המחקר מומן על ידי אוניברסיטת Linköping המועצה של מחוז Östergötland.

1. Ovariectomy דרך כביש הגבי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את בעל החיים, למשל באמצעות 1.5% isoflurane (4% לזירוז) ב תחמוצת החמצן / החנקן 30% / 70% תערובת. מניחים את חיה במצב נוטה על צלחת חימום מחובר מדחום רקטלי. חשוב יש שכבה דקה של בידוד בין החיה לבין צלחת, וכי במערכת ההזנה גב המדחום שומר על טמפרטורת הגוף בתוך 37 ± 0.5 ° C. החל ג&#39;ל להגנה העין ולנהל 5 מ&quot;ג Rimadyl / ק&quot;ג משקל גוף מדולל מלוחים מתחת לעור על ההיבט לרוחב הצוואר של החיה להקלה על הכאב לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבי 4 * 4 ס&quot;מ (3 * 3 ס&quot;מ עבור עכברים) באזור cephally מפסגת הכסל. לשטוף את האזור ביסודיות עם מגולח עבור Jodopax למשל לפני המכסה את חיה עם 4 * 4 ס&quot;מ צמצם גיליון הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קו האמצע 2-3 ס&quot;מ בוטה לנתח את העור fascia הבסיסית. אחד ס&quot;מ לרוחב של קו האמצע, לעשות עוד thro החתךאיכס fascia. חד וחלק לנתח רוחבית תחת fascia זאת באופן שטחי ככל האפשר להגיע עד חלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות פינצטה, לתפוס את רקמת השומן המקיף את השחלה בחלל הבטן בעדינות למשוך אותו החוצה. זהה את השחלה ו ולקשור את קרני הרחם וכלי 0.5-1 ס&quot;מ proximally של מבנה זה. לחתוך את השחלה ורקמת השומן ligated והחזרתי את הרקמה שנותרה לתוך חלל הבטן. לעשות עוד חתך ב fascia הנגדי וחזור על התהליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגור את הפצעים, רצוי באמצעות תפר monofilament, ולתת חיים ער מן ההרדמה. מניחים את בעל החיים בכלוב מחוממת (25-27 מעלות צלזיוס) במשך לפחות 2 שעות לאחר הניתוח. בעלי החיים צריכים להיות מאוחסנים בנפרד בימים הראשונים לאחר הניתוח. זה מרכזי כי הוא ניקה את הכלוב לעתים קרובות / להחליף בשלב ההתאוששות. עשרים וארבע שעות לאחר הניתוח, מזריקים את החיות מתחת לעור עם עוד משקל גוף 5 Rimadyl / ק&quot;ג מ&quot;ג מדוללמי מלח. </li></ol> 2. תת עורית מינהל 17β-אסטרדיול דרך קפסולות Silastic <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים היטב את הכמות הרצויה של 17β-אסטרדיול בשמן שומשום. עבור ריכוזים פיזיולוגיים אצל חולדות ועכברים, אנו ממליצים על 180 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​ו - 18-36 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​בהתאמה. כמוסות פלסבו מלאים שמן שומשום טהור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך 3 ס&quot;מ (2 ס&quot;מ על עכברים) באורכים של צינורות silastic ו -5 מ&quot;מ (3 מ&quot;מ על עכברים) אורכי מקלות המוליך עץ עבור חיבור. באמצעות מלקחיים, לסחוט 1 תקע עץ לתוך הקפסולה silastic לפני הזרקת הפתרון שמן 17β-estradiol/sesame למלא את אורכו. בעדינות מכסה את הקפסולה silastic בסופו של דבר לפתוח עם חבר אחר עץ (את המצתים אמורים להישאר באופן קבוע קפסולה). דגירה כמוסות בתמיסה 17β-אסטרדיול הנותרים לילה לפני ההשתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתלת הקפסולה ניתן לבצע במהלך ההרדמה בשימוש ovariectomy בחולדות. עבור מייללספירה, עם זאת, תקופה של 14 יום לאחר ההתאוששות ovariectomy מומלץ כדי למזער את הסיכון של הקפסולה בולטות דרך העור שביר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ההכנות כירורגית כמו 1.1, או לאחר סגירת החתך ovariectomy, להתגלח ולשטוף 2 * 2 ס&quot;מ באזור בהיבט הגבי של הצוואר של בעל החיים. לעשות חתך 1 ס&quot;מ בוטה לנתח בכיס תת עורית caudolaterally, עם שטח נרחב של הקפסולה. נגב את הקפסולה silastic (שעד נקודת זמן זו כבר מודגרות בפתרון 17β-אסטרדיול) ובעדינות להתקין אותו דרך חתך, אשר נסגר לאחר מכן על ידי תפר. זה מרכזי על מנת לוודא כי זנים הקפסולה העור מעט ככל האפשר, בעיקר באזור קרוב הפצע. מייצור של כמוסות עד ההשתלה, חשוב כי זיהום הוא התחמק. </li></ol> 3. מינהל Peroral של 17β-אסטרדיול דרך נוטלה אגוזים, קרם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפזר