בנק האיברים ניו אינגלנד לתמיכה בעבודה זו.

השימוש ברקמה אנושית חייב להיבדק על ידי מועצה לביקורת מוסדית (IRB) או שווה ערך. העבודה המתוארת כאן אושרה והכריזה פטור על ידי בית החולים הכללי מסצ&#39;וסטס Institutional Review Board (מס &#39;2011P001496). 1. פתרון הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סביבה נקיה מחיידקים להוסיף תוספים לפנול E בינונית &#39;וויליאמס אדומה ללא כפי שמתוארת בטבלה 1. הפתרון צריך להיות מוכנים טרי לפני השימוש. אינסולין יש להוסיף רק לפני השימוש. </li></ol> 2. חזרה הכנת טבלה של הכבד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים קערת איבר מלאת קרח על פני השטח סטרילי, עטוף. הסר את הכבד מהתיבה, והשאיר אותו בשקית של פתרון שימור קר. שמור את הכבד בעיקר מתחת למים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את העורק הכבד (HA), אשר יהיה ממוקם דיסטלי לתיקון אב העורקים. לנתח בחינם העורק לחשוף סניפי חתך שונים לאורכו באמצעות מספריים מצנבאום. disse בזהירותct כל אורכו של העורק כדי למנוע ניתוק כלי שמספק את הכבד. אין לחתוך או לקשור ענפים שאין להם סוף גלוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור את כל סניפי העורקים לא מספקים את הכבד באמצעות תפר משי החל גודל 0 עד 4-0, תלוי בגודל של כלי השיט. סניפים קרובים, כי הם קצרים מדי כדי לקשור או חורים בעורק עם תפר של 7-0 prolene. עניבה וחתכה את עורקי הקיבה הטחול ושמאל קרובים למקור שלהם בתא מטען צליאק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את תיקון אב העורקים על ידי חיתוך גזע צליאק ישירות תחת התיקון. Cannulate תא מטען צליאק באמצעות צינורית אב העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את וריד השער (PV) ובוטות לנתח את זה בחינם. לקשור את כל סניפים וcannulate PV עם המגזר מוכן בגודל 24 צינורות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר חלקים של סרעפת מהווריד הנבוב suprahepatic, בלי לחתוך את הווריד עצמו. יצוא ממתנקז הווריד הנבוב ישירות לתוך תא האיבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך 2 ti מלא היקףדגימות ssue (אורך מ&quot;מ 2-3) מקצה של צינור המרה המשותפת; הצמד להקפיא אחד בחנקן נוזלי (חנות ב -80 ° C) ולאחסן האחרים ב 10% שנאגרו פורמלין, לרקמות וניתוח היסטולוגית, בהתאמה. Cannulate צינור מרה המשותף עם צינורית הכלי וצינור ניקוז עשוי מצינורות oxygenator הקרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות ולקשור את צינור פיברוזיס עם עניבת משי 0. צינור פיברוזיס נמצא בין צינור המרה המשותפת וכיס המרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את צינורות הסומק מוגדרים שקיות קרות כקרח של תמיסת הרטמן (LR) וראש צינורות, הסרת כל האוויר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את זרימת הווסת על צינור הסומק לטפטוף איטי. לפני חיבור צינור הסומק לצינורית וריד שער, לחסום את וריד השער עם אצבעות בhilum ולמלא את הצינורית ווריד עם סומק כדי להסיר את האוויר מוריד השער. לא להעלות את השקית יותר מ -20 סנטימטרים מעל הגובה של הכבד במהלך שטיפה קרה, כדי למנוע לחץ מופרז עלוריד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך בקצרה הסומק לחסום את PV בנקודה הנמוכה ביותר. לבחון את PV להדלפות. ניתן לסגור את סניפי כלי כפי שתוארו לעיל. לשטוף את הכבד באמצעות PV עם סך של 2 L של LR קר כקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.10, 2.11 לHA עם 1 ליטר של LR. </li></ol> 3. לקרקע מערכת SNMP <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראש מכשיר זלוף על ידי הוספת 2 L של perfusate (21 ° C) לקערת האיבר ומתחיל את המכשיר לראש צינורות. בצע את ההוראות של המכשיר כדי להתכונן לזלוף, קביעת הטמפרטורה ל -21 מעלות צלזיוס. התחל עם לחצים של 3 מ&quot;מ כספית ו -30 מ&quot;מ כספית בPV וHA, בהתאמה. פתח את מיכל הדלק ולהגדיר לזרימה של 3 L / min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקחת דגימת דם משני גז זרימת HA וPV על ידי ציור מדגם 0.3 מיליליטר מנמלי המדגם ומפעיל אותו במכונה ניתוח גז דם על פי הוראות היצרן. לאשר חמצון נאות (PO 2&gt; 700 מ&quot;מ כספית) ו- pH (7.35-7.45). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הכבד המחובר לקחת דגימת 1.0 מיליליטר של perfusate כב= 0 מדידה בצינור Eppendorf ולאחסן ב -80 ° C. חותך שתי ± 250 ביופסיות טריז מ&quot;ג מהכבד עם להב פלדה בעל להב אחד; הצמד להקפיא אחד בחנקן נוזלי (חנות ב -80 ° C) ולאחסן האחרים ב 10% שנאגרו פורמלין. לשקול את הכבד לפני זלוף. </li></ol> 4. אדם הכבד זלוף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הכבד למכשיר. חבר את זרימת PV לצינורית PV, לאחר הסרת אוויר מPV כמו בשלב 2.10. חבר את HA באופן דומה. PV להגדיר ולחץ HA עד 3 ו -30 מ&quot;מ כספית. הכבד צריך להיות כמעט שקוע בperfusate. לכסות את כל משטחים יבשים, כולל כלי יבוא, עם גזה סטרילית רטובה על מנת למנוע התייבשות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו לטמיון צינורות מרה לתוך מיכל איסוף. ודא פתיחת ניקוז המרה היא ברמה של הכבד או נמוך כדי לאפשר מרה לרוץ out באופן חופשי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרימת יעד שיעורים הם 275-325 מיליליטר / min.kg ו50-100 מיליליטר / min.kg לPV וHA בהתאמה פעם הכבד התחמם עד 21 ° C. מאז כל כבד מגיב בצורה שונה לזלוף, לפקח על הזרימה צמודה במהלך דקות הראשונות. להגדיל או להקטין את הלחץ על אחד מהכולים אם ספיקות היעד לא הגיעו. לא יעלה על 50 מ&quot;מ כספית בHA ו -5 מ&quot;מ כספית על PV. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתן לקחת דגימות מרקמת כבד, perfusate והמרה בהעדפת החוקרים. אנו ממליצים על מינימום מדגם משטר האוסף הבא במהלך זלוף. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביופסיות רקמות, n = 2 x 250 מ&quot;ג, בכל שעה. אחסון: הצמד להקפיא אחד בחנקן נוזל חנות ב -80 לטווח ארוך C °. בנוסף, לקחת ביופסיה נוספת לפני ואחרי זלוף ולתקן ב 10% שנאגרו פורמלין (n = 1) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות perfusate, n = 2x 1 מיליליטר, כל 15 דקות לשעה הראשונה וכל 30 דקות לאחר מכן. לצייר דגימות מinf PVנמל מדגם נמוך. אחסון: -80 ° C לטווח ארוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח גז דם של PV וזרימת HA, ויצוא וריד נבוב. n = 3 x 0.3 מיליליטר, בכל 30 דקות. לצייר דגימות משני PV ויציאות מדגם HA. צייר מדגם 0.3 מיליליטר מהווריד הנבוב על ידי החדרת מזרק לתוך הווריד ולהפעיל ישירות במנתח גז דם. השתמש בתפוקה כדי להבטיח חמצון וpH מתאימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייצור מיצי מרה, n = 1 מיליליטר x 1, כל שעה. מבחינה ויזואלית לכמת ייצור מיצי מרה בכל שעה ולקחת דגימה מיכל האיסוף. לחדש את המכל לאחר דגימה. אחסון: קרח יבש ו-80 ° C לטווח ארוך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך זלוף במשך 3 שעות. ניטור הלחץ, pH וחמצון ולקיחת דגימות לאורך כל דרך. התאם אותו pH על ידי הוספת סודה לשתייה לperfusate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסופו של זלוף לקחת דגימות הסופיות בעוד הכבד הוא להיות perfused. נתק את הכבד ולהסיר את צינורית צינור מרה. קח 2 דגימות רקמה שלאחר טפטוף שלצינור מרה כפי שתואר קודם לאחסון ב -80 ° C וב 10% שנאגרו פורמלין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את הכבד האנושי הבא הנחיות רשות Biohazard הנכון. </li></ol>

