Este método permite el aislamiento funcional de unidades de motor individuales en el manejo de masas de animales experimentales. La principal ventaja de esta técnica es el registro de la fuerza y los potenciales de acción de unidades motoras individuales de tipo fisiológico identificado. Ayudar a demostrar el procedimiento será el profesor Jan Celichowski, jefe del departamento de neurobiología.
Comienza cortando la piel a lo largo de la columna vertebral, desde el sacro hasta las vértebras torácicas, con tijeras afiladas y contundentes. Identifique la vértebra S1 como el segmento más bajo. A continuación, cortar y eliminar los músculos longissimus, y los procesos espinosos de L6 a L2 vértebras.
Utilice rongeurs finos para eliminar los procesos transversales de L6 a L2, y realice una laminectomía sobre segmentos L6 a L2 para exponer los segmentos lumbares de la médula espinal cubiertos por la dura mater. Usando tijeras afiladas, corte la médula espinal y las raíces dorsales y ventrales en el segmento de las vértebras L2, nivel en el borde superior de la laminectomía. Coloque pequeños trozos de espuma de gel seco para detener el sangrado.
A continuación, utilice tijeras afiladas y contundentes para hacer un abrazo longitudinal en el lado posterior de la extremidad posterior izquierda, desde el tendón de Aquiles hasta la cadera. Localice la fosa popliteal en la parte posterior de la articulación de la rodilla, que está cubierta por el músculo femoris del bíceps, y haga una taza entre la parte anterior y posterior de este músculo. Moviéndose hacia arriba, corte las dos cabezas del bíceps femoris hasta la cadera para exponer el nervio ciático.
Usando fórceps y tijeras contundentes, separa el lateral de la cabeza medial del músculo gastrocnemius, y corta la inserción distal del músculo gastrocnemius medio. Identifique el gastrocnemius medial o nervio MG, luego use fórceps y tijeras para cortar todos los colaterales restantes del nervio ciático, incluidos los colaterales para el bíceps posterior y el semitendinoso. Bred una ligadura no elástica a través del tendón de Aquiles y hacer tres nudos.
Luego haz una incisión de dos centímetros en la piel y el tejido conectivo subyacente a lo largo del lado anterior de la extremidad posterior izquierda para una movilización con un clan medio. Fije la extremidad posterior izquierda poniendo una abrazadera de acero en la tibia. Coloque la rata en un marco ajustable hecho a medida.
Tire de los colgajos de la piel alrededor de la laminectomía con cuatro ligaduras. Y suturarlos al marco con el fin de formar una piscina de aceite de parafina sobre la médula espinal expuesta. Utilice un fórceps Dumont 55 para levantar la duramadre en la intersección de la médula espinal.
Luego córtalo caudalmente hasta el hueso sacro y retraéctelo. Separe las raíces dorsales y ventrales izquierda y derecha a niveles sucesivos con una varilla de vidrio roma. Llene la piscina sobre la médula espinal con aceite de parafina caliente, cubriendo las raíces ventrales y dorsales expuestas.
Coloque la rata sobre una placa de aluminio hecha a medida con una piscina para sus extremidades traseras, conectada al sistema de calefacción de bucle cerrado. Fije la abrazadera en la extremidad posterior izquierda con la barra metálica para inmovilizarla. Fijar la columna vertebral poniendo abrazaderas de acero en el hueso sacro y la vértebra L1.
A continuación, conecte el músculo gastrocnemius medial izquierdo con la ligadura no elástica al transductor de fuerza a través del tendón de Aquiles. Inserte un alambre o electrodo de plata bipolar a través de la parte media del músculo, perpendicular a su eje largo, y llene la cámara para las extremidades traseras con aceite de parafina caliente para cubrir el músculo gastrocnemius medio. Estire el músculo operado a una tensión pasiva de 100 mililitros, controlada por el transductor de fuerza.
Luego use tijeras afiladas y contundentes para hacer una incisión de dos centímetros en la piel de la extremidad posterior derecha, e inserte un electrodo de alambre de plata para ser utilizado como electrodo de referencia. Coloque y fije una placa metálica aislada hecha a medida por encima de las raíces espinales expuestas. Ponga pares izquierdos de raíces ventrales y dorsales en la placa.
Y añadir solución salina a la piscina formada por la piel alrededor de la laminectomía. Coloque un electrodo estimulante de alambre de plata sobre las raíces espinales expuestas, luego coloque un poste positivo tres milímetros por encima de la placa en aceite, y el polo negativo en la solución salina. Estimula las raíces ventrales con pulsos rectangulares eléctricos, evocando la contracción de los músculos.
Utilice un par de fórceps Dumont 55 y lupas para dividir las raíces ventrales L5 o L4 en haces muy finos de axones. Coloque uno de estos paquetes en un electrodo de alambre de plata y estimulelo para observar la actividad de una sola unidad de motor. Al aumentar progresivamente la intensidad del estímulo, identifique una sola unidad motora sobre la base del carácter evocado de todo o ninguno de la contracción de la contracción y el estímulo potencial de la acción.
Los parámetros de las contracciones de la unidad motora y los potenciales de acción se pueden calcular utilizando grabaciones cuando se están asegurando condiciones estables de las grabaciones. Aquí se muestra una grabación representativa de la contracción única de una unidad de motor rápida. Las bandejas superiores muestran el potencial de acción de la unidad de motor.
El retraso entre la entrega del estímulo y el inicio del potencial de acción de la unidad motora se debe al tiempo de conducción desde la raíz ventral hasta el músculo. Aquí se muestra un registro representativo de la fuerza del tétanos no fusionada de una unidad motora rápida y un tren de potenciales de acción de la unidad de motor junto con las posiciones de tiempo de los estímulos aplicados. Antes de intentar este procedimiento, tenga en cuenta que la división de la raíz ventral en filamentos delgados necesita un poco de entrenamiento y experiencia.