ביסודיות 17β-אסטרדיול בשמן שומשום, ואז לערבב עם שמן שומשום הנוטלה. אנו ממליצים כי כל חלק מכיל 28 מיקרוגרם ביום 17β-אסטרדיול, 5 שמן שומשום μL ו 1 הנוטלה גרם לכל קילוגרם משקל גוף לחולדות ו 1.12 מיקרוגרם 17β-אסטרדיול, 0.312 שמן שומשום μL ו 60 מ&quot;ג הנוטלה על העכבר 30 גר &#39;כל אחד. פלצבו אגוז קרם מוכן זהה רק בלי 17β-אסטרדיול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכשיר את בעלי החיים לאכול הורמון ללא קרם אגוזים במשך חמישה ימים לפני הניסוי. הראשונים שלושה ימים של אימונים, החולדות בצורה אופטימלית צריך לאמן בקבוצות (בערך 0.5 גרם ל 2-5 הנוטלה בעלי חיים), בכלובים מוצאם. בימים רביעי וחמישי של אימונים, החיות לשים בכלובים נפרדים לפני שקיבל את החלק היומי לדמות את המצב ניסיוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הניסוי, החיות לשים בכלובים נפרדים לכל אירוע האכלה, לאחר מכן את החלק הנוטלה מוגשת על אריחי קרמיקה קטנים. אם האימונים שבוצעה לעיל, oניסיון ur היא כי יותר מ 95% של חולדות ועכברים לקבל אגוז, שמנת, ופעם מורגל לחלוטין, רוב בעלי החיים צורכים אותו תוך שניות. </li></ol> 4. נציג תוצאות פיזיולוגיים בסרום 17β-אסטרדיול ריכוזי, אשר השיטות הקיימות שמטרתם לשחזר, הם כ 5-140 pg / mL עבור חולדות 5-35 pg / mL על עכברים 4,6. את הכמוסות תת עורי silastic בהתאם להוראות הנ&quot;ל, כאשר מנוהל ל -300 גר &#39;נשים Sprague-Dawley חולדות, לייצר לאט יורד 17β-אסטרדיול ריכוז בסרום של היום סביב 40 ​​pg / mL יום pg / mL 2-10 35. עם זאת, מיד לאחר מתן, לשיא הריכוז בדם סביב 1000 pg / mL ניתן לצפות, נופל לטווח הפיזיולוגי בתוך 8 שעות (איור 1 א) 4,5. את הכמוסות silastic עבור עכברים שתוארו לעיל עם 17β-estradiol/mL 36 מיקרוגרם, כאשר מנוהל עד 25 גרם נקבה C57BL / 6 עכברים, להפוך קונצרט כלשהו סרוםentrations כי לאט לאט להפחית מן PG כ 90 / יום מ&quot;ל 2-25 pg / mL 35 יום. זה קדמו כנראה לשיא דומה נמצאה אצל חולדות, אם כי זה לא נחקר (איור 1 ב) 6. שיטת הנוטלה peroral עם מינונים שתוארו לעיל, כאשר מנוהל ל -300 גר &#39;נשים Sprague-Dawley חולדות, הופך רמות פיזיולוגיות של 17β-אסטרדיול עם תנודות יומיות בין 10-70 pg / mL (איור 2 א) 4. על עכברים באמצעות המינון לעיל, רמות יומיות משתנות בין כ 20 ו - 120 pg / mL (איור 2 ב) 6. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/4013/4013fig1.jpg" /> <st<html> Rong.&gt; איור 1 גרפים המציגים מסוגננים 17β-אסטרדיול ריכוזים של חולדות (, n = 10 בזמן נקודות עד 24 שעות, n = 15 ב מאוחרים יותר זמן נקודות) 4.5 ו עכברים (B, n = 10) 6 לאחר ההשתלה הקפסולה. את הכמוסות silastic לייצר שיא ראשונית קצרה של ריכוזים בסרום עד 1000 pg / mL, אבל ירידה תוך מספר שעות לרמות נמוכות 100 pg / mL. בשבועות הקרובים 4-5, קפסולות התשואה יציבה, למרות יורדת בהתמדה, ריכוז בסרום. באזורים מוצלים מתאימות 17β-אסטרדיול בסרום ריכוזים פיזיולוגיים של חולדות נקבות ועכברים שלמים בהתאמה. גם אם לא הוכיח ראייה הגרפים, יש בין הפרט השונות של 17β-אסטרדיול ריכוזי, עיבוד מקדמי השונות בין 27% ל 183 בחולדות מ 28 ל 115% בעכברים עם שיטת הקפסולה silastic (ממוצע נמוך מאוד לעתים קרובות ליצור ריכוז גבוה של מקדמי השונות). iles/ftp_upload/4013/4013fig2.jpg &quot;/&gt; איור 2 גרפים המציגים מסוגננים 17β-אסטרדיול ריכוזים של חולדות (, n = 15). 4 ו עכברים (B, n = 10) 6 כתוצאה של הממשל הורמון מדי יום הנוטלה. שיטת הנוטלה peroral הופך פסגות היומי, אך לא בהרבה גבוה ככל המיוצר על ידי תת עורית או בשיטות תוך ורידי. זה מחקה את פרמקוקינטיקה של טיפול הורמונלי חלופי האדם, והטיפול peroral יכול להמשיך כל עוד הצורך, גם אם בדוגמה לעיל רק להציג ראשונית 96 שעות. באזורים מוצלים מתאימות 17β-אסטרדיול בסרום ריכוזים פיזיולוגיים של חולדות נקבות ועכברים שלמים בהתאמה. גם אם לא הוכיח ראייה הגרפים, יש בין הפרט השונות של 17β-אסטרדיול ריכוזי, עיבוד מקדמי וריאציה מ% 40-132 בחולדות מ 13 ל 219% בעכברים עם שיטה את הנוטלה (ריכוזים ממוצעים נמוכים מאוד לעתים קרובות יוצרים גבוההמקדמי השונות).

