Este método puede ayudar a responder preguntas clave relacionadas con el desarrollo, tratamiento y diagnóstico del mesotelioma pleural humano. La principal ventaja de este modelo ortotópico preclípico fiable es que replica la progresión de la enfermedad humana y la patología en un microambiente cercano al que se encuentra en pacientes con mesotelioma pleural. Por lo tanto, este modelo invaluable es de gran importancia y el uso de imágenes moleculares no invasivas permite la monitorización longitudinal en línea con el concepto de tres R.
Antes de empezar, prepare el sistema de anestesia y el área quirúrgica en una campana de flujo laminar pulverizando todas las superficies con desinfectante. Coloque las jaulas SPF microaisladas en la capucha de flujo desinfectado. Coloque una almohadilla de calentamiento, solución povidona-yodo jeringa Hamilton calibre 30, instrumentos de cirugía de gasa y algodón y micropipetas y puntas en la campana de flujo laminar.
Una vez que el ratón está correctamente anestesiado inyectar por vía subcutánea 0,05 miligramos por kilogramo de Buprinorphine para el alivio postoperatorio de la bandeja. A continuación, coloque el ratón en su lado derecho en la parte superior de la almohadilla de calentamiento y limpie el área quirúrgica con solución de povidona-yodo y haga una incisión de 5 milímetros de la piel. Limpiar la grasa circundante y los músculos con tijeras contundentes para exponer las costillas.
Homogeneice la suspensión celular y cargue 50 microlitros en la jeringa Hamilton asegurándose de evitar burbujas de aire. Limpie la aguja con 70% de alcohol antes de cada inyección. Inyectar lentamente las células en la cavidad pleural entre las costillas sexta y séptima que sostienen la aguja en un ángulo de 30 grados y de dos a tres milímetros debajo de los músculos intercostales.
Mantenga la aguja justo debajo de las costillas para evitar que se inyecte en los pulmones. Debe ser visible a través de los músculos. Cuando haya terminado, cierre la herida con tres o cuatro suturas absorbibles y guárdelo en un ambiente caliente hasta que se despierte.
Al realizar la implantación es muy importante colocar correctamente la aguja para limitar la profundidad de la penetración de la aguja. Utilice una almohadilla de calentamiento de la cámara de calentamiento, o lámpara infrarroja para precalentar a los ratones a 30 grados celsius durante 30 minutos antes de la inyección de fluor-18(FDG)Usando una calculadora de dosis preparar tres a cuatro dosis de megabecquerel de fluor-18(FDG)en 150 a 200 microlitros de solución salina en jeringas de insulina 1 mililitro. Asegúrese de registrar todos los tiempos de las inyecciones de mediciones de dosis de radiactividad, y las exploraciones por PET para calcular los valores de absorción estándar o SUV.
Pesar los ratones y luego inyectar por vía intravenosa el fluor-18(FDG)Después de la inyección dejar a los ratones despiertos en condiciones cálidas durante 45 minutos. A continuación, cargue los ratones en la cama del escáner, transfiera la cama a un escáner y someta a los animales a una tomografía computarizada centrada en los pulmones. Mueva la cama al subsistema PET inserte la adquisición una hora después de la inyección de fluor-18(FDG) durante una duración de 15 minutos.
Luego retire los ratones de la cámara de imágenes y permita que se recuperen en su jaula manteniéndolos en un área dedicada a la caries radiactiva. Antes del análisis de imágenes, reconstruya las tomografías computarizadas y las tomografías por emisión de imágenes como se describe en el manuscrito. Calibre las imágenes escaneando un cilindro fantasma y registre automáticamente los escaneos de acuerdo con la solución de software incorporada.
Para analizar las imágenes, cargue los datos ct como referencia haciendo clic en el icono de datos abiertos. A continuación, cargue los datos PET como entrada haciendo clic en el icono de anexar datos. Ajuste la escala de color para que CT y PET contrasten las imágenes para la inspección visual.
Seleccione la herramienta ROI 3D en el menú desplegable, haga clic en Agregar ROI y asigne un nombre a los pulmones del archivo. Haga clic en los algoritmos de segmentación y el umbral de vecindad y, a continuación, defina la entrada como fondo e imagen como ref. Introduzca min y max según los valores de densidad pulmonar del ratón.
Inspeccione los pulmones renderizados en 3D haciendo clic en el icono VTK. A continuación, haga clic en el icono Mostrar tabla y recupere el volumen de la tabla generada. Para analizar el fluor-18 (FDG) en los tumores, convierta las imágenes PET a SUV seleccionando la aritmética en el menú desplegable.
Seleccione la multiplicidad escalar y, a continuación, utilice NP uno como seleccionado y establezca el becquerel por mililitro en factor SUV como escalar. Por último, seleccione la herramienta ROI 3D en el menú desplegable y haga clic en Agregar ROI y asigne un nombre a los tumores de archivo. Haga clic en el modo de pintura 3D y la desmarcación de esfera sólo 2D y ajuste el tamaño de la forma para rodear los tumores.
Haga clic en el icono de la tabla de la demostración y recupere el valor máximo suV de la tabla generada. Las representaciones 3D de las tomografías computarizadas ofrecen una visión general de la localización del tumor MPM y permiten el cálculo de los volúmenes pulmonares. Las mediciones del volumen pulmonar disminuyen significativamente con el tiempo después de la inyección de tumores intraplurales.
La tomografía por emisión de estado de la enfermedad proporciona información valiosa sobre el estado metabólico de los tumores MPM. Los tumores se distinguieron dos semanas después del injerto y la absorción de fluor-18 (FDG) se cuantificó mediante la extracción de SUV que se correlacionaron positivamente con el número de días después de la inyección. Además, los volúmenes pulmonares y la fluor-18 (FDG) se correlacionan entre sí con una R cuadrada de 0,6 que apoya la fuerza de estas mediciones para monitorear el desarrollo de tumores ortotópicos MPM.
Siguiendo este procedimiento se pueden realizar otros métodos como la histología, la inmunohistoquímica y la citometría de flujo para responder a cuestiones ortobiológicas como el estado de proliferación y la característica fenotípica de los tumores y del microambiente. Para concluir, estas técnicas preclínicas allanan el camino para que los investigadores exploren una nueva estrategia diagnóstica y de tratamiento del mesotelioma pleural. Además, el uso de imágenes moleculares justifica una rápida traducción de los nuevos hallazgos a la clínica.
