Los autores desean reconocer el apoyo financiero de la Universidad de California del sur, el corazón nacional, pulmón y sangre Institute (NHLBI), R00HL124279, Eli y Edythe amplio Premio a la innovación y el L.K. Whittier Fundación no-cáncer Premio investigación traslacional al EJC. Los autores agradecen el centro de microscopía electrónica y microanálisis, centro de excelencia en NanoBiophysics, centro de excelencia para la caracterización Molecular y traslacional Imaging Center en la Universidad de California meridional para asistencia en configuraciones instrumentales.

Nota: Lea la MSDS de reactivos y siga todas las medidas de seguridad química según lo requerido por la institución local.
1. preparación de PAMs de MCP-1
<ol><li>
Preparación de péptido de MCP-1
	<ol>
<li>Pesar 0.25 mmol de Fmoc-L-Lys (Boc)-Wang en un recipiente de reacción (RV). Enjuague la parte de la caravana con 5 mL dimethylforamide (DMF) en una campana de humos químicos.</li>
		<li>La RV a un sintetizador de péptidos automatizada de banco de carga. Frascos de ácido aminos pre-empacados, N '- CYNFTINRKISVQRLASYRRITSS - C', de la C a N-terminal de carga. Incluye un frasco vacío en el extremo para el paso de la final de la desprotección. Nota: Un péptido codificado por secuencia, N '- CNNSIIRSKQVLRSTRYFRSATYK - C', puede también ser sintetizado utilizando el mismo protocolo.</li>
		<li>Una vez terminada la síntesis, transferencia los péptidos en la resina de la RV para el vial de centelleo con 2-3 mL de metanol hasta que todas las resinas son transferidos. Después de la resina se ha hundido hasta el fondo, retire el sobrenadante de metanol y se evapore el resto hasta que se seque. Aspiradora seco por un adicional 2 h o durante la noche a temperatura ambiente.</li>
		<li>Hacer solución de escote de 12 mL que contiene:ethanedithiol:water:triisopropylsilane de (TFA) ácido trifluoracético 94:2.5:2.5:1 vol % en una campana de humos químicos. Agitar la solución escote para asegurarse que está mezclado uniformemente. PRECAUCIÓN: Porque Triisopropilsilano y Etanoditiol son sensibles al aire, argón purgar frascos de stock de Triisopropilsilano y Etanoditiol para 1 minuto antes de volver a ponerlos.</li>
		<li>Coloque el recipiente de síntesis (SV) en una coctelera de brazo de sujeción en la parte inferior de la mitad de la SV. Transferencia de resina de péptido a la SV con 2 mL de solución de escote hasta que todas las resinas del péptido se transfieren.</li>
		<li>Lavar los lados del SV con 3 mL de solución de escote. Cierre la tapa de la SV y sacuda a 300 oscilaciones/min durante 4 h.</li>
		<li>Pesar un tubo de centrífuga de 50 mL vacía. Registrar la masa.</li>
		<li>Después de 4 h, vaciar la solución del peptide hendido de la SV en el tubo de centrífuga de 50 mL. Enjuague el SV varias veces con la solución restante del escote.</li>
		<li>Se evaporan peptide hendido solución con nitrógeno hasta que haya menos de 4 mL en el tubo de centrífuga.</li>
		<li>Añadir 36 mL de éter helada a la solución de péptido-hendida.</li>
		<li>Vórtice la solución hasta que es totalmente blanco o amarillo. Centrifugar a 3.000 x g durante 5 min a 4 ° C y decantar el sobrenadante.</li>
		<li>Añadir 40 mL de éter de helada en el tubo. Vórtice y someter a ultrasonidos otra vez. Repita el proceso de centrifugación. Decantar el sobrenadante.</li>
		<li>Secar el pellet PA crudo con purga con gas nitrógeno hasta que el éter se evapora visiblemente.</li>
		<li>Añadir 20 mL de agua de doble agua, vortex y someter a ultrasonidos hasta que el péptido se disuelve completamente en solución.</li>
		<li>Congelación de la solución y liofilizar hasta que se seque.</li>
		<li>Una vez que el péptido es secado, pesar la masa del tubo de centrífuga que contiene el péptido crudo. Disolver el péptido crudo en 5 mg/mL de agua.</li>
		<li>Disolver 25 mg de crudo péptido de MCP-1 en 5 mL de agua destilada doble para hacer una concentración total de 5 mg/mL. Purificar el péptido de MCP-1 crudo por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) con 0,1% TFA en el agua (solvente A) y 0.1% TFA en acetonitrilo (solvente B) como fases móviles en una columna de fase reversa C8. Inyectar lo 5 mL del péptido en el HPLC. Nota: La fase móvil inicial consistió en 100% de disolvente A en un caudal de 9,0 mL/min reducir solvente A lentamente a 30% en el minuto 27 y sostenga en este composición para 3 minutos regreso el degradado 100% solvente A 3 min y sostenga en este composición para 1 minuto dar una duración total de 34 minutos mantener la temperatura de la columna a 55 ° C. Utilice el modo de fuente de iones positivos para el análisis. El ácido fórmico puede usarse en lugar de TFA, si TFA es demasiado ácida para la columna HPLC. Se recomienda que la velocidad de rampa de composición solvente orgánica no debe superar 2%/min para una mejor separación.</li>