<ol>
	<li>Merion, R. M., Pelletier, S. J., Goodrich, N., Englesbe, M. J., Delmonico, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donation+after+cardiac+death+as+a+strategy+to+increase+deceased+donor+liver+availability.">Donation after cardiac death as a strategy to increase deceased donor liver availability.</a> Ann Surg. 244 (4), 555-562 (2006).</li><li>Guarrera, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermic+machine+preservation+facilitates+successful+transplantation+of+'orphan'+extended+criteria+donor+livers.">Hypothermic machine preservation facilitates successful transplantation of 'orphan' extended criteria donor livers.</a> Am J Transplant. 15, 161-169 (2015).</li><li>Dutkowski, P., Schlegel, A., de Oliveira, M., M&#252;llhaupt, B., Clavien, P. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HOPE+for+human+liver+grafts+obtained+from+donors+after+cardiac+death.">HOPE for human liver grafts obtained from donors after cardiac death.</a> J Hepatol. 60 (4), 765-772 (2013).</li><li>Dutkowski, P., Clavien, P. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solutions+to+Shortage+of+Liver+Grafts+for+Transplantation.">Solutions to Shortage of Liver Grafts for Transplantation.</a> Br J Surg. 101 (7), 739-774 (2014).</li><li>Vogel, T., Brockmann, J. G., Friend, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex-vivo+Normothermic+Liver+Perfusion:+An+Update.">Ex-vivo Normothermic Liver Perfusion: An Update.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (2), 167-172 (2010).</li><li>Monbaliu, D., Brassil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Machine+Perfusion+of+the+Liver:+Past,+Present,+and+Future.">Machine Perfusion of the Liver: Past, Present, and Future.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (2), 160-166 (2010).</li><li>Matsuno, M., Uchida, K., Furukawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Machine+Perfusion+Preservation+of+Liver+Grafts+From+Donation+After+Cardiac+Death.">Impact of Machine Perfusion Preservation of Liver Grafts From Donation After Cardiac Death.</a> Transplant Proc. 46 (4), 1099-1103 (2014).</li><li>Schlegel, A., Dutkowski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+hypothermic+machine+perfusion+in+liver+transplantation.">Role of hypothermic machine perfusion in liver transplantation.</a> Transplant Int. , (2014).</li><li>Op den Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers.">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> Am J Transplant. 13, 1327-1335 (2013).</li><li>Bruinsma, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+prophylaxis+in+(sub)normothermic+organ+preservation:+In+vitro+efficacy+and+toxicity+of+cephalosporins.">Antibiotic prophylaxis in (sub)normothermic organ preservation: In vitro efficacy and toxicity of cephalosporins.</a> Transplantation. 95 (8), 1064-1069 (2013).</li><li>Post, I. C., Dirkes, M. C., Heger, M., Bezemer, R., van't Leven, J., van Gulik, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+flow+and+pressure+management+in+machine+perfusion+systems+for+organ+preservation.">Optimal flow and pressure management in machine perfusion systems for organ preservation.</a> Ann Biomed Eng. 40 (12), 2698-2707 (2012).</li><li>Post, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cell+preservation+at+hypothermic+to+normothermic+conditions+using+clinical+and+experimental+organ+preservation+solutions.">Endothelial cell preservation at hypothermic to normothermic conditions using clinical and experimental organ preservation solutions.</a> Exp Cell Res. 319 (17), 2501-2513 (2013).</li><li>Klein, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Donation+and+Utilization+in+the+United+States,+1999-2008.">Organ Donation and Utilization in the United States, 1999-2008.</a> Am J Transplant. 10 (4), 973-986 (2010).</li><li>Jay, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Increased+Costs+of+Donation+After+Cardiac+Death+Liver+Transplantation.">The Increased Costs of Donation After Cardiac Death Liver Transplantation.</a> Ann Surg. 251 (4), 743-748 (2010).</li><li>Seehofer, D., Eurich, D., Veltzke-Schlieker, W., Neuhaus, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+Complications+After+Liver+Transplantation:+Old+Problems+and+New+Challenges.">Biliary Complications After Liver Transplantation: Old Problems and New Challenges.</a> Am J Transplant. 13, 253-265 (2013).</li><li>Morrissey, P., Monaco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donation+After+Circulatory+Death:+Current+Practices,+Ongoing+Challenges+and+Potential+Improvement.">Donation After Circulatory Death: Current Practices, Ongoing Challenges and Potential Improvement.</a> Transplantation. 97 (3), 258-264 (2014).</li><li>Verdonk, R., Buis, C., Porte, R., Haagsma, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+complications+after+liver+transplantation:+A+review.">Biliary complications after liver transplantation: A review.</a> Scand J Gastroenterol. 41, 89-101 (2006).</li><li>Pine, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+Transplantation+Following+Donation+After+Cardiac+Death:+An+Analysis+Using+Matched+Pairs.">Liver Transplantation Following Donation After Cardiac Death: An Analysis Using Matched Pairs.</a> Liver Transpl. 15 (9), 1072-1082 (2009).</li><li>Sutton, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Criteria+for+viability+assessment+of+discarded+human+donor+livers+during+ex+vivo+normothermic+machine+perfusion.">Criteria for viability assessment of discarded human donor livers during ex vivo normothermic machine perfusion.</a> PLoS One. 11, e110642 (2014).</li><li>Bruinsma, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subnormothermic+Machine+Perfusion+for+Ex+Vivo+Preservation+and+Recovery+of+the+Human+Liver+for+Transplantation.">Subnormothermic Machine Perfusion for Ex Vivo Preservation and Recovery of the Human Liver for Transplantation.</a> Am J Transplant. 14, 1400-1409 (2014).</li><li>Bruinsma, B. G., Yarmush, M. L., Uygun, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organomatics+and+organometrics:+Novel+platforms+for+long-term+whole-organ+culture.">Organomatics and organometrics: Novel platforms for long-term whole-organ culture.</a> Technology. 02 (1), 13-22 (2014).</li><li>Berendsen, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+subnormothermic+machine+perfusion+system+restores+ischemically+damaged+liver+grafts+in+a+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation.">A simplified subnormothermic machine perfusion system restores ischemically damaged liver grafts in a rat model of orthotopic liver transplantation.</a> Transplant Res. 1 (1), 6 (2012).</li></ol>