<ol>
	<li>Strom, J. O., Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-related+neuroprotective+versus+neurodamaging+effects+of+estrogens+in+rat+cerebral+ischemia:+a+systematic+analysis.">Dose-related neuroprotective versus neurodamaging effects of estrogens in rat cerebral ischemia: a systematic analysis.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 29, 1359-1372 (2009).</li><li>Strom, J. O., Theodorsson, E., Holm, L., Theodorsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+methods+for+administering+17beta-estradiol+to+ovariectomized+rats+result+in+opposite+effects+on+ischemic+brain+damage.">Different methods for administering 17beta-estradiol to ovariectomized rats result in opposite effects on ischemic brain damage.</a> BMC Neurosci. 11, 1471-2202 (2010).</li><li>Strom, J. O., Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormesis+and+Female+Sex+Hormones.">Hormesis and Female Sex Hormones.</a> Pharmaceuticals. 4, 15 (2011).</li><li>Isaksson, I. M., Theodorsson, A., Theodorsson, E., Strom, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+17beta-estradiol+administration+to+rats.">Methods for 17beta-estradiol administration to rats.</a> Scandinavian journal of clinical and laboratory investigation. , (2011).</li><li>Strom, J. O., Theodorsson, E., Theodorsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+of+magnitude+differences+between+methods+for+maintaining+physiological+17beta-oestradiol+concentrations+in+ovariectomized+rats.">Order of magnitude differences between methods for maintaining physiological 17beta-oestradiol concentrations in ovariectomized rats.</a> Scand. J. Clin. Lab Invest. 68, 814-822 (2008).</li><li>Ingberg, E., Theodorsson, A., Theodorsson, E., Strom, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+long-term+17beta-estradiol+administration+to+mice.">Methods for long-term 17beta-estradiol administration to mice.</a> General and comparative endocrinology. , (2011).</li><li>Kalliokoski, O., Jacobsen, K. R., Hau, J., Abelson, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+concentrations+of+buprenorphine+after+oral+and+parenteral+administration+in+male+mice.">Serum concentrations of buprenorphine after oral and parenteral administration in male mice.</a> Vet. J. 187, 251-254 (2011).</li><li>Simpkins, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogens+may+reduce+mortality+and+ischemic+damage+caused+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+female+rat.">Estrogens may reduce mortality and ischemic damage caused by middle cerebral artery occlusion in the female rat.</a> J. Neurosurg. 87, 724-730 (1997).</li><li>Wise, P. M., Dubal, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+protects+against+ischemic+brain+injury+in+middle-aged+rats.">Estradiol protects against ischemic brain injury in middle-aged rats.</a> Biol. Reprod. 63, 982-985 (2000).</li><li>Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-induced+recovery+of+autonomic+function+after+middle+cerebral+artery+occlusion+in+male+rats.">Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 281, 1531-1539 (2001).</li><li>Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+effects+of+17beta-oestradiol+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion.">Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 25, 414-420 (2005).</li><li>Carswell, H. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+17beta-estradiol+upon+stroke+damage+in+stroke+prone+and+normotensive+rats.">Differential effects of 17beta-estradiol upon stroke damage in stroke prone and normotensive rats.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 24, 298-304 (2004).</li><li>Yong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17beta-estradiol+potentiates+ischemia-reperfusion+injury+in+diabetic+ovariectomized+female+rats.">17beta-estradiol potentiates ischemia-reperfusion injury in diabetic ovariectomized female rats.</a> Brain Res. 1054, 192-199 (2005).</li><li>Theodorsson, A., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+increases+brain+lesions+in+the+cortex+and+lateral+striatum+after+transient+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+rats:+no+effect+of+ischemia+on+galanin+in+the+stroke+area+but+decreased+levels+in+the+hippocampus.">Estradiol increases brain lesions in the cortex and lateral striatum after transient occlusion of the middle cerebral artery in rats: no effect of ischemia on galanin in the stroke area but decreased levels in the hippocampus.</a> Peptides. 26, 2257-2264 (2005).</li><li>Levin-Allerhand, J. A., Sokol, K., Smith, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safe+and+effective+method+for+chronic+17beta-estradiol+administration+to+mice.">Safe and effective method for chronic 17beta-estradiol administration to mice.</a> Contemp. Top Lab Anim. Sci. 42, 33-35 (2003).</li></ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