		<li>Analizar cada fracción usando espectrometría de masas (MALDI) de desorción/ionización láser asistida por matriz para el producto esperado m/z en 2.890. Nota: Disolver el ácido α-ciano-4-hidroxicinámico en 1 mg/mL, en acetonitrilo/agua (50: 50 vol %) como la solución de la matriz. Punto 0,75 μl de solución de la matriz en la placa MALDI, seguida de 0,75 μl de cada fracción. Llevar a cabo el análisis utilizando el modo ion reflexivo positivo en un total rango de 500-5.000 Da.</li>
		<li>Combinar fracciones de producto, descargue acetonitrilo, congelar y liofilizar péptidos purificados hasta que se seque.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparación de MCP-1 PA
	<ol>
<li>Preparar un 1.1 exceso molar de 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] DSPE-PEG (2000)-maleimida al péptido en viales de centelleo separados. Disolver ambos compuestos en agua doble destilada para hacer ~ 15 mg/mL. Someter a ultrasonidos durante 15 min o hasta que ambas soluciones son totalmente claras. Nota: DSPE-PEG (2000)-Cy5 es sintetizada usando el mismo protocolo con DSPE-PEG (2000)-amina y Cy5 funcionalizados éster N-hydroxysuccinimide (NHS), excepto el paso 1.2.3, donde el pH de la solución se ajusta a 8.5.</li>
		<li>Agregue una solución de (2000)-maleimida DSPE PEG a la solución del péptido. Vórtice y someter a ultrasonidos.</li>
		<li>Añadir 1 M NaOH gota a gota (1 μl) en un momento hasta que el pH de la solución es 7.</li>
		<li>Solución de purga de nitrógeno para 5 minutos agitar la solución durante la noche.</li>
		<li>Congelación de la solución y liofilizar hasta que se seque.</li>
		<li>Una vez que el producto crudo es secado, disolver el sólido en 5 mg/mL de agua.</li>
		<li>Purificar con HPLC como se describió anteriormente. Nota: Péptido no conjugada y DSPE-PEG(2000) deben eluir entre 15-30% concentración orgánica (vol %), mientras que DSPE-PEG (2000)-MCP-1 conjugado debe eluir entre 40-50% de concentración orgánica.</li>
		<li>Analizar cada fracción usando espectrometría de masa MALDI la correspondiente m/z. DSPE-PEG (2000)-MCP-1 debe tener un pico amplio m/z en 5.760. Nota: el ácido 2, 5-dihydroxybenzoic se utiliza mejor como matriz para DSPE-PEG (2000)-MCP-1 con MALDI.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Asamblea de PAMs de MCP-1
	<ol>
<li>Disolver 1,75 mg PAs de MCP-1 con 3 mL de metanol en un frasco de 1 dram. Someter a ultrasonidos hasta el PA de MCP-1 se haya disuelto completamente. Nota: Cy5 Anfífilos pueden incorporarse en una proporción molar de 10:90 MCP-1 PA para aplicaciones.</li>
		<li>Evapore el metanol bajo nitrógeno en un movimiento circular mientras se aclara el metanol restante del lado de la cubeta hasta que se forma una película uniforme en la parte inferior del frasco. Secado de vacío la película durante la noche.</li>
		<li>Hidratar la película con 3 mL de agua o fosfato buffer salino (PBS) para hacer una solución de 100 μm de PAMs de MCP-1. Suavemente vortex y someter a ultrasonidos la solución hasta el claro. Incubar a 80 ° C por 30 minutos. Nota: La temperatura elevada se ha demostrado para acelerar el proceso uno mismo-Asamblea y permite que el componente del péptido formar la estructura secundaria más estable, reduciendo la micelar crítica (CMC) de concentración42,43.</li>
		<li>Enfríe la dispersión resultante a la temperatura ambiente.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Caracterización de PAMs de MCP-1
<ol><li>
Dispersión ligera dinámica (DLS) y potencial zeta
	<ol>
<li>Coloque 100 μm de MCP-1 PAM o PAM revuelta en una cubeta siguiendo las instrucciones del instrumento potencial DLS o zeta. Nota: Cubetas potencial DLS y zeta pueden ser diferentes basado en las instrucciones del instrumento.</li>
		<li>Equilibrar el instrumento a la temperatura ambiente. Medir el tamaño y la carga superficial del PAM.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Microscopía electrónica de transmisión (TEM)
	<ol>
<li>Añadir 7 μl de 50 μm PAM de MCP-1 o PAM revuelta hacia una rejilla TEM suspendido dentro de una pinza de cierre automático por 5 min mecha la gota con un trapo de tarea delicada.</li>
