Cette étude utilise la QPCR sur la muqueuse gastrique pour détecter rapidement Helicobacter pylori et sa résistance aux antibiotiques, offrant un outil de diagnostic rapide et précis avec une grande importance clinique pour traiter cette infection. Il est essentiel de garantir des normes de contraste de qualité pour QPCR. Par conséquent, le CI QPCR pour la détection d’Helicobacter pylori est conforme à des critères spécifiques, et chaque condition doit être satisfaite simultanément.
L’écart précoce invalide le test nécessitant une nouvelle exécution. Nous avons besoin d’un outil de diagnostic puissant et complet pour détecter Helicobacter pylori et la résistance aux médicaments. Nous utilisons la muqueuse gastrique QPCR.
Nous utilisons des apprêts spécifiques à cet effet. Nous pensons que de futures études portant sur des groupes de patients plus importants permettront de valider et de réaliser le plein potentiel de la QPCR de la muqueuse gastrique, améliorant ainsi le diagnostic, la surveillance et le traitement d’Helicobacter pylori. Pour commencer, ouvrez la valve de la pince de biopsie et déplacez-la lentement vers la main dominante.
Lorsque la tête de la pince est dans le champ de vision, ouvrez le rabat de la pince et manipulez l’endoscope au niveau de la muqueuse gastrique du site de prélèvement. Appliquez une légère pression et fermez la pince à biopsie pour clamper le tissu de la muqueuse gastrique. À l’aide d’une pince, prélevez les échantillons de tissus et placez-les dans le tube d’échantillonnage contenant le liquide de conservation.
Une fois que tous les sites ont été échantillonnés, serrez le couvercle du tube d’échantillonnage et scellez-le pour éviter qu’il ne sèche. Étiquetez les tubes avec un numéro d’identification unique à l’extérieur. Soumettez les échantillons collectés pour analyse dès que possible, en évitant l’entreposage.
Ajustez la température d’un bain métallique à 100 degrés Celsius à l’avance. Si l’échantillon est congelé, retirez-le et laissez-le atteindre la température ambiante. Mélangez soigneusement le lysat pour suspendre la résine d’acide aminodiacétique.
Prenez 100 microlitres de lysat dans un tube à centrifuger avec un élément filtrant et ajoutez de la muqueuse gastrique. Mélangez le contenu en utilisant l’oscillation vortex. Placez le tube de centrifugation dans le bain métallique à 100 degrés Celsius pendant 10 minutes.
Après le chauffage, retirez le tube et laissez-le refroidir à température ambiante. Centrifugez l’échantillon à 9, 500G pendant cinq à 10 minutes et transférez soigneusement le surnageant dans un autre tube à centrifuger étiqueté stérilisé. Si vous ne passez pas immédiatement à l’étape suivante, conservez temporairement l’échantillon à quatre degrés Celsius.
Retirez la sonde d’amorçage, la solution enzymatique mixte et le tampon de détection du kit. Faites fondre tous les composants sur de la glace, ou à une température de deux à huit degrés Celsius. Pour mélanger les échantillons, agitez-les doucement et effectuez une brève centrifugation à basse vitesse.
Mélangez 12,5 microlitres de tampon de détection, sept microlitres de sonde d’amorce et 0,5 microlitre de solution enzymatique. Mélangez le contenu dans le tube et centrifugez-le brièvement. Distribuez 20 microlitres de la solution de réaction PCR et ajoutez cinq microlitres d’acide nucléique dans chaque puits de réaction PCR.
Insérez le tube à réaction dans le thermocycleur PCR fluorescent. Définissez les paramètres du cycle et exécutez le programme. Collectez des signaux de fluorescence à 58 degrés Celsius pour les marqueurs souhaités.
Après la réaction, enregistrez les données et analysez-les à l’aide d’un logiciel QPCR spécifique. Les tests QPCR ont confirmé la présence d’Helicobacter pylori dans les échantillons A, B, C et E, tandis que l’échantillon F s’est avéré négatif. L’échantillon A était sensible aux deux antibiotiques.
L’échantillon B présentait une résistance à la clarithromycine et à la lévofloxacine. L’échantillon C a montré une résistance à la clarithromycine, mais reste sensible à la lévofloxacine. L’échantillon E était résistant à la lévofloxacine, mais sensible à la clarithromycine.