מצבי ניהול שהוצגו לעיל יש מחקרים קודמים הוכיחו עליונות שחרור איטי כדורי מסחריים זריקות במונחים של הפקת ריכוזים בסרום הפיזיולוגיות של 17β-אסטרדיול. בעוד כדורי שחרור איטי לייצר גבוהות מאוד וממושכת פסגות ריכוז בסרום, הזריקות גורמים קיצוניים, תנודות ההורמונים היומיות ו...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> Rimadyl, 50 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td><td> פייזר </td><td> 462986 </td><td> שיכוך כאבים לאחר הניתוח לאחר ovariectomy. </td></tr><tr><td> Lubrithal ג&#39;ל עיניים </td><td> ליאו מעבדות </td><td></td><td> עין ההגנה במהלך הניתוח. </td></tr><tr><td> Jodopax הווטרינר </td><td> Pharmaxim </td><td></td><td> ניתוח חיטוי. </td></tr><tr><td> תפר 4-0 Vicryl </td><td> ג&#39;ונסון אנד ג&#39;ונסון </td><td></td><td> בסופו של תפר ו קשירת השחלה. </td></tr><tr><td> 17β-אסטרדיול,&gt; 98% </td><td> סיגמא </td><td> E8875-1G </td><td> בשמן שומשום על קפסולות silastic ו נוטלה. </td></tr><tr><td> שמן שומשום </td><td> סיגמא </td><td> S3547-1 ליטר </td><td> המסת 17β-אסטרדיול. </td></tr><tr><td> צינורות Silastic, מזהה / OD: 1.575/3.175 מ&quot;מ </td><td> Dow Corning </td><td> 508-008 </td><td> ייצור של כמוסות silastic. </td></tr><tr><td> המוליך מעץ מקל </td><td> Selefatrade </td><td> 12-0783 </td><td> מכסת של כמוסות silastic. </td></tr><tr><td> נוטלה </td><td> פררו </td><td></td><td> בינונית peroral 17β-אסטרדיול. </td></tr></tbody></table>

ovariectomy and 17&beta;-estradiol replacement in rats and mice: a visual demonstration