		<li>Añadir 7 μl de agua para lavar la rejilla. Mecha a la gota.</li>
		<li>Añadir 7 μl de 1 wt % fosfotúngstico de ácido durante 2 min mecha la gota. Repetir el punto 2.2.2.</li>
		<li>Secar la rejilla TEM antes del análisis TEM.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Espectroscopía de dicroísmo circular (CD)
	<ol>
<li>Encienda el nitrógeno durante 5-10 minutos antes de utilizar el instrumento.</li>
		<li>Coloque 300 μL del blanco (agua o PBS) en cubeta.</li>
		<li>Medir espectros en 190-265 nm, camino de 0,2 mm de longitud con un tiempo de integración de 1 s y un ancho de 1 banda nm en temperatura ambiente. Recoger 3 repeticiones.</li>
		<li>Medida 100 μm de péptido de MCP-1, MCP-1 PAM, revueltos de péptido y revueltos PAM bajo la misma condición descrita en el paso 2.3.3. Restar el espacio en blanco.</li>
		<li>Ajuste los datos mediante una interpolación lineal de los espectros de base polylysine.</li>
		<li>Apagar el instrumento. Espere 10 minutos antes de apagar el nitrógeno.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. análisis in Vitro de PAMs de MCP-1
<ol><li>
In vitro de biocompatibilidad
	<ol>
<li>Cultura y ampliar WEHI 274.1 murinos monocitos en modificado Eagle suplementado de Dulbecco con 10% suero bovino fetal (FBS), 1% de penicilina-estreptomicina y 0,05 mM 2-Mercaptoetanol en 37 ° C debajo del 5% de CO2 al paso 5. Nota: WEHI 274.1 son células de suspensión. Al cultivo, los medios de comunicación deben ser reemplazados cada 2-3 días.</li>
		<li>Monocitos de pipeta en los medios de comunicación en un tubo de centrífuga estéril 50 mL. Centrifugar a 300 x g durante 5 min a 4 ° C.</li>
		<li>Aspirar viejos media y resuspender en medio fresco 10 mL en el tubo de centrífuga. Mezcla lentamente hasta que las células se distribuyen uniformemente en los medios de comunicación. Contar las células con tinción de azul de tripano y un hemocitómetro.</li>
		<li>Diluir las células que hay 4.000 monocitos por 90 μl de medio por pozo. Agregar 90 μl de células en los pocillos de una placa de 96 pocillos. Incubar durante 24 h. Nota: Evite el uso de los pozos en el borde exterior de la placa para evitar diferencias en la evaporación y cambios térmicos en la placa. Se llenan los pocillos exteriores 100 μl PBS.</li>
		<li>Disuelva 0.15 μmol de péptido MCP-1, MCP-1 PAM, péptido codificado o revueltos-PAM en 150 μL PBS en tubos de microcentrífuga separado, esterilizado. Realice la dilución serial para hacer 65 μl de 1, 10 y 100 μm de cada muestra.</li>
		<li>Añadir 10 μl PBS de cada concentración en pocillos que contengan 274.1 WEHI (volumen total: 100 μl por pozo, 6 líneas, 96 pocillos total). Incuban durante 72 h.</li>
		<li>Añadir 10 μl (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) (MTS) en cada pocillo. Incubar durante 1 h.</li>
		<li>Analizar la absorbancia utilizando un lector de placas a 490 nm o en base a las instrucciones del fabricante.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
In vitro el enlace de la micela
	<ol>
<li>Monocitos de semilla 500.000 en cada pocillo de una placa de 6 pozos en 2 mL de medio conteniendo 100 μm marcado con Cy5 PAM de MCP-1 (fracción molar 10:90 DSPE-PEG (2000)-Cy5 y MCP-1 PA). Incubar durante 1 h.</li>
		<li>Recoger WEHI 274.1 por centrifugación a 300 x g durante 5 min a 4 ° C. Aspire los medios de comunicación.</li>
		<li>Suspender y lavar las células en 2 mL de PBS. Centrifugar a 300 x g durante 5 min a 4 ° C. Aspire el PBS. Repita el proceso de lavado con 2 mL de PBS. Aspire el PBS.</li>
		<li>Añadir 2 mL de frío paraformaldehído al 4% para fijar las células. Incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.</li>
		<li>Pipetear las células fijas en un cubreobjetos de vidrio estéril dentro de pocillos de una placa de 6 pozos. Centrifugar a 400 x g durante 5 minutos.</li>
		<li>Retire el paraformaldehído. Lave y enjuague una vez con 2 mL de PBS. Suspender con 1 mL PB Nota: Al enjuagar, evitar interrumpir las células sobre cubreobjetos.</li>
		<li>Coloque 10 μl de glicerol 90% en PBS en una diapositiva. Use una aguja y pinzas para recoger el cubreobjetos. Secar el borde del cubreobjetos. Coloque con cuidado el cubreobjetos sobre un portaobjetos boca abajo.</li>
		<li>Cierre suavemente el borde del cubreobjetos con el pulimento de clavo claro. Coloque en el refrigerador hasta que esté listo para la proyección de imagen.</li>
		<li>Utilizar un láser confocal de barrido microscopio (CLSM) instalado con láseres para Cy5 λexcitación = 650 nm.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

