Al igual que los mamíferos, el número de fibras musculares, un determinante importante de la masa muscular final se establece durante la embriogénesis de las aves de corral. Este método permite a los investigadores estudiar las aves de corral en la miogénesis ovogénica y la manipulación de la hiperplasia de la fibra muscular. Esta técnica requiere poca inversión en equipos y es un método fácil y relativamente barato para estudiar la manipulación de la miogénesis.
Los investigadores nuevos en esta técnica pueden tener dificultades para incubar adecuadamente los huevos. Demostrando esta técnica seremos yo y Morgan Gravely, ambos estudiantes graduados de Maestría en Ciencias en nuestro laboratorio. Antes de comenzar el experimento, inspeccione y deseche los huevos de mala calidad.
Asigne y registre números de huevos individuales a los huevos seleccionados y luego pese los huevos. A continuación, coloque los huevos en su bandeja de incubación adecuada y preincubléelos a 26,6 grados centígrados con un 40% de humedad relativa durante seis horas. Después de la incubación, aumente y mantenga la temperatura de la incubadora a 37 grados centígrados con un 40% de humedad relativa hasta el día 18 de incubación.
Mida la temperatura de la superficie de varios huevos en toda la incubadora dos veces al día con un termómetro térmico de superficie para garantizar que la temperatura de la superficie de los huevos sea de 37 grados centígrados. Siga reposicionando los huevos girando cada hora. Para garantizar una pérdida de peso de huevo del 10% al 12.5%, registre el peso del huevo diariamente durante los primeros 18.5 días de incubación.
El día 10 de la incubación, prepare la solución de ribósido de nicotinamida necesaria para cada tratamiento de 100 microlitros en ovo inyecciones como se describe en el manuscrito y mantenga las soluciones a 37 grados centígrados en un baño de agua. Después de retirar los huevos una bandeja a la vez de la incubadora y cubrirlos con una toalla tibia, incave cada huevo para localizar el saco vitelino. Limpie el área de inyección con etanol al 70% antes de insertar una aguja hipodérmica estéril calibre 20 de 2,54 centímetros a un centímetro de profundidad en la cáscara del huevo para inyectar la dosis asignada de tratamiento con ribósido de nicotinamida con 100 microlitros de solución salina estéril en el saco vitelino.
Cubra inmediatamente el sitio de inyección con un pequeño trozo de cinta impermeable absoluta para evitar la pérdida excesiva de humedad. Una vez que todos los huevos hayan recibido su tratamiento, coloque la bandeja de nuevo en la incubadora. El día 18 de incubación, retire los huevos de las bandejas para colocarlos en las cajas de incubación asignadas de acuerdo con sus tratamientos, luego coloque las cajas de incubación en la incubadora con el aumento de humedad al 60% hasta que todos los huevos eclosionen o hasta el día 23 de la incubación.
Antes de la recolección de muestras, determine la corona a la longitud de la grupa de los pollitos sacrificados colocando el pollito de lado con la cabeza metida hacia abajo y las patas debajo del cuerpo y midiendo la longitud desde la parte superior de la cabeza hasta la cola, luego mida el ancho de la cabeza de un orificio de la oreja al otro orificio de la oreja en la longitud de la cabeza desde la parte posterior del pico hasta la parte posterior del cráneo. Para evaluar la circunferencia de la cabeza, envuelva una cuerda no elástica alrededor del cráneo de un orificio auditivo al otro, y luego obtenga la medición de la cuerda con una regla métrica. De la misma manera, determine la circunferencia del pecho envolviendo una cuerda alrededor del pecho debajo de donde las alas entran en contacto con el cuerpo antes de colocar la cuerda en una regla métrica para adquirir la medida.
Rocíe los senos del pollito con etanol al 70%, y con los dedos, tire de las plumas y la piel para revelar los músculos pectorales principales seguido de tomar medidas con pinzas digitales. Mida el ancho del pecho a través del pecho donde las alas entran en contacto con el cuerpo y la longitud del pecho desde la parte inferior de la clavícula hasta la parte superior de la almohadilla de grasa. Para extraer el músculo pectoral mayor derecho, use tijeras quirúrgicas o bisturí y fórceps para cortar a lo largo del hueso de la quilla antes de liberar el músculo de la pared del cuerpo.
Después de extraer el músculo pectoral mayor, coloque el músculo plano en un palito de paleta para recoger las mediciones utilizando pinzas digitales. Averigüe la longitud muscular desde la parte craneal hasta la parte caudal del músculo y el ancho muscular en la porción más ancha de la parte craneal del músculo. Para determinar el grosor muscular, recoja el seno con fórceps y mida en la parte más gruesa de la sección craneal del músculo.
Cuando se termina con las mediciones, los músculos pectorales mayores derecho e izquierdo se pueden almacenar para análisis adicionales a menos 80 grados centígrados durante un máximo de un año. A los embriones se les inyectaron cuatro dosis o dosis de ribósido de nicotinamida para estudiar el efecto de la alimentación in ovo. Se observó que no hubo efectos de la dosis sobre el peso corporal de los embriones del día 18 y los pollitos eclosionados.
Del mismo modo, no se detectaron efectos de la dosis en las mediciones del músculo pectoral mayor para todos los embriones del día 18. Para los pollitos eclosionados, no hubo efectos de la dosis en las mediciones de longitud y anchura muscular mayor de los pectorales. Sin embargo, la dosis afectó el peso muscular y la profundidad.
Los polluelos desarrollados a partir de los embriones que no fueron inyectados con nicotinamida ribósido tenían músculos pectorales mayores que pesaban menos que los polluelos de los embriones inyectados con 501, 000 milimolares nicotinamida ribósido. Los pollitos de embriones inyectados con ribósido de nicotinamida cero y 250 milimolares tenían menos profundidad pectoral mayor que los polluelos de embriones inyectados con 501,000 milimolares nicotinamida ribósido. La clave para ejecutar un experimento robusto es seleccionar huevos uniformes y libres de defectos.
Esto asegurará que todos los efectos sean catalizados por el tratamiento. Con la cosecha del músculo pectoral mayor, la histología se puede utilizar para medir la morfometría de la fibra muscular, y el ARN total y la proteína se pueden extraer para el análisis de la expresión de genes y proteínas. Actualmente estamos estudiando los efectos de esta tecnología en el rendimiento de crecimiento en la calidad de la carne fresca de las aves tratadas.