בני הזוג. BE Uygun, K Uygun וYarmush הם ממציאים בפטנט שרלוונטי למחקר זה (WO / 2011 / 002,926), ובני הזוג. BE Uygun, K Uygun וYarmush הם ממציאים בפטנט שרלוונטי למחקר זה (WO / 2011/35223). בני הזוג. יש לי K Uygun וBruinsma בקשת פטנט זמני הקשורים לעבודה זו. יש לי ד&quot;ר K Uygun ולהיות Uygun אינטרס כלכלי בפתרוני איברים, חברה מתמקדת בפיתוח טכנולוגית שימור איברים. ד&quot;ר K Uygun ולהיות האינטרסים של Uygun מנוהלים על ידי MGH והשותפים HealthCare בהתאם לסכסוך שלהם על מדיניות ריבית.

בניסיון לשחזר את הכבדים נפצעו במהלך איסכמיה פיתחנו מערכת SNMP שיכול להיות מועסק לאחר תקופה של אחסון קר. זלוף המכונה Subnormothermic מציע חלופה לאחסון קונבנציונלי קר, וכן דרכי זלוף המכונה היפותרמיה וnormothermic. מערכות שונות קיימות; כולם מציעים יתרונות וחסרונות שונים 3,9,20. SNMP מאפשר לזלוף ללא ספק חמצן, כדרישות חמצן מטבולים בגיל 21 מעלות צלזיוס הם נפגשו על ידי חמצון פעיל של perfusate. למרות מופחת בתנאי subnormothermic, חילוף חומרים הוא משמעותי ודורש התמיכה של פתרון זלוף עשיר בחומרים מזינים. פתרונות זלוף מסורתיים, כגון פתרון זלוף המכונה בלזר, הם בדרך כלל מינימאליים בהרכב ומיועדים לזלוף הקר. &#39;וויליאמס בינוני E שמשה כמדיום תרבות hepatocyte במשך שנים רבות, והוא מכיל גomponents שהם אוניברסליים לתמיכה בפונקציה סלולרית, בפרט בתנאים חמים vivo לשעבר. מדידות שנעשו במהלך זלוף מכונה הם שיקוף של הפונקציה של האיבר. פרמטרים ישירות נצפים כגון ייצור מיצי מרה וספיגת חמצן הם מדידות בזמן אמת, שניתן להשתמש כדי להעריך את הכבד לפני ההשתלה. באופן דומה, סמנים של פגיעה ואיסכמיה (K +, שחרור חומצת החלב) סלולריות ניתן למדוד באופן ישיר בפתרון זלוף ועשויה להצביע על תפקוד איבר 20. ככל שטכנולוגיה מתפתחת זלוף מכונה נוספת ומשיגה יישום קליני נרחב יותר, מתאמים מדויקים בין פונקצית vivo לשעבר ותוצאה קלינית יכולים להתבצע ופרמטרי זלוף יהיו שימושיים בסיוע להחלטות להשתלת כבד או לדחות שולית באיכות. יתר על כן, כנקודה-התקדמות כלים אנליטיים טיפול, ניתוח מתוחכם יותר יהיה זמין ישירות במכונת perfuשיאון 21. בעבודה זו אנו מראים כי יכולים להיות נתמכים על כבדים במערכת SNMP עם פגיעה מינימאלית בכבד, המשתקפים בהיסטולוגיה ושחרורו של ALT. התאוששות תפקודית של הכבד מתבטאת הטובה ביותר על ידי ATP, אשר נמצאה במיתאם לכדאיות כבד והוא מאוד מרמז על הצלחת השתלה במודלים של בעלי חיים 22. Ex vivo והתאוששות לפני השתלה של שתלי כבד יאפשר הרחבה משמעותית של התורם בריכה כבד, תיקון הפער בין ההיצע והביקוש של כבדי תורם בהשתלה.

השתלה כבד היא הטיפול המרפא רק לעשרות אלפי חולים הסובלים ממחלת כבד סופנית. כדי להקל על השתלה מוצלחת, שימור אופטימלי של הכבד מרגע שהוא רכש מן התורם עד למועד זה הוא מושתל במקבל הוא הכרחי על מנת למנוע הידרדרות מהירה של השתל. הסטנדרטי לשימור כבד הנוכחי נקרא &quot;קירור סטטי &#39;: הכבד הוא מקורר בפתרון שימור קר כקרח, ובכך להפחית את חילוף החומרים של הכבד ולהאט את ההשפעות המזיקות של איסכמיה. למרות שטכניקת אחסון קרה זו אפשרה להשתלה מוצלחת, איברים של איכות שולית כגון איברי DCD נפגעו איסכמיה החמה או חולה נחות תכנית steatosis תוצאות 1. ישנו גוף המתרחב במהירות של ראיות שזלוף המכונה vivo לשעבר של שתלי כבד כשיטת שימור חלופית עלולים imלהוכיח תוצאות עבור איברים השוליים אלה 2,3. השתלה כבד הפכה לקורבן של ההצלחה שלה. הרבה יותר חולים מופנים להשתלה ממה שיש כבדים זמינים, ואלפים מתו ברשימת ההמתנה בארצות הברית בכל שנה. בהתחשב במציאות של המחסור הכבד תורם וניצול הגובר של שתלי כבד של איכות לא טובה למקבלי נזקקים, הוא מוחזק באופן נרחב שזלוף המכונה vivo לשעבר של שתלי כבד לפני ההשתלה מקיים את ההבטחה של שינוי פרדיגמה בהשתלת כבד. חל עלייה ניכרה בעניין מחקרי בנושא זה בשנים האחרונות 4-8. במרכזים באירופה ובצפון אמריקה שונים זלוף מכונה היפותרמיה הפך לאחרונה זלוף מכונה קליני הקדמת 8 וnormothermic בטמפרטורות פיסיולוגיות הוחל כבדים אנושיים שהושלכו והוא מתורגם לשימוש קליני, כמו גם 9.