PAMs de MCP-1 es una plataforma de proyección de imagen molecular prometedora, que consiste en un péptido targeting hidrofílica y cola hidrofóbica que impulsa la naturaleza uno mismo-montada de la nanopartícula. Esta micela metas de monocitos puede prepararse por síntesis simple y pasos de la purificación de la MCP-1 péptido DSPE-PEG (2000)-MCP-1. PAMs tienen muchas características beneficiosas para en vivo imagen molecular como su autoensamblaje bajo condiciones suaves, Biodegradabilidad intrínseca y ...

Las enfermedades cardiovasculares están pendientes de las principales causas de muerte a nivel mundial con aproximadamente 17,3 millones de muertes en todo el mundo1. Las enfermedades cardiovasculares son aportadas por la ateroesclerosis, una condición en la que las placas se acumulan en las arterias, la sangre de tal modo inhibiendo y el flujo de oxígeno a las células del cuerpo2,3. La progresión de la ateroesclerosis consiste en el engrosamiento y endurecimiento de las arterias por una acumulación de placa, lleva a placa4,de ruptura e infarto de miocardio5, respuesta inflamatoria y metabolismo lipídico irregular. Las células endoteliales expresan moléculas de citocinas y de la adherencia, como MCP-1 que enlaza con el C-C chemokine receptor (CCR2) encuentran en la superficie de monocitos6,7,8. Colesterol oxidado convierte monocitos en macrófagos durante la etapa temprana de formación de la placa, que amplifica la respuesta inflamatoria en la región y lleva a la lesión tisular y la formación de placas inestables o vulnerables9, 10.
Tradicionalmente, la ateroesclerosis se evalúa mediante la evaluación de estenosis luminal por la proyección de imagen anatómica con ecografía o angiografía11,12. Sin embargo, estos métodos pueden determinar sólo estrechamiento severo de la pared arterial y no la etapa temprana de la aterosclerosis, como causas de crecimiento de la placa inicial remodelado arterial mantener el tamaño de la arteria y de la sangre flujo tasa12,13, 14. Por lo tanto, los angiogramas ricas prevalencia de ateroesclerosis. Además, técnicas de imagen no invasivas como la sola emisión del fotón computan la tomografía, tomografía por emisión de positrones y la resonancia magnética se han utilizado recientemente para caracterizar la morfología de la placa como pueden proporcionar información inicial y caracterización de las placas. Sin embargo, estas modalidades son limitadas a menudo por la falta de sensibilidad, resolución espacial, o requieren el uso de radiaciones ionizantes, que imagen progresión de placa en diferentes etapas mucho más desafiante15,16, 17. Un sistema de entrega imagen que identificara concretamente las placas en diferentes etapas de la aterosclerosis es a desarrollar.
Las nanopartículas han demostrado ser una plataforma emergente para en vivo placa orientación y diagnóstico18,19,20,21. En particular, PAMs son ventajosas debido a su diversidad química y capacidad para acomodar una variedad de grupos, composiciones, tamaños, formas y funcionalización de superficies22. Péptido Anfífilos (PAs) consiste en un péptido "headgroup hidrofílico," unido a una cola hidrofóbica, que suelen ser lípidos; Esta estructura anfifílicas confiere capacidades de uno mismo-montaje y permite una visualización multivalente de péptidos en la superficie de la partícula22,23,24. El péptido contiene puede afectar la forma de la partícula a través de plegables y el hidrógeno de la vinculación entre péptidos25. Péptidos que se dobla a través de la interacción β-hoja han demostrado formar micelas alargadas, mientras que α-helicoidal confirmación puede formar dos micelas esféricas y alargada22,23,24, 2526,de,27. Enlazadores de polietilenglicol (PEG) que proteja la carga superficial del péptido pueden colocarse entre el péptido hidrofílico y cola hidrofóbica de PAMs, mejorar la disponibilidad de la nanopartícula en circulación sistémica28, 29 , 30 , 31. PAM también es ventajosa porque son biocompatibles y se ha demostrado que tienen una amplia gama de aplicaciones32,33. La solubilidad en agua de micelas ofrece una ventaja sobre otros sistemas basados en nanopartículas como ciertas nanopartículas poliméricas que no son solubles en agua y tienen que ser suspendido en solubilizantes para inyecciones34. Además, la habilidad de crear PAMs que desmontarán en respuesta a un estímulo específico hace PAM un candidato atractivo para la entrega controlada de drogas intracelular35.
Por Unión al receptor CCR2 y acumulando en el arco aórtico, PAMs fueron desarrolladas previamente para monocitos targeting para monitorear las diferentes etapas de las lesiones ateroscleróticas en la aorta9. En ratones ApoE- / - acumulación de monocitos aumenta proporcionalmente a la progresión de placa36. Además, se encontró que los pacientes con placas propensas a la ruptura, última etapa contienen altas cantidades de monocitos37. Por lo tanto, la modificación de los PAMs para incorporar MCP-1 es útil porque permite mayor especificidad segmentación y diferenciación entre las lesiones ateroscleróticas de etapa temprana y tardía. Estos estudios de prueba de concepto también verificaron que la PAMs son lo suficientemente seguras como ser utilizado pre-clinically y se borran renally38. Puesto que los monocitos y la inflamación son característicos de otras enfermedades, PAMs de MCP-1 tienen el potencial de ser utilizado para los usos terapéuticos y de diagnósticos en otras enfermedades más allá de ateroesclerosis8,39,40 , 41.
Adjunto, divulgamos la fabricación altamente escalable y uno mismo-montado PAMs de MCP-1 que demostró tamaño óptimo de partícula, carga superficial y focalización selectiva a monocitos para aplicaciones de imágenes mejoradas en la aterosclerosis.