אסטרוגנים הם משפחה של הורמונים המין הנשי עם קשת רחבה של תופעות. כאשר חולדות ועכברים משמשים במחקר אסטרוגן הם ovariectomized בדרך כלל על מנת לקטוע את ייצור הורמון במהירות רכיבה על אופניים, החלפת 17β-אסטרדיול exogenously. יש, עם זאת, חוסר הסכמה לגבי אופן ההורמון צריכה להינתן להשיג ריכוזים בסרום פיזיולוגיים. זה קריטי, מאחר 17β-אסטרדיול ברמה / שיטת הממשל באופן עמוק משפיע על תוצאות הניסוי 1-3. יש לנו בשורה של מחקרים שאפיינו את מצבים שונים של הממשל 17β-אסטרדיול, שמצא כי תת עורי כמוסות silastic ו לכל בעל פה אגוז קרם נוטלה נעלים על שחרור איטי כדורי זמינים מסחרית (המיוצר על ידי החברה מחקר חדשני של אמריקה) זריקות יומיות במונחים של הפקת ריכוזים בסרום הפיזיולוגיות של 17β-אסטרדיול 4-6. בין עו&quot;דantages של שיטת קרם אגוזים, שקודם לכן שימש במשך 7 עצירות הממשל, היא כי כאשר נעשה שימוש לניהול אסטרוגן הוא דומה peroral טיפול הורמונלי חלופי והוא לא פולשנית. את silastic כמוסות תת עורי נוח לייצר הריכוזים בסרום יציבה ביותר. מאמר זה סרט וידאו כולל שלב אחר שלב הפגנות של ovariectomy ו-17β אסטרדיול הורמונלי על ידי קפסולות silastic ו נוטלה peroral אצל חולדות ועכברים, ואחריה לדיון על היבטים חשובים של תהליכי הניהול.

Watch this Scientific Journal Video about Ovariectomy and 17Î²-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration at JoVE.com

Ovariectomy and 17&#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Ovariectomy והחלפת הבאות של 17β-אסטרדיול באמצעות כמוסות silastic ו נוטלה peroral הם הפגינו חולדות ועכברים.

Ovariectomy ו-17β אסטרדיול החלפת בחולדות ועכברים: הפגנה חזותית

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are ...

ovariectomy-17-estradiol-replacement-rats-mice-visual

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Biology

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

57.1K Views.  Linköping University. Ovariectomy והחלפת הבאות של 17β-אסטרדיול באמצעות כמוסות silastic ו נוטלה peroral הם הפגינו חולדות ועכברים.

Video: Ovariectomy and 17β-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of lesions, and/or chronic pharmaceutical management of pain and infertility symptoms. The cost associated with endometriosis has been estimated at 22 billion dollars per year in the United States1. To further our understanding of mechanisms underlying this enigmatic disease, animal models have been employed. Primates spontaneously develop endometriosis and therefore primate models most closely resemble the disease in women. Rodent models, however, are more cost effective and readily available2. The model that we describe here involves an autologous transfer of uterine tissue to the intestinal mesentery (Figure 1) and was first developed in the rat3 and later transferred to the mouse4. The goal of the autologous rodent model of surgically-induced endometriosis is to mimic the disease in women. We and others have previously shown that the altered gene expression pattern observed in endometriotic lesions from mice or rats mirrors that observed in women with the disease5,6. One advantage of performing the surgery in the mouse is that the abundance of transgenic mouse strains available can aid researchers in determining the role of specific components important in the establishment and growth of endometriosis. An alternative model in which excised human endometrial fragments are introduced to the peritoneum of immunocompromised mice is also widely used but is limited by the lack of a normal immune system which is thought to be important in endometriosis2,7. Importantly, the mouse model of surgically induced endometriosis is a versatile model that has been used to study how the immune system8, hormones9,10 and environmental factors11,12 affect endometriosis as well as the effects of endometriosis on fertility13 and pain14.

A description of the surgical induction of endometriosis in mice and rats by auto-transplantation of uterine tissue to the arterial cascade of the intestinal mesentery.

עכבר דגם של אנדומטריוזיס בניתוח המושרה על ידי השתלת אוטומטי של רקמות הרחם

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Medicine

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning display increased atherosclerotic lesions in the aorta compared with female mice with intact ovarian function. However, laboratory models involving estrogen-deficient mice with atherosclerosis-prone status are lacking. This deficit is crucial because clinical estrogen deficiency in menopausal women may aggravate the incidence of pre-existing or ongoing lipid disruption and atherosclerosis. In this study, we establish an in vivo estrogen-deficient mouse model by bilateral ovariectomy via a double dorsal-lateral incision in apolipoprotein E (apoE)-/- mice. We then compare the effects of 17&#946;-estradiol and pseudoprotodioscin (PPD) (a phytoestrogen) perorally administered via hazelnut spread. We find that although PPD exerts some effect on reducing final body weight and plasma TG in OVX apoE-/- mice, it has anti-atherosclerotic and cardiac-protective capacities comparable with its 17&#946;-estradiol counterpart. PPD is a phytoestrogen that has been reported to exert anti-tumor properties. Thus, the proposed method is applicable for screening phytoestrogens via peroral administration to substitute for traditional hormone replacement therapy in postmenopausal women, which has been reported to have potentially deleterious tumorigenetic capacity. Peroral administration via hazelnut spread is noninvasive, rendering it widely applicable to many patients. This article contains step-by-step demonstrations of bilateral ovariectomy via the double dorsal-lateral incision in apoE-/- mice and peroral 17&#946;-estradiol or phytoestrogen hormone replacement via hazelnut spread. Plasma lipid and cardiovascular function analyses using echocardiography follow.