פיתוח נרחב שהוביל לפיתוח של פרוטוקולים שונים, תוך אופטימיזציה מתמדת מזהה את זלוף האופטימלי פרמטרי 10-12. שימוש בשתלים שולית באיכות גדל יותר פי 10 בעשור האחרון 13. בהשוואה לתקן הנוכחי לשימור כבד (אחסון קר סטטית), זלוף המכונה vivo לשעבר מספק יתרונות פוטנציאליים רבים, אשר כולם לגרום לנחוצה הרחבת בריכת האיברים ועלולים להיות ירידה בשכיחות של סיבוכים לאחר ההשתלה. בפרט, סיבוכי המרה שסובלים כיום שתלי כבד הכי מוצלחת באיכות לאחר ההשתלה יישארו בעיה משמעותית 14-18. זלוף מכונת בתנאי subnormothermic מספק חלון זמן כדי להעריך את תפקוד שתל באופן אובייקטיבי לעניין התאמה להשתלה 19. שני perfusate בעוד הכבד הוא להיות perfused במעגל vivo לשעבר,nd ניתן לדגום המרה המיוצרת במהלך זלוף למדידת סמנים של תפקוד איבר. בדרך זו &quot;קשה התפשר&quot; כבדים שמושלכים להשתלה תחת הקריטריונים הנוכחיים ניתן להעריך באופן אובייקטיבי כלהתאמתם להשתלה. הערכת כדאיות פוטנציאלית מאפשרת לרבים מאיברים אלה כדי להיות מנוצלים לצורך ההשתלה. יתרון חזק באותה מידה של זלוף מכונה הוא תיקון ושיפור של כבדים שניזוקו על ידי איסכמיה החמה / קרה. ATP מתרוקן בקצב מהיר מאוד באיסכמיה הקרה חמה ולאחר מכן וניתן repleted בתקופה של זלוף מכונה לפני ההשתלה של הכבד 20. הכבד, עם מאגרי האנרגיה שלה ומצב מטבולים מתחדש, הוא preconditioned ומוכן יותר להשפעות המזיקות של פגיעת reperfusion לאחר ההשתלה בנמען. עבודה זו מתארת ​​שיטה של זלוף המכונה vivo לשעבר של גרף כבד אנושיts במעבדה, אשר תהיה שימושי לחוקרים המבקשים ללמוד גם את הטכניקה והשפעות מיטיבות של vivo לשעבר זלוף מכונה. אנו עושים שימוש בכבדי תורם אנושיים שנדחו להשתלה ולאחר מכן הוקצו למטרות מחקר. טכניקת רכש כבד סטנדרטית כרוכה בסומק עורקים באתרו של הכבד הבא הידוק צולב אב העורקים בתורמי המוח מתים (DBD) או לאחר מעצר דם בתורמי דם מוות (DCD), תיארו בפירוט רב יותר במקום אחר 20. בנוסף, הכבד הוא מקורר במהלך הרכש על ידי מילוי חלל הבטן של התורם עם קרח. העדפות פתרון סומק להשתנות בין האזורים, עם רוב הרכישות באמצעות אוניברסיטת ויסקונסין או פתרון היסטידין טריפטופן-ketoglutarate (HTK). שטיפה-שולחן נוספת של וריד השער משפרת את שטיפת דם שייר. כבד לעתים קרובות נרכשים עוזב sur קטע של אב העורקיםעיגול תא מטען צליאק. כיס המרה היא חרות, מרה היא aspirated, ואת צינור המרה הוא הסמיק. הכבדים ארוזים בשקיות סטרילית המכילות פתרון שימור קר כקרח ומועברים בקופסות או קירור ייעודיים. לקבלת תוצאות נציג זמן איסכמיה החמה וקר צריך להיות מוגבל ל 60 דקות ושעה 12, בהתאמה. למרות הקרנה סרולוגיות שגרתית לפתוגנים transmissible, יש לנקוט באמצעי זהירות סטנדרטי בעת מסירת איברים אנושיים, דגימות שהתקבלו מאיברים אנושיים, וכל חומרי פסולת. הפרוטוקול כאן מתאר זלוף המכונה subnormothermic באמצעות מכשיר זלוף הכבד זמין מסחרי. שימוש במכשיר כזה מאפשר לתרגום מהיר יותר להגדרה הקלינית ואימות צולבת של פרוטוקולים שונים והגדרות מכשיר בין קבוצות מחקר ומרכזי השתלות.