<table><tbody><tr><td>1,2-ethanedithiol</td><td>VWR</td><td>E0032</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>10 mL disposable serological pipets</td><td>VWR</td><td>89130-898</td><td>for cell culture</td></tr><tr><td>15 mL centrifuge tubes, polypropylene</td><td>VWR</td><td>89401-566</td><td>for various applications</td></tr><tr><td>2,5-dihydroxybenzoic acid, 99%</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC165200050</td><td>for MALDI</td></tr><tr><td>25 mL disposable serological pipets</td><td>VWR</td><td>89130-900</td><td>for cell culture</td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol, 50 mM</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>31350010</td><td>for cell culture</td></tr><tr><td>5 mL disposable serological pipets</td><td>VWR</td><td>89130-896</td><td>for cell culture</td></tr><tr><td>50 mL centrifuge tubes</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td>for various applications</td></tr><tr><td>75 cm2 culture flask</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-680-65</td><td>for cell culture</td></tr><tr><td>75 mL reaction vessel</td><td>Protein Technologies</td><td>3000005</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>96-wells cell culture plate</td><td>VWR</td><td>40101-346</td><td>for MTS assay</td></tr><tr><td>Acetonitrile, HPLC grade</td><td>Fisher Scientific</td><td>A998SK-4</td><td>for HPLC purification</td></tr><tr><td>Borosilicate glass, 1 dram</td><td>VWR</td><td>66011-041</td><td>for PAM synthesis</td></tr><tr><td>Borosillicate glass pipet, Long tips</td><td>VWR</td><td>14673-043</td><td>for various applications</td></tr><tr><td>Coverslip, 0.16-0.19 mm, 22 x 22 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542B</td><td>for confocal microscopy</td></tr><tr><td>Cy5 amine</td><td>Abcam</td><td>ab146463</td><td>for peptide conjugation</td></tr><tr><td>Diethyl ether, ACS grade</td><td>Fisher Scientific</td><td>E138-1</td><td>for peptide precipitation</td></tr><tr><td>Disposable syringes, 20 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-54</td><td>for HPLC purification</td></tr><tr><td>Double neubauer ruled hemocytometer</td><td>VWR</td><td>63510-13</td><td>for cell counting</td></tr><tr><td>DSPE-PEG(2000) amine</td><td>Avanti</td><td>880128P</td><td>for peptide conjugation</td></tr><tr><td>DSPE-PEG(2000) maleimide</td><td>Avanti</td><td>880126P</td><td>for peptide conjugation</td></tr><tr><td>DSPE-PEG(2000)-NHS ester&amp;nbsp;</td><td>Nanocs</td><td>PG2-DSNS-10K</td><td>for conjugation to Cy5</td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s modified eagle medium-high glucose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5796-500ML</td><td>for cell culture</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum, qualified, heat inactivated</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10438026</td><td>for cell culture</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ala-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-A</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-RBF</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Asn(Trt)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-NT</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Cys(Trt)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-CT</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Gln(Trt)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-QT</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ile-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-I</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Leu-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-L</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Lys(Boc)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-KBC</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Phe-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-F</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ser(tBu)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-SB</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Thr(tBu)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-TB</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-YB</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Val-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-V</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Boc)-wang resin, 100-200 mesh</td><td>Novabiochem</td><td>856013</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Formic acid, optima LC/MS grade</td><td>Fisher Scientific</td><td>A117-50</td><td>for HPLC purification</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>VWR</td><td>M152-1L</td><td>for confocal microscopy</td></tr><tr><td>Hand tally counter</td><td>Fisher Scientific</td><td>S90189</td><td>for cell counting</td></tr><tr><td>Magnetic stir bars, egg-shaped</td><td>VWR</td><td>58949-006</td><td>for peptide conjugation</td></tr><tr><td>Methanol, ACS certified</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td>for PAM synthesis</td></tr><tr><td>MTS cell proliferation colorimetric assay kit</td><td>VWR</td><td>10191-104</td><td>for MTS assay</td></tr><tr><td>N,N-Dimethylformamide, sequencing grade</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1160-4</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>N-Methylmorpholine</td><td>Protein Technologies</td><td>S-1L-NMM</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC416780250</td><td>for fixing cells</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010049</td><td>for various applications</td></tr><tr><td>Penicillin/streptomycin, 10,000 U/mL</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td>for cell culture</td></tr><tr><td>Peptide synthesis vessel, 25 mL&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>CG186011</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Phosphotungstic acid&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A248-25</td><td>for TEM</td></tr><tr><td>Piperidine</td><td>Spectrum</td><td>P1146-2.5LTGL</td><td>for peptide synthesis</td></tr><tr><td>Plain glass microscope slide 75 x 25 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-A3</td><td>for confocal microscopy</td></tr><tr><td>Reagent reservoirs, sterile&amp;nbsp;</td><td>VWR</td><td>95128093</td><td>for cell culture</td></tr><tr><td>Self-closing tweezer</td><td>TedPella</td><td>515</td><td>for TEM</td></tr><tr><td>TEM support film</td><td>TedPella</td><td>01814F</td><td>for TEM</td></tr><tr><td>Trifluoroacetic acid&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP618-500</td><td>for peptide cleavage and HPLC purification</td></tr><tr><td>Triisopropylsilane</td><td>VWR</td><td>TCT1533-5ml</td><td>for peptide cleavage</td></tr><tr><td>Trypan blue solution, 0.4%</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15250061</td><td>for cell counting</td></tr><tr><td>Tweezer, general purpose-serrated</td><td>VWR</td><td>231-SA-SE</td><td>for confocal microscopy</td></tr><tr><td>WEHI-274.1</td><td>ATCC</td><td>ATCC&amp;nbsp;CRL-1679</td><td>murine monocyte</td></tr><tr><td>automated benchtop peptide synthesizer</td><td>Protein Technologies</td><td></td><td>PS3 Benchtop Peptide Synthesizer</td></tr><tr><td>&amp;alpha;- cyano- 4- hydroxycinnamic acid, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>476870-2G</td><td>for MALDI</td></tr></tbody></table>

