Visualización de focos de ADN monocatenario en la fase G1 del ciclo celular

La respuesta al daño del ADN es indispensable para la vida. Como el ADN está constantemente expuesto a varios motores dañinos, la falta de su reparación conduce a la inestabilidad y enfermedades de los genomas. Desarrollamos un método basado en la propiedad biológica del RPA2, para visualizar el tracto de ADN monocatenario durante la reparación del ADN en diferentes etapas del ciclo celular.

El método tradicional para la detección de ADN de cadena única utiliza anticuerpos BrdU. Este enfoque se puede utilizar para replicar activamente las células. Además, este anticuerpo tiende a reaccionar de forma cruzada con otros análogos de nucleótidos, lo que limita su uso.

A diferencia de BRDU, nuestro enfoque tiene una mayor relación señal/ruido, lo que lo hace utilizable en todas las fases del ciclo. Es crucial comprender la acción de las diferentes vías de reparación del ADN en varias fases del ciclo celular y las células potencialmente no replicantes. Nuestro protocolo proporciona un nuevo enfoque y una nueva herramienta para visualizar focos de ADN monocatenario, donde los enfoques clásicos que utilizan BrdU son limitados.

Una comprensión integral de los procesos de reparación del ADN podría servir como dianas terapéuticas para tratar el cáncer, el envejecimiento y las enfermedades neurológicas. La mayoría de nuestras células están diferenciadas terminalmente y, por lo tanto, no se replican ni se dividen. Es crucial obtener una mejor comprensión de cómo estas células reparan varias lesiones del ADN.

Por lo tanto, nuestro laboratorio se centrará principalmente en los procesos de reparación postreplicativa del ADN y en el desarrollo de nuevas herramientas para estudiarlos.