<table><tbody><tr><td>Liver Assist perfusion device</td><td>Organ Assist B.V.</td><td>Liver Assist</td><td></td></tr><tr><td>Liver Assist disposable set</td><td>Organ Assist B.V.</td><td>Liver Assist disposable</td><td></td></tr><tr><td>Williams&amp;rsquo; Medium E</td><td>Sigma</td><td>W1878&amp;ndash;6x500ml</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Eli Lilly &amp;amp; Co</td><td>Humulin R U-100</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin 5,000 U/ml</td><td>Life Technologies</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Invitrogen</td><td>25030-156</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>MGH pharmacy</td><td>7750500</td><td></td></tr><tr><td>Carbogen gas tank 95% O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;/5% CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Airgas</td><td>ZO2OX9522000043</td><td></td></tr><tr><td>Specialty gas regulator</td><td>Airgas</td><td>Y11244D580</td><td></td></tr><tr><td>Lactated Ringer&amp;rsquo;s solution</td><td>Baxter</td><td>2B2324X</td><td></td></tr><tr><td>10% neutral buffered formalin</td><td>Fischer Scientific</td><td>316-155</td><td></td></tr><tr><td>Toothed Adson forceps</td><td>Roboz</td><td>RS-5234</td><td></td></tr><tr><td>Debakey tissue forceps, 7.75&amp;rdquo;, 2.25 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-7562</td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum Scissors 7&quot; Curved SureCut Tungsten</td><td>Roboz</td><td>RS-6965SC</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo Needle holder 5.5&amp;ndash;7&amp;rdquo;</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>0 blackbraided silk sutures</td><td>Ethicon</td><td>SA66G</td><td></td></tr><tr><td>4-0 nylon suture, Nurolon RB1</td><td>Ethicon</td><td>C554D</td><td></td></tr><tr><td>Blood gas analysis machine</td><td>Siemens</td><td>RapidPoint 500</td><td></td></tr><tr><td>Balance scale</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-10000-12</td><td></td></tr><tr><td>Pressure display box</td><td>Medtronic</td><td>66000</td><td></td></tr><tr><td>Disposable pressure display sets</td><td>Medtronic</td><td>61000</td><td></td></tr><tr><td>Handheld thermocouple thermometer and probe</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-91500-04 and EW-08516-55</td><td></td></tr><tr><td>Acorn-tipped vessel cannula, 4 mm</td><td>Medtronic</td><td>30005</td><td></td></tr><tr><td>Irrigation set flush tubing</td><td>Hospira</td><td>06543-01</td><td></td></tr><tr><td>Mixing bowl, 4 L</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-07300-40</td><td></td></tr></tbody></table>

functional human liver preservation and recovery by means of subnormothermic machine perfusion