synthesis of monocyte-targeting peptide amphiphile micelles for imaging of atherosclerosis

La ateroesclerosis es una importante contribución a las enfermedades cardiovasculares, la principal causa de muerte en todo el mundo, que afirma 17,3 millones de vidas anualmente. La aterosclerosis es también la principal causa de muerte súbita e infarto de miocardio, instigado por las placas inestables que se rompen y ocluyan los vasos sanguíneos sin previo aviso. Corriente de las modalidades de la proyección de imagen no puede diferenciar entre placas estables e inestables que la ruptura. Micelas de Anfífilos péptido (PAMs) pueden superar esta desventaja puede ser modificado con una variedad de dirigidos a grupos que se unen específicamente al tejido enfermo. Monocitos han demostrado ser marcadores tempranos de la aterosclerosis, mientras que la gran acumulación de monocitos se asocia con placas propensas a la ruptura. Por lo tanto, nanopartículas que pueden dirigirse a monocitos pueden utilizarse para discriminar diferentes etapas de la aterosclerosis. Para ello, aquí, se describe un protocolo para la preparación de monocito-PAMs (monocito chemoattractant protein-1 (MCP-1) PAMs). PAMs de MCP-1 uno mismo-se ensamblan a través de síntesis condiciones suaves en forma de nanopartículas de 15 nm de diámetro con cerca de carga superficie neutra. In vitro, PAM fueron encontrada para ser biocompatible y tenían una alta afinidad para monocitos. Los métodos descritos en este documento muestran promesa para una amplia gama de aplicaciones en la aterosclerosis, así como otras enfermedades inflamatorias.

Preparación del PAM de MCP-1 El motivo del CCR2-enlace (residuos 13-35) de la proteína MCP-1 [YNFTNRKISVQRLASYRRITSSK] o péptido codificado [YNSLVFRIRNSTQRKYRASIST] fue modificado mediante la adición de un residuo de cisteína en el N-terminal. El péptido de MCP-1 fue sintetizado por un método de fase sólida Fmoc-mediada mediante un sintetizador de péptidos automatizada. El péptido crudo fue purificado por HPLC fase inversa en una columna C8 a 50 ° C con 0.1%...

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Synthesis of Monocyte-targeting Peptide Amphiphile Micelles for Imaging of Atherosclerosis

Este documento presenta un método que implica la síntesis y caracterización de micelas de amphiphile péptido monocito-targeting y los correspondientes ensayos para prueba de biocompatibilidad y capacidad de la micela a monocitos.

