Este método mide los cambios en la transmisión de la luz de las hojas como un sustituto del movimiento del cloroplasto que influye en la absorción de la luz de las hojas en diferentes grados dependiendo de la especie, el medio ambiente y las mutaciones. Este dispositivo asequible construido en casa permite cuantificar los cambios dinámicos en el movimiento del cloroplasto de una manera sencilla y semiautomatizada. Los datos complementan los estudios de microscopía.
Es importante seguir de cerca las instrucciones y tratar el instrumento con cuidado. Para comenzar, conecte el dispositivo de transmisión a una fuente de alimentación estable y presione el interruptor de encendido del dispositivo para restablecer el instrumento. A continuación, conecte el iPad a una fuente de alimentación estable.
Presione el botón de la pantalla de inicio para activar la pantalla e ingrese el código de acceso para iniciar sesión. Pulse el icono de configuración, seguido del icono de visualización y brillo. A continuación, presione el bloqueo automático y seleccione nunca para asegurarse de que la pantalla permanezca encendida permanentemente para que el programa se ejecute sin ninguna interrupción.
Luego presione el botón de la pantalla de inicio para volver a la pantalla principal. Después de cerrar todas las aplicaciones, busque y abra la aplicación LeafSensor e ingrese la información en la pantalla verde que muestra texto y campos blancos. Asegúrese de que la palabra conectado se vea en la parte inferior de la pantalla, lo que indica que la aplicación se está comunicando con el dispositivo de transmisión.
Si aparece el mensaje Adafruit NOT Found, verifique que el dispositivo esté enchufado y presione el botón de inicio en el dispositivo nuevamente. Rellene los primeros cuatro campos de la página de la aplicación para configurar las condiciones para una breve ejecución de prueba con clips de hoja abiertos sin hojas. Comience nombrando el experimento en el campo llamado nombre del experimento, luego elija cuántas intensidades de luz azul diferentes se usarán en el experimento escribiendo el número en el campo llamado número de intensidades de luz, luego escriba las intensidades de luz azul que se utilizarán seleccionando un entero entre 0 y 3, 000 y separe cada intensidad de la siguiente con una coma en el campo llamado intensidades azules.
Escriba el período de tiempo para cada intensidad de luz azul en el campo denominado duración azul. Presione Iniciar experimento en la sección central de la pantalla. En la parte inferior de la pantalla, aparecerán ocho guiones con el mensaje Iniciar experimento.
Deje que el experimento se ejecute hasta que aparezcan los primeros datos. Después de asegurarse de que no se emita luz desde el LED durante los primeros dos minutos, observe la emisión de luz azul débil durante dos minutos y luego la emisión de luz azul fuerte durante otros dos minutos. También observe la luz roja intensa que emite brevemente desde el LED una vez por minuto a lo largo de esta secuencia.
Compruebe el estado Experimento finalizado indicado por el mensaje Experimento finalizado en la parte inferior izquierda de la página de la aplicación y, a continuación, pulse el botón de la pantalla de inicio dos veces. Desliza el dedo hacia fuera de la aplicación y ábrela de nuevo. Reinicie el instrumento presionando el botón de encendido / apagado para preparar el instrumento para una carrera con hojas.
En la oscuridad, usando solo una luz blanca o verde muy baja, elija una hoja ancha de la planta adaptada a la oscuridad para cubrir el LED. Prepare la tira de papel de filtro de aproximadamente la longitud de un clip de hoja. Luego perfore un agujero en la parte superior de la tira de papel de filtro para evitar que cubra el LED.
Coloque un papel de filtro humedecido en la parte del clip de hoja que contiene el LED. Retire el clip de hoja adaptado a la oscuridad de la placa de Petri y luego coloque la hoja en la parte superior del papel de filtro húmedo de su clip de hoja, asegurándose de que la superficie de la hoja adaxial esté orientada hacia el LED. Luego coloque la otra parte del clip de hoja con un transistor fotográfico en la parte superior.
Si es necesario, use una banda elástica para mantener unidas dos partes del clip de hojas. Coloque el clip de hojas en el bote respectivo y, utilizando una pipeta, llene los depósitos con agua, asegurándose de que la hoja o al menos el papel de filtro toque el agua para evitar la deshidratación de las hojas durante la carrera. Configure la aplicación LeafSensor en el iPad y escriba EXPLORA1 en el campo denominado nombre del experimento.
Escriba 10 en el campo denominado número de intensidades de luz. Luego ingrese los números en el campo llamado intensidades azules y duración azul. Presione Iniciar experimento.
Después del primer minuto, observe los valores de salida aparecidos. Si los valores están lejos, compruebe si las hojas se colocaron correctamente en los clips de las hojas. Cuando se complete la ejecución, los datos se guardarán automáticamente.
Después de girar la pantalla en posición vertical, aparecerán en la pantalla dos opciones, guardar y utilidades. Presione Utilidades y luego en la lista de los archivos guardados, seleccione el archivo EXPLORA1. Debajo de la lista de archivos, EXPLORA1 aparecerá ahora en el experimento seleccionado.
A continuación, presione Correo electrónico. Ingrese una dirección de correo electrónico y el archivo EXPLORA1 se adjuntará automáticamente al mensaje y luego presione Enviar. Los datos porcentuales de transmisión se trazaron contra el tiempo, lo que muestra que la transmisión de Arabidopsis thaliana disminuyó a bajas intensidades de luz, mientras que se indujo una respuesta de evitación cuando las intensidades de luz aumentaron aún más.
Se muestran los valores porcentuales promedio de transmisión de las hojas de Arabidopsis thaliana de tipo salvaje y mutante durante tiradas de 19 horas de duración. Cuando las hojas fueron expuestas a poca luz azul tanto en mutantes de tipo salvaje como en mutantes phot2, la rápida disminución inicial en la transmisión fue seguida por una disminución lenta, lo que indica que los cloroplastos se estaban moviendo hacia la respuesta de acumulación. En comparación con el tipo salvaje, phot1 mostró una respuesta de acumulación reducida.
Cuando la intensidad de la luz azul aumenta gradualmente después de 11 horas, el porcentaje de transmisión aumenta y los cloroplastos se mueven hacia la respuesta de evitación. Los grados de cambio en el porcentaje de transmisión en relación con el valor oscuro, también llamado Delta T, dependían de las intensidades exactas de la luz azul. Los valores negativos indican que las hojas mostraron una respuesta de acumulación, mientras que los valores positivos indican una respuesta de evitación.
La velocidad de cambio en la transmisión se calcula como la pendiente del cambio en la transmisión cuando se aumenta la luz. En el ejemplo representativo, la velocidad de transmisión cambió durante las respuestas iniciales cuando se activó la evitación a medida que aumentaba la intensidad de la luz azul. Al investigar los cambios de transmisión en un mutante o especie no caracterizada, confirme cómo los valores de transmisión y las posiciones del cloroplasto se correlacionan con un estudio de microscopía.