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation. Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of donor livers. Machine perfusion of donor liver grafts is an alternative to traditional cold storage of livers and holds much promise as a modality to expand the donor organ pool. We have recently described the potential benefit of subnormothermic machine perfusion of human livers. Machine perfused livers showed improving function and restoration of tissue ATP levels. Additionally, machine perfusion of liver grafts at subnormothermic temperatures allows for objective assessment of the functionality and suitability of a liver for transplantation. In these ways a great many livers that were previously discarded due to their suboptimal quality can be rescued via the restorative effects of machine perfusion and utilized for transplantation. Here we describe this technique of subnormothermic machine perfusion in detail. Human liver grafts allocated for research are perfused via the hepatic artery and portal vein with an acellular oxygenated perfusate at 21 &#176;C.

מספר התצפיות והניתוחים יכול להתבצע על הכבד במהלך זלוף, כולל תצפיות בזמן אמת ישירות, כגון שיעורי זרימה וייצור מיצי מרה; מדידות בזמן אמת, כגון ניתוח גז של perfusate, ומדידות הפוסט הוק-שנעשות לאחר איסוף הדגימה כוללים ניתוח ביוכימי של perfusate ורקמות וניתוח היסטולוגית. תוצאות שהוזכרו כאן הן מ -22 כבדים אנושיים perfused. כבד נדחו להשתלת מסיבות שונות, כולל גיל תורם, זמן איסכמי החם מוגזם, תוצאות ביופסיה (steatosis, דלקת, פיברוזיס) ומסיבות לוגיסטיות. 18 כבדים היו רכש לאחר מוות לבבי, ו- 4 הבאים מוות מוחי. בשני המקרים, תורמים טופלו קודם לכן ב30,000 יחידות של הפרין וסמוק באתר ועל השולחן בחזרה עם פתרון UW. זמן ממוצע איסכמי הקר היה 531 ± 237 דקות (SD) ואת זמן איסכמי החם הממוצע היה 27 ± 10 דקות (SD), נמדד מנסיגה של חייםתמיכה לסומק קר. תצפיות בזמן אמת ומדידות ניתן להשתמש כדי להעריך את הכבד במהלך זלוף, ואילו מדידות פוסט הוק-מתגלות לאחר זלוף. תצפיות בזמן אמת זרימה דרך כבד מתחילה נמוכה משיעורי זרימת היעד, כתוצאה מהתנגדות גבוהה יותר בכבד הקר. שימוש בלחץ של 3 מ&quot;מ כספית על PV ו -30 מ&quot;מ כספית בHA בדרך כלל ניתן להשיג תזרים היעד פעם הכבד התחמם עד 21 &#160; ° C לאחר 60 דקות של זלוף (איור 1 א). זרימת מרה בדרך כלל ניתן להבחין בתוך 10 דקות של זלוף והוא מיוצר בהתמדה במהלך זלוף (איור 1). כמות מרה תלויה באיכות של הכבד ונעה בין 0.3 מיליליטר / שעה / כבד קילוגרם ל -18 מיליליטר / דקה / קילוגרם. בכבדים עם זמן איסכמי חם יותר, זרימת מרה נוטה לרדת, ואילו תוצאות קצרות יותר חמות איסכמי זמן ביותר יציב או אפילו הגדלתייצור מיצי מרה. מדידות בזמן אמת מדידה ישירה ותכופה של perfusate על ידי ניתוח גז דם בחיוני הן למטרות הניסוי, כמו גם תנאי זלוף נאותים שמירה, חשוב חמצון וpH. לחץ חלקי של חמצן מומס צריך להיות גדול מ -700 מ&quot;מ כספית על יבוא של שני PV וHA. לחץ יצוא חמצן, שנמדד בווריד הנבוב, בדרך כלל יורד עם זלוף יותר, המשקף ספיגת חמצן גוברת. ניתן לחשב שיעורי ספיגת חמצן כפי שתוארו לעיל 13 ונעו 0.5-2.2 2 / min / קילוגרם O מיליליטר בתחילת זלוף ל2.4-9.7 2 / min / קילוגרם O מיליליטר ב t = 3 שעות (איור 1 ג). ירידה בpH הוא ציין ב30 דקות הראשונות (1D איור), כתוצאה משחרור חומצת החלב בperfusate בעיקר. זה יכול להיות נתמך על ידי תוספת של 8.4% bicarbo נתרןנייט ולאחר כ -90 דקות pH נופל חזרה לטווח נורמלי. בדרך כלל, 30-50 מיליליטר של 8.4% סודיום ביקרבונט נדרש. עליות חומצת החלב ריכוז במהירות בדקות 15-30 הראשונות, אבל מתחילה פטירה אחרי השעה הראשונה (איור 1E). מדידות פוסט-הוק transaminases כבד כגון ALT ניתן למדוד בperfusate. ב -30 דקות הראשונות עלייה גדולה של ALT בדרך כלל נצפתה המשקפת את כישלון של ALT ששוחרר במהלך איסכמיה (איור 1F). ALT הוצגו לתאם גם עם זמן איסכמי חם 13. זלוף מכונת מוגבר תוכן ATP 2.8 לקפל, המשקף מצב התאוששות אנרגיה (איור 1G). ניתוח היסטולוגית H &amp; E מגלה שום פגיעה נוספת נגרמה במהלך זלוף מכונה (איור 1H, I). יש לציין כי משטר הביופסיה שהוצע בפרוטוקול זה הוא למילמטרות וearch לא יכולות להיות ישימות למטרות קליניות. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52777/52777fig1.jpg" /> איור 1:. הערכה של כבדים אנושיים במהלך זלוף מכונה לזרום דרך PV וHA במהלך SNMP (), ייצור מיצי מרה, לכמת לשעה של זלוף (B), שיעור uprate חמצן (שלנו), מחושב על פי הפרש ביבוא (PV + HA) ויצוא (וריד נבוב), הפסיק את הקווים להראות לחצים חלקיים של חמצן בin-והיצוא במהלך זלוף (C), pH וחומצת חלב במהלך זלוף (D, E), שחרורו של ALT לperfusate (F), ATP תוכן שנמדד ברקמות מביופסיות לשעה (G) וכתמי H &amp; E של הכבד (DCD 54 שנה ישנה, ​​איסכמיה החמה 19 דקות, איסכמיה הקרה 559 דקות) לפני וזלוף (H) לאחר (I). תוצאות מוצגות כממוצע ± SEM. <ahref = היעד &quot;https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/52777/52777fig1large.jpg&quot; = &quot;_ blank&quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Watch this Scientific Journal Video about Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion at JoVE.com

