L’amélioration de la qualité des poumons de donneurs est la clé de l’amélioration du taux de réussite de la transplantation pulmonaire. Nous espérons établir un modèle animal simple et reproductible pour étudier l’effet de la profusion pulmonaire ex vivo, améliorant ainsi la qualité des poumons des donneurs. L’EVLP s’est avérée être une mesure technique efficace pour améliorer la qualité des poumons de donneurs, mais il existe encore de nombreux problèmes dans l’EVLP qui doivent être étudiés et clarifiés.
Les conditions de perfusion doivent encore être explorées, et la capacité de l’EVLP à atténuer les lésions d’ischémie-reperfusion doit être vérifiée davantage. Comparé à d’autres techniques et modèles. notre plate-forme EVLP est la plus simple, utilisable, reproductible, peu coûteuse et beaucoup plus rentable, ce qui fournit une plate-forme de recherche efficace pour la recherche liée à l’EVLP.
Il convient de prêter attention à l’impact thérapeutique de la technologie de profusion pulmonaire ex vivo sur les poumons marginaux du donneur, qui est similaire à la DDC en Chine. Dans le même temps, cette technologie peut fournir une plate-forme pour de futures recherches. Pour commencer, placez le rat anesthésié en décubitus dorsal sur une table d’opération et fixez-le avec des sutures.
À l’aide de ciseaux chirurgicaux pour rongeurs, faites une incision longitudinale de deux à trois centimètres le long de la ligne médiane du cou devant la trachée. Coupez la peau et disséquez le tissu musculaire devant la trachée pour exposer complètement la trachée. Ensuite, à l’aide d’une seringue, injectez 1 000 unités par kilogramme d’héparine dans la veine de la queue et attendez cinq minutes pour assurer une héparinisation adéquate du sang.
Libérez l’espace derrière la trachée. Passez une suture 3-0 dans la trachée et faites un nœud lâche pour une utilisation ultérieure. Faites une incision en forme de V de 0,5 centimètre au-dessus du nœud de la trachée.
Insérez une sonde trachéale de calibre 14 dans la trachée. Serrez le nœud de suture pour fixer le tube. Connectez le tube trachéal au ventilateur.
Allumez le ventilateur pour commencer la ventilation des poumons. Surveillez les signes vitaux du rat toutes les cinq minutes et arrêtez la ventilation. Après avoir confirmé la mort d’un rat à la suite d’un arrêt cardiaque à l’aide des paramètres suivants, redémarrez la ventilation mécanique en mode contrôlé par pression et aérez pendant cinq minutes.
Clampez la trachée et laissez reposer le poumon du donneur à température ambiante pendant une heure de temps ischémique chaud. Ensuite, pour prélever le poumon, ajustez la table d’opération à une position inclinée de 45 degrés avec la tête haute et les pieds bas. À l’aide d’un rasoir à cheveux, retirez les poils du milieu de la poitrine et de l’abdomen du rat.
Désinfectez la zone chirurgicale avec de l’iode trois fois et drapez-la avec une serviette chirurgicale. Faites une incision longitudinale de six à sept centimètres le long de la ligne médiane de l’abdomen avec des ciseaux chirurgicaux pour rongeurs. Coupez la peau, ouvrez la paroi abdominale jusqu’à la cavité abdominale et exposez les organes.
À l’aide d’une seringue, injectez 1 000 unités par kilogramme d’héparine dans la veine cave inférieure et attendez cinq minutes pour assurer une héparinisation adéquate du sang. Ensuite, utilisez des ciseaux pour couper la veine cave inférieure du rat et démarrez la ventilation mécanique des poumons. Après la ventilation, utilisez une pince pour soulever le processus xiphoïde et faites une incision longitudinale le long du sternum de bas en haut.
Utilisez un écarteur de côtes pour exposer la cavité thoracique, puis retirez le tissu du thymus pour exposer le cœur et les principaux vaisseaux sanguins en dessous. Libérez l’aorte du rat et l’espace derrière l’artère pulmonaire. Passez une suture 3-0 dans l’artère pulmonaire et faites un nœud lâche pour une utilisation ultérieure.
