Ensayo de reensamblaje de luciferasa dividida para medir los contactos entre el retículo endoplásmico y las mitocondrias en células vivas

En mi laboratorio, estudiamos la comunicación interorgánica que toma una forma de contacto con la membrana y sus funciones en el mantenimiento de la salud celular, así como en la patogénesis de la enfermedad. Estamos particularmente interesados en los contactos de membrana entre las mitocondrias y el retículo endoplásmico y tratamos de comprender cómo se regulan y cómo su desregulación puede conducir a la neurodegeneración. Aunque sabemos que los contactos de las mitocondrias del RE son importantes para la salud celular y que su desregulación se asocia con muchas enfermedades, no sabemos mucho sobre cómo se regula su nivel.

El primer paso para abordar esto es establecer un protocolo simple y confiable para medir el nivel de contactos de mitocondrias del RE en las células. Nuestro ensayo de luciferasa dividida ofrece una forma más fácil y rápida de cuantificar los contactos de las mitocondrias del RE en células vivas en comparación con la mayoría de los ensayos. Aprovechamos dos mitades divididas de renilla luciferasa, una mitad dirigida a RE y la otra a las mitocondrias.

Solo se pueden volver a ensamblar donde las membranas del RE y las mitocondrias tienen un contacto cercano, lo que da como resultado luciferasa reconstituida con una actividad enzimática completa. Este método es simple, adecuado para cribados de alto rendimiento y fácilmente accesible para muchos laboratorios. Esperamos que avance en el campo de las enfermedades neurodegenerativas mediante la identificación de moduladores moleculares y genéticos de los contactos de las mitocondrias del RE que puedan convertirse en agentes terapéuticos.

Nuestros resultados han allanado el camino para preguntas importantes, como cómo afectan los diferentes fármacos o combinaciones de fármacos a los contactos de las mitocondrias del RE, y cuáles son los actores moleculares importantes detrás de estos contactos. A partir de estas preguntas, podemos obtener una mejor comprensión del mecanismo de contacto de las mitocondrias del RE y encontrar formas de combatir las enfermedades relacionadas.