Clinically, estrogen deficiency in menopausal women may aggravate the incidence of lipid disruption and atherosclerosis. We established an in vivo estrogen deficiency model by bilateral ovariectomy via a double dorsal-lateral incision in apoE-/- mice. The mouse model is applicable for screening exogenous estrogen treatments of cardiovascular dysfunction after menopause.

A In Vivo אסטרוגן מחסור בעכבר מודל עבור ההקרנה הטיפולים האסטרוגן אקסודוגני של בעיות לב וכלי דם אחרי גיל המעבר

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Biochemistry

A Conflict Model of Reward-seeking Behavior in Male Rats

The present protocol describes a novel conflict task as a model of inhibitory control in rats. In this model, a natural rewarding stimulus (sexual stimulus) that represents a high-value reward, and the aversive stimuli (pins), are concurrently presented. The male rats have to climb or jump over the obstacle full of pins to approach and investigate the sexual partner. If the animal persists in their approaching behavior regardless of the aversive stimuli, it is considered as a maladaptive or risky reward-seeking behavior. The conflict task permits the evaluation of deficit in inhibitory control resulting from exposure to abused drug, such as morphine, or a stressful event. 
The main advantage of this model is that it provides a simple and quick way to discover the deficit in inhibitory control after exposure to opiate drugs or other stressful events. In addition to opiates, this behavioral model would also be useful for quickly discovering the inhibitory control deficits induced by other addictive drugs. However, the limitation is that the male rats' performance may be subject to exercising effects with repeated testing under this conflict task. In the future, one can hope that the individuals with the compulsive phenotype of reward-seeking behavior after exposure to opiates will be identified based on modifying this conflict model.

This conflict model is used to measure the impairment of inhibitory control after exposure to addictive drugs, or other factors that may influence inhibitory control. A sexual stimulus and an aversive obstacle are concurrently presented, thus male rats have to conquer the obstacle to approach the sexual reward.

מודל ההתנגשות של שמחפש גמול בחולדות זכר

The present protocol describes a novel conflict task as a model of inhibitory control in rats. In this model, a natural rewarding stimulus (sexual ...

Behavior

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in post-menopausal women has not been adequately studied. Accordingly, we investigated the impact of voluntary cage-wheel exercise and forced treadmill exercise on cardiac adaptation in menopausal mice. The most commonly used inducible model for mimicking menopause in women is the ovariectomized (OVX) rodent. However, the OVX model has a few dissimilarities from menopause in humans. In this study, we administered 4-vinylcyclohexene diepoxide (VCD) to female mice, which accelerates ovarian failure as an alternative menopause model to study the impact of exercise in menopausal mice. VCD selectively accelerates the loss of primary and primordial follicles resulting in an endocrine state that closely mimics the natural progression from pre- to peri- to post-menopause in humans. To determine the impact of exercise on exercise capacity and cardiac adaptation in VCD-treated female mice, two methods were used. First, we exposed a group of VCD-treated and untreated mice to a voluntary cage wheel. Second, we used forced treadmill exercise to determine exercise capacity in a separate group VCD-treated and untreated mice measured as a tolerance to exercise intensity and endurance.

Two exercise paradigms were tested on a newly developed chemically induced menopausal mouse model to examine the impact of menopause on exercise capacity and cardiac adaption to exercise.

שיטה לחקר ההשפעה של כשל שחל מושרה כימי ביכולת גופנית ולב הסתגלות בעכברים

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

Assessment of Sexual Behavior of Male Mice

Sexual behavior is highly species-specific. Although rodents have slightly different sexual behaviors, mice and rats have a similar sexual behavioral pattern. The purpose of this article is to describe the hormone-induced estrus ovariectomized female model and the experimental procedure for the assessment of sexual behavior of male mice. The most important sexual behavioral elements are demonstrated in the video and illustrations. The critical steps, advantages, and limitations of the sexual behavior test are explained as well. Finally, the behavior parameters are presented, and mounting, intromission, and ejaculation processes in mating are distinguished. Behavioral parameters are assessed in terms of the occurred duration and counts during the test period.