Faites une incision en forme de V de deux à trois millimètres sur la surface antérieure de la voie d’éjection du ventricule droit. Insérez une canule de l’artère pulmonaire dans l’artère pulmonaire à travers l’incision et resserrez la suture pré-attachée pour fixer la canule. Coupez l’extrémité du cœur de rat et insérez une pince hémostatique dans le ventricule gauche.
Perturbez les valves entre le ventricule gauche et l’oreillette pour vous assurer que la voie d’éjection de l’oreillette gauche est dégagée. Ensuite, connectez la canule de l’artère pulmonaire au circuit de perfusion et utilisez 15 millilitres de solution à faible teneur en potassium pour rincer le sang résiduel à un débit de 0,6 à un millilitre par minute. Placez une suture derrière le cœur et encerclez le ventricule.
Insérez la canule à travers l’incision pratiquée dans le ventricule gauche et resserrez la jolie suture pour fixer la canule. Maintenant, coupez la trachée au-dessus du tube trachéal. Soulevez la trachée et utilisez des ciseaux pour séparer le tissu conjonctif derrière la trachée vers le bas jusqu’au diaphragme.
Ensuite, coupez la veine cave inférieure et l’artère pulmonaire principale au-dessus du diaphragme. Séparez le cœur et les poumons. Pour maintenir les poumons gonflés, clampez immédiatement le tiers inférieur de la trachée à la fin de l’inspiration.
Prélevez le cœur et les poumons et placez-les dans une solution à faible teneur en potassium pour la conservation. Placez le cœur et les poumons dans la position désignée du circuit de perfusion pulmonaire ex vivo, ou EVLP, et connectez la canule du ventricule gauche au circuit de perfusion. Après avoir assemblé la configuration EVLP, remplissez le piège à bulles avec une quantité suffisante de solution de réparation de perfusion pulmonaire pour empêcher les bulles de pénétrer dans les poumons.
Placez l’unité cardiopulmonaire dans la chambre de l’organe et connectez-la à l’appareil EVLP. Ensuite, allumez le ventilateur et la pompe péristaltique. Démarrer la perfusion pulmonaire à 20 % du débit cible.
Après avoir calculé le débit cible, augmentez progressivement le débit jusqu’au débit cible en une heure. Réglez l’échangeur de chaleur à 40 degrés Celsius pour maintenir une température pulmonaire de 37,5 degrés Celsius. Après 20 minutes de perfusion, retirez la pince endotrachéale et, en utilisant les paramètres suivants, démarrez la ventilation mécanique.
Ensuite, commencez le flux de gaz hypoxique. Pour maintenir la solution de perfusion, la pression partielle du dioxyde de carbone entrant dans l’artère pulmonaire entre 35 et 45 millimètres simultanément pendant la ventilation. Pendant la perfusion, surveillez constamment le débit de la solution de perfusion, la pression artérielleveineuse, la pression de pointe des voies respiratoires et les paramètres de la fonction pulmonaire.
Les niveaux d’oxygénation du greffon pulmonaire et la résistance vasculaire dans les poumons des donneurs de DDC sont restés stables, sans différence significative au cours de la période de perfusion de quatre heures. L’observance dynamique des poumons du donneur de DDC a progressivement diminué au cours de la période de perfusion de quatre heures. Les niveaux de glucose dans le perfusat des poumons du donneur de DCD ont diminué de façon constante tout au long de la perfusion de quatre heures.
Les niveaux d’électrolytes, y compris le sodium et le potassium, sont restés constants dans tous les groupes pendant la perfusion de quatre heures. Un nombre significativement plus élevé de cellules apoptotiques a été détecté dans le groupe donneur DCD par rapport aux autres groupes, le groupe de conservation au froid montrant plus de cellules positives que le groupe EVLP. Le score de lésion pulmonaire était significativement plus faible dans le groupe EVLP par rapport aux groupes froid, statique, de conservation et de contrôle.
L’épaississement de la paroi alvéolaire et l’hémorragie alvéolaire étaient proéminents dans le groupe de préservation statique froide de quatre heures, tandis que la structure alvéolaire normale était préservée dans le groupe EVLP.