Síntesis de monocito-targeting Peptide Amphiphile micelas para la proyección de imagen de la aterosclerosis

Atherosclerosis is a major contributor to cardiovascular disease, the leading cause of death worldwide, which claims 17.3 million lives annually. ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Bioengineering

7.2K vistas.  University of Southern California. Este documento presenta un método que implica la síntesis y caracterización de micelas de amphiphile péptido monocito-targeting y los correspondientes ensayos para prueba de biocompatibilidad y capacidad de la micela a monocitos.

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Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this diversity, personalized medicine is developed for silencing malignancy associated genes. Nano drugs fit these needs by targeting tumor and delivering antisense oligonucleotides for silencing of genes. As drugs for the treatment are often administered repeatedly, absence of toxicity and negligible immune response are desirable. In the example presented here, a nano medicine is synthesized from the biodegradable, non-toxic and non-immunogenic platform polymalic acid by controlled chemical ligation of antisense oligonucleotides and tumor targeting molecules. The synthesis and treatment is exemplified for human Her2-positive breast cancer using an experimental mouse model. The case can be translated towards synthesis and treatment of other tumors.

An example of a nano drug based on polymalic acid is presented towards the rational design of personalized medicine that is applicable to cancer. It describes the synthesis of a nano drug to treat Her2-positive human breast cancer in a nude mouse.

Biopolímeros Nano basados ​​en ácido polimálico de Focalización de múltiples Marcadores tumorales: una oportunidad para la medicina personalizada?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this ...

Investigación

Química

A Facile and Efficient Approach for the Production of Reversible Disulfide Cross-linked Micelles

Nanomedicine is an emerging form of therapy that harnesses the unique properties of particles that are nanometers in scale for biomedical application. Improving drug delivery to maximize therapeutic outcomes and to reduce drug-associated side effects are some of the cornerstones of present-day nanomedicine. Nanoparticles in particular have found a wide application in cancer treatment. Nanoparticles that offer a high degree of flexibility in design, application, and production based on the tumor microenvironment are projected to be more effective with rapid translation into clinical practice. The polymeric micellar nano-carrier is a popular choice for drug delivery applications.
In this article, we describe a simple and effective protocol for synthesizing drug-loaded, disulfide cross-linked micelles based on the self-assembly of a well-defined amphiphilic linear-dendritic copolymer (telodendrimer, TD). TD is composed of polyethylene glycol (PEG) as the hydrophilic segment and a thiolated cholic acid cluster as the core-forming hydrophobic moiety attached stepwise to an amine-terminated PEG using solution-based peptide chemistry. Chemotherapy drugs, such as paclitaxel (PTX), can be loaded using a standard solvent evaporation method. The O2-mediated oxidation was previously utilized to form intra-micellar disulfide cross-links from free thiol groups on the TDs. However, the reaction was slow and not feasible for large-scale production. Recently, an H2O2-mediated oxidation method was explored as a more feasible and efficient approach, and it was 96 times faster than the previously reported method. Using this approach, 50 g of PTX-loaded, disulfide cross-linked nanoparticles have been successfully produced with narrow particle size distribution and high drug loading efficiency. The stability of the resulting micelle solution is analyzed using disrupting conditions such as co-incubation with a detergent, sodium dodecyl sulfate, with or without a reducing agent. The drug-loaded, disulfide cross-linked micelles demonstrated less hemolytic activity when compared to their non-cross-linked counterparts.

To deliver cancer drugs to tumor sites with high specificity and reduced side effects, new methods based on nanoparticles are required. Here, we describe disulfide cross-linked micelles that can be easily prepared by hydrogen peroxide-mediated oxidation and are able to dissociate efficiently under a reducing tumor environment to release payloads.

Un enfoque Facile y eficiente para la producción de micelas reticuladas reversible disulfuro

Nanomedicine is an emerging form of therapy that harnesses the unique properties of particles that are nanometers in scale for biomedical application. ...

Bioquímica

MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent

Tumor extracellular matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers for cancer molecular imaging. In this work, we demonstrated effective MR cancer molecular imaging with a small molecular peptide targeted Gd-DOTA monoamide complex as a targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma. We performed the experiment of evaluating the effectiveness of the agent for non-invasive detection of prostate tumor with MRI in a mouse orthotopic PC-3 prostate cancer model. The targeted contrast agent was effective to produce significant tumor contrast enhancement at a low dose of 0.03 mmol Gd/kg. The peptide targeted MRI contrast agent is promising for MR molecular imaging of prostate tumor.

To demonstrate MR cancer molecular imaging with a small peptide targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma in a mouse prostate cancer model.

MR Imagen Molecular del cáncer de próstata con un agente de contraste dirigidos Pequeño Molecular CLT1 Péptido

Tumor extracellular  matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers  for cancer molecular imaging. In this work,  we ...