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

אנו מתארים שיטה של זלוף המכונה vivo לשעבר של שתלי כבד אנושיים בטמפרטורת subnormothermic (21 מעלות צלזיוס).

אדם תפקודי כבד שימור ושחזור על ידי אמצעי Subnormothermic מכונת זלוף

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

functional-human-liver-preservation-recovery-means-subnormothermic

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

16.7K Views.  Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School.  אנו מתארים שיטה של זלוף המכונה vivo לשעבר של שתלי כבד אנושיים בטמפרטורת subnormothermic (21 מעלות צלזיוס). 

Video: Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

טכניקה של Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; הכבד זלוף לאחסון, ההערכה, ותיקון שתלי כבד שולי

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal hyperplasia (IH) that eventually leads to vessel occlusion and graft failure. Mechanical forces, particularly low shear stress and high wall tension, are thought to initiate and to sustain these cellular and molecular changes, but their exact contribution remains to be unraveled. To selectively evaluate the role of pressure and shear stress on the biology of IH, an ex&#160;vivo perfusion system (EVPS) was created to perfuse segments of human saphenous veins under arterial regimen (high shear stress and high pressure). Further technical innovations allowed the simultaneous perfusion of two segments from the same vein, one reinforced with an external mesh. Veins were harvested using a no-touch technique and immediately transferred to the laboratory for assembly in the EVPS. One segment of the freshly isolated vein was not perfused (control, day 0). The two others segments were perfused for up to 7 days, one being completely sheltered with a 4 mm (diameter) external mesh. The pressure, flow velocity, and pulse rate were continuously monitored and adjusted to mimic the hemodynamic conditions prevailing in the femoral artery. Upon completion of the perfusion, veins were dismounted and used for histological and molecular analysis. Under ex&#160;vivo conditions, high pressure perfusion (arterial, mean = 100 mm Hg) is sufficient to generate IH and remodeling of human veins. These alterations are reduced in the presence of an external polyester mesh.

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

The mechanisms leading to the development of intimal hyperplasia (IH) and vein graft failure are still poorly understood. This study describes an ex&#160;vivo system to perfuse human veins under controlled flow and pressure. Furthermore the efficiency of external mesh reinforcement to limit the development of IH was evaluated.

נוהל saphenous אדם הוורידים<em&gt; Ex Vivo</em&gt; זלוף וחיצוני חיזוק

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Isolated Hepatic Perfusion as a Treatment for Liver Metastases of Uveal Melanoma

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic agent melphalan. Briefly, the procedure starts with the setup of a percutaneous veno-venous bypass from the femoral vein to the external jugular vein. Via a laparotomy, catheters are then inserted into the proper hepatic artery and the caval vein. The portal vein and the caval vein, both supra- and infrahepatically, are then clamped. The arterial and venous catheters are connected to a heart lung machine and the liver is perfused with melphalan (1 mg/kg body weight) for 60 min. This way it is possible to locally perfuse the liver with a high dose of a chemotherapeutic agent, without leakage to the systemic circulation.
In previous studies including patients with isolated liver metastases of uveal melanoma, an overall response rate of 33-100% and a median survival between 9 and 13 months, have been reported. The aim of this protocol is to give a clear description of how to perform the procedure and to discuss IHP as a treatment option for liver metastases of uveal melanoma.

Here, we present a protocol how to perform an isolated liver perfusion (IHP) with melphalan and we also discuss IHP as a treatment option for liver metastases of uveal melanoma.

כבדית זלוף המבודד לטיפול בכבד גרורות של מלנומה של הענביה

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic ...

