Uso de oligonucleótidos sintéticos modificados para analizar enzimas metabolizadoras de ácidos nucleicos

Así que mi grupo de investigación está realmente interesado en las enzimas involucradas en la replicación y reparación del ADN. En particular, estamos estudiando enzimas de microorganismos extremófilos y también de patógenos porque queremos entender cómo estas enzimas permiten que esos organismos sobrevivan a los desafíos ambientales. Estamos interesados tanto en la función biológica de las enzimas como en las aplicaciones biotecnológicas.

Así que trabajamos mucho con ligasas de ADN y ARN, y recientemente hemos establecido el papel de un tipo mínimo de ADN ligasa que parece ser traficada hacia el exterior de la célula bacteriana. Y hemos determinado que esto desempeña un papel en la formación de biopelículas en el patógeno Neisseria gonorrhoeae. También, junto con nuestros colaboradores de ArcticZymes, hemos caracterizado una nueva ligasa de ARN a ADN que es capaz de unir adaptadores de ADN a cualquiera de los extremos de un fragmento de ARN.

Por lo tanto, nuestros colaboradores de ArcticZymes, que también han contribuido a este protocolo, están caracterizando diferentes enzimas metabolizadoras de ADN y ARN que tienen aplicaciones potenciales en biología molecular. Por lo tanto, están utilizando este tipo de protocolo como un primer paso para comprender el espectro de actividades que tienen estas enzimas y compararlas en relación con lo que ya está disponible en el mercado. El protocolo ofrece una alternativa más fácil y segura para analizar las enzimas metabolizadoras de ácidos nucleicos en comparación con el uso de sustratos radiomarcados.

Los sustratos de ADN o ARN marcados con fluorescencia hacen que nuestro enfoque sea más eficiente, ya que podemos mezclar y combinar los oligonucleótidos para crear una variedad de sustratos. Así que, en este momento, estamos realmente centrados en comprender la función biológica de algunas nucleasas nuevas que hemos descubierto en un genoma ambiental antártico. Estas nucleasas tienen homólogos en otros organismos extremófilos, por lo que estamos tratando de comprender qué papel desempeñan para permitir que estos microbios sobrevivan.

También estamos muy interesados en la actividad de algunas de nuestras nuevas enzimas en análogos de ácidos nucleicos no naturales y sus posibles usos como parte de un conjunto de herramientas de biología molecular con sustratos de ADN y ARN no naturales.