This article describes how to perform sexual behavior tests in male mice.

הערכה של התנהגות מינית של עכברים זכרים

Sexual behavior is highly species-specific. Although rodents have slightly different sexual behaviors, mice and rats have a similar sexual behavioral ...

Using 16&#945;-[18F]-Fluoro-17&#946;-Estradiol PET to Visualize Estrogen Receptor &#945; Expression in Human Breast Cancer Xenografts in Female Ovariectomized Mice

To demonstrate how estrogen receptor alpha (ER&#945;) positive breast cancer xenografts may be visualized in BALB/c nude mice using 16&#945;-[18F]-fluoro-17&#946;-estradiol (18F-FES) positron emission tomography (PET), ovariectomized BALB/c nude mice were injected with ER&#945;-positive breast cancer cells (MCF-7, 3 &#215; 106 cells; shoulder [n = 10] or 4th inguinal mammary fat pad [n = 10]) or ER&#945;-negative breast cancer cells (MDA-MB-231, 1 &#215; 106 cells; mammary fat pad [n = 5]). Mice harboring MCF-7 cells received subcutaneous injections of 20 &#181;g of 17&#946;-estradiol (20 &#181;g/20 &#181;L; corn oil:ethanol, 9:1) in the nape of their necks 2 days prior to cell injection, followed by daily injections five times per week for 5 weeks. Tumor volumes were measured according to the formula: (L*W2)/2 (L; length, W; width). Once tumor volumes reached approximately 100 mm3, 17&#946;-estradiol injections were halted 2 days prior to mice receiving 18F-FES for PET imaging to avoid competitive binding with ER&#945;. Upon 18F-FES administration via the lateral tail vein, PET/MRI was performed for 15 min at 1 h to 1.5 h post-injection. 18F-FES uptake was not observed in ER&#945;-negative, MDA-MB-231 tumor-bearing mice. 18F-FES uptake was most pronounced in mice harboring MCF-7 tumors in the shoulder. In MCF-7 tumors grown in the inguinal mammary fat pad, 18F-FES uptake was less visible, as the intestinal excretion pattern of 18F-FES obscured the radioactivity detectable in these tumors. To use 18F-FES PET as a tool to visualize ER&#945; expression in ER&#945;-positive breast xenografts, we demonstrate that the visibility of 18F-FES uptake is clear in tumors located away from the abdominal region of mice, such as in the shoulder.

Here, we demonstrate a protocol to use 16&#945;-[18F]-fluoro-17&#946;-estradiol (18F-FES) positron emission tomography (PET) as a tool to visualize ER&#945; expression in ER&#945;-positive breast xenografts.

שימוש ב-16α-[18F]-Fluoro-17β-Estradiol PET כדי לדמיין ביטוי α של קולטן אסטרוגן בסרטן שד אנושי Xenografts בעכברים נקבות עם שחלות

To demonstrate how estrogen receptor alpha (ER&#945;) positive breast cancer xenografts may be visualized in BALB/c nude mice using ...

Cancer Research

Methods for Studying Uterine Contributions to Pregnancy Establishment in an Ovariectomized Mouse Model

For pregnancy to be established, a viable blastocyst must successfully interact with a receptive uterine lining (endometrium) to facilitate implantation and placenta formation and enable ongoing pregnancy. The limitations to pregnancy success caused by embryonic defects are well known and have been largely overcome in recent decades with the rise of in vitro fertilization (IVF) and assisted reproductive technologies. As yet, however, the field has not overcome the limitations caused by an inadequately receptive endometrium, thus resulting in stagnating IVF success rates. Ovarian and endometrial functions are closely intertwined, as hormones produced by the ovary are responsible for the endometrium's menstrual cyclicity. As such, when using rodent models of pregnancy, it can be difficult to ascertain whether an observed result is due to an ovarian or uterine deficit. To overcome this, an ovariectomized mouse model was developed with embryo transfer or artificial decidualization to allow the study of uterine-specific contributions to pregnancy. This article will provide instructions on how to perform ovariectomy and offer insights into various techniques for supplying exogenous hormones to support successful artificial decidualization or pregnancy following embryo transfer from healthy donors. These techniques include subcutaneous injection, slow-release pellets, and osmotic mini pumps. The key advantages and disadvantages of each method will be discussed, enabling researchers to choose the best study design for their specific research question.