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing modified cannulas and techniques adapted from conventional commercial ex vivo perfusion equipment. The system was utilized to evaluate the preservation outcomes following 12 h of perfusion. C57BL/6J mice served as liver donors, and the livers were explanted by cannulating the portal vein (PV) and bile duct (BD), and subsequently flushing the organ with warm (37 &#176;C) heparinized saline. Then, the explanted livers were transferred to the perfusion chamber and subjected to normothermic oxygenated machine perfusion (NEVLP). Inlet and outlet perfusate samples were collected at 3 h intervals for perfusate analysis. Upon completion of the perfusion, liver samples were obtained for histological analysis, with morphological integrity assessed using modified Suzuki-Score through Hematoxylin-Eosin (HE) staining. The optimization experiments yielded the following findings: (1) mice weighing over 30 g were deemed more suitable for the experiment due to the larger size of their bile duct (BD). (2) a 2 Fr (outer diameter = 0.66 mm) polyurethane cannula was better suited for cannulating the portal vein (PV) when compared to a polypropylene cannula. This was attributed to the polyurethane material&#39;s enhanced grip, resulting in reduced catheter slippage during the transfer from the body to the organ chamber. (3) for cannulation of the bile duct (BD), a 1 Fr (outer diameter = 0.33 mm) polyurethane cannula was found to be more effective compared to the polypropylene UT - 03 (outer diameter = 0.30 mm) cannula. With this optimized protocol, mouse livers were successfully preserved for a duration of 12 h without significant impact on the histological structure. Hematoxylin-Eosin (HE) staining revealed a well-preserved morphological architecture of the liver, characterized by predominantly viable hepatocytes with clearly visible nuclei and mild dilation of hepatic sinusoids.

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

A normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) system was created for mouse livers. This system requires experience in microsurgery but allows for reproducible perfusion results. The ability to utilize mouse livers facilitates the investigation of molecular pathways to identify novel perfusate additives and enables the execution of experiments focused on organ repair.

זילוח מכונת כבד Normothermic Ex Vivo בעכבר

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing ...

Engineering

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

באתרו לשעבר Normothermic מכונת זלוף של כבדים תורמים

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

<meta charset="utf8"></head><body>שימור השתלת כבד חזיר אורתוטופי באמצעות זילוח מכונה

Preservation of Porcine Donation after Circulatory Death (DCD) Liver by Perfusion and Orthotopic Liver Transplantation

Conventional static cold storage (SCS) exacerbates ischemic injury in the DCD liver, leading to severe complications for transplant recipients. To address this issue, clinical application of MP technology for donor liver preservation is underway. Simultaneously, efforts are focused on the development of various MP instruments, validated through relevant animal model experiments. Effective large animal trials play a pivotal role in clinical applications. However, challenges persist in the ex vivo preservation of DCD livers and the transplantation procedure in pigs. These hurdles encompass addressing the prolonged preservation of donor livers, conducting viability tests, alleviating ischemic injuries, and shortening the anhepatic phase. The use of a variable temperature-controlled MP device facilitates the prolonged preservation of DCD livers through sequential Dual Hypothermic Oxygenated Machine Perfusion (DHOPE) and Normothermic Machine Perfusion (NMP) modes. This protocol enhances the porcine OLTx model by improving the quality of DCD livers, optimizing the anastomosis technique, and reducing the duration of the anhepatic phase.

<meta charset="utf8"></head><body>מחבר זרקור: התקדמות ואתגרים בזילוח מכונה להשתלת כבד

This protocol outlines the methodology of establishing a porcine model utilizing variable temperature-controlled Machine Perfusion (MP) for the preservation of the donor liver, followed by orthotopic liver transplantation (OLTx). It aims to promote the success rate of OLTx using donor donation after circulatory death (DCD) liver and establish a stable model.

שימור תרומת חזיר לאחר מוות במחזור הדם (DCD) כבד על ידי זילוח והשתלת כבד אורתוטופית

Conventional static cold storage (SCS) exacerbates ischemic injury in the DCD liver, leading to severe complications for transplant recipients. To address ...

Bioengineering

Avoiding Ischemia Reperfusion Injury in Liver Transplantation

Currently, ex situ machine perfusion is a burgeoning technique that provides a better preservation method for donor organs than conventional static cold preservation (0&#8211;4 &#176;C). A continuous blood supply to organs using machine perfusion from procurement and preservation to implantation facilitates complete prevention of ischemia reperfusion injury and permits ex situ functional assessment of donor livers before transplantation. In this manuscript, we provide a step-by-step ischemia-free liver transplantation protocol in which an ex situ normothermic machine perfusion apparatus is used for pulsatile perfusion through the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein from human donor livers to recipients. In the perfusion period, biochemical analysis of the perfusate is conducted to assess the metabolic activity of the liver, and a liver biopsy is also performed to evaluate the degree of injury. Ischemia-free liver transplantation is a promising method to avoid ischemia-reperfusion injury and may potentially increase the donor pool for transplantation.

Presented here is a protocol to provide a step-by-step ischemia-free liver transplantation protocol under ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human livers from donors to recipients.

Currently, ex situ machine perfusion is a burgeoning technique that provides a better preservation method for donor organs than conventional static cold ...

אדם תפקודי כבד שימור ושחזור על ידי אמצעי Subnormothermic מכונת זלוף

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

טכניקה של Subnormothermic

נוהל saphenous אדם הוורידים

כבדית זלוף המבודד לטיפול בכבד גרורות של מלנומה של הענביה

זילוח מכונת כבד Normothermic Ex Vivo בעכבר

באתרו לשעבר Normothermic מכונת זלוף של כבדים תורמים

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

שימור תרומת חזיר לאחר מוות במחזור הדם (DCD) כבד על ידי זילוח והשתלת כבד אורתוטופית

שימור תרומת חזיר לאחר מוות במחזור הדם (DCD) כבד על ידי זילוח והשתלת כבד אורתוטופית

שימור תרומת חזיר לאחר מוות במחזור הדם (DCD) כבד על ידי זילוח והשתלת כבד אורתוטופית

Avoiding Ischemia Reperfusion Injury in Liver Transplantation