Pregnancy establishment is a dynamic process involving complex embryo and uterine crosstalk. The precise contributions of the maternal uterine environment to these processes remain an active area of investigation. Here, detailed protocols are provided to aid in designing in vivo animal models to address these research questions.

שיטות לחקר תרומות הרחם לביסוס הריון במודל עכבר לכריתת שחלות

For pregnancy to be established, a viable blastocyst must successfully interact with a receptive uterine lining (endometrium) to facilitate implantation ...

Developmental Biology

Murine Orchiectomy and Ovariectomy to Reduce Sex Hormone Production

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative disease. The manipulation of sex hormone levels in the murine model system allows for the study of their impact on organs/tissues and within disease progression. Orchiectomy - the surgical removal of the testes - and ovariectomy - the surgical removal of the ovaries - provide a method to deplete the endogenous sex hormones so that the precise hormone levels can be provided through drug or other delivery methods. Here, we provide rapid and minimally invasive methods for both orchiectomy and ovariectomy in the murine model system for the reduction of sex hormones. This protocol details the surgical preparation and excision of the testes through the scrotal sac, and excision of the ovaries via two incisions in the right and left lateral dorsum.

This manuscript describes a consistent way to quickly perform survival rodent orchiectomies and ovariectomies.

Murine Orchiectomy ו Ovariectomy כדי להפחית את ייצור הורמוני המין

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative ...

<meta charset="utf8"></head><body>השראת תסמונת השחלות הפוליציסטיות בעכברים באמצעות שחרור לטרוזול מבוקר

A Modified Technique for Inducing Polycystic Ovary Syndrome in Mice

Polycystic ovary syndrome (PCOS) is one of the leading causes of infertility in women. Animal models are widely used to study the etiologic mechanisms of PCOS and for related drug development. Letrozole-induced mouse models replicate the metabolic and reproductive phenotypes of patients with PCOS. The traditional method of letrozole treatment in PCOS mice requires daily dosing over a certain period, which can be labor-intensive and cause significant stress to the mice. This study describes a simple and effective method for inducing PCOS in mice by implanting a controlled letrozole-releasing mini-pump. A mini-pump capable of stable, continuous release of a quantitative amount of letrozole was fabricated and implanted subcutaneously in mice under anesthesia. This study demonstrated that the mouse model successfully mimicked PCOS features after letrozole mini-pump implantation. The materials and equipment used in this study are readily available to most laboratories, requiring no special customization. Collectively, this article provides a unique, easy-to-perform method for inducing PCOS in mice.

<meta charset="utf8"></head><body>מחבר זרקור: חקירת המנגנונים והמודלים המעוררים של תסמונת השחלות הפוליציסטיות

This protocol introduces a technique for inducing polycystic ovary syndrome (PCOS) models in mice through controlled letrozole release using mini-pumps. Under adequate anesthesia, the mini-pump was implanted subcutaneously, and PCOS was successfully induced in the mice after a certain period of the mini-pump release.

טכניקה שונה לגרימת תסמונת השחלות הפוליציסטיות בעכברים

Polycystic ovary syndrome (PCOS) is one of the leading causes of infertility in women. Animal models are widely used to study the etiologic mechanisms of ...

Ovariectomy ו-17β אסטרדיול החלפת בחולדות ועכברים: הפגנה חזותית

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

עכבר דגם של אנדומטריוזיס בניתוח המושרה על ידי השתלת אוטומטי של רקמות הרחם

A In Vivo אסטרוגן מחסור בעכבר מודל עבור ההקרנה הטיפולים האסטרוגן אקסודוגני של בעיות לב וכלי דם אחרי גיל המעבר

מודל ההתנגשות של שמחפש גמול בחולדות זכר

שיטה לחקר ההשפעה של כשל שחל מושרה כימי ביכולת גופנית ולב הסתגלות בעכברים

הערכה של התנהגות מינית של עכברים זכרים

שימוש ב-16α-[18F]-Fluoro-17β-Estradiol PET כדי לדמיין ביטוי α של קולטן אסטרוגן בסרטן שד אנושי Xenografts בעכברים נקבות עם שחלות

שיטות לחקר תרומות הרחם לביסוס הריון במודל עכבר לכריתת שחלות

Murine Orchiectomy ו Ovariectomy כדי להפחית את ייצור הורמוני המין

טכניקה שונה לגרימת תסמונת השחלות הפוליציסטיות בעכברים

טכניקה שונה לגרימת תסמונת השחלות הפוליציסטיות בעכברים