Medicina

Synthesis and Characterization of 1,2-Dithiolane Modified Self-Assembling Peptides

This report focuses on the synthesis of an N-terminus 1,2-dithiolane modified self-assembling peptide and the characterization of the resulting self-assembled supramolecular structures. The synthetic route takes advantage of solid-phase peptide synthesis with the on-resin coupling of the dithiolane precursor molecule, 3-(acetylthio)-2-(acetylthiomethyl)propanoic acid, and the microwave-assisted thioacetate deprotection of the peptide N-terminus before final cleavage from the resin to yield the 1,2-dithiolane modified peptide. After the high-performance liquid chromatography (HPLC) purification of the 1,2-dithiolane peptide, derived from the nucleating core of the A&#946; peptide associated with Alzheimer&#39;s disease, the peptide is shown to self-assemble into cross-&#946; amyloid fibers. Protocols to characterize the amyloid fibers by Fourier-transform infrared spectroscopy (FT-IR), circular dichroism spectroscopy (CD) and transmission electron microscopy (TEM) are presented. The methods of N-terminal modification with a 1,2-dithiolane moiety to well-characterized self-assembling peptides can now be explored as model systems to develop post-assembly modification strategies and explore dynamic covalent chemistry on supramolecular peptide nanofiber surfaces.

A protocol for the synthesis of a 1,2-dithiolane modified peptide and the characterization of the supramolecular structures resulting from the peptide self-assembly.

Síntesis y caracterización de 1, 2-Dithiolane modifican uno mismo-montaje de péptidos

This report focuses on the synthesis of an N-terminus 1,2-dithiolane modified self-assembling peptide and the characterization of the resulting ...

Preparation and Photoacoustic Analysis of Cellular Vehicles Containing Gold Nanorods

Gold nanorods are attractive for a range of biomedical applications, such as the photothermal ablation and the photoacoustic imaging of cancer, thanks to their intense optical absorbance in the near-infrared window, low cytotoxicity and potential to home into tumors. However, their delivery to tumors still remains an issue. An innovative approach consists of the exploitation of the tropism of tumor-associated macrophages that may be loaded with gold nanorods in vitro. Here, we describe the preparation and the photoacoustic inspection of cellular vehicles containing gold nanorods. PEGylated gold nanorods are modified with quaternary ammonium compounds, in order to achieve a cationic profile. On contact with murine macrophages in ordinary Petri dishes, these particles are found to undergo massive uptake into endocytic vesicles. Then these cells are embedded in biopolymeric hydrogels, which are used to verify that the stability of photoacoustic conversion of the particles is retained in their inclusion into cellular vehicles. We are confident that these results may provide new inspiration for the development of novel strategies to deliver plasmonic particles to tumors.

We show the preparation and address the feasibility of cellular vehicles containing gold nanorods for the photoacoustic imaging of cancer.

Análisis preparación y fotoacústica de Vehículos celulares que contienen oro Nanorods

Gold nanorods are attractive for a range of biomedical applications, such as the photothermal ablation and the photoacoustic imaging of cancer, thanks to ...

Bioingeniería

Microwave-driven Synthesis of Iron Oxide Nanoparticles for Fast Detection of Atherosclerosis

A fast and reproducible microwave-driven protocol has been developed for the synthesis of neridronate-functionalized nanoparticles. Starting from the synthesis of hydrophobic nanoparticles, our method is based on an adaptation from thermal decomposition method to microwave driven synthesis. The new methodology produces a decrease in the reaction times in comparison with traditional procedures. Moreover, the use of the microwave technology increases the reproducibility of the reactions, something important from the point of view of clinical applications. The novelty of this iron oxide nanoparticle is the attachment of Neridronate. The use of this molecule leads a bisphosphonate moiety towards the outside of the nanoparticle that provides Ca2+ binding properties in vitro and selective accumulation in vivo in the atheroma plaque. The protocol allows the synthesis and plaque detection in about 3 hr since the initial synthesis from organic precursors. Their accumulation in the atherosclerotic area in less than 1 hr provides a contrast agent particularly suitable for clinical applications.

Microwave technology enables extremely fast synthesis of iron oxide nanoparticles for atherosclerosis plaque characterization. The use of an aminobisphosphonate in the external side of the nanoparticle provides a fast accumulation in the atherosclerotic area.

Síntesis microondas impulsada de nanopartículas de óxido de hierro para la detección rápida de la aterosclerosis

A fast and reproducible microwave-driven protocol has been developed for the synthesis of neridronate-functionalized nanoparticles. Starting from the ...

Initial Evaluation of Antibody-conjugates Modified with Viral-derived Peptides for Increasing Cellular Accumulation and Improving Tumor Targeting

Antibody-conjugates (ACs) modified with virus-derived peptides are a potentially powerful class of tumor cell delivery agents for molecular payloads used in cancer treatment and imaging due to increased cellular accumulation over current ACs. During early AC in vitro development, fluorescence techniques and radioimmunoassays are sufficient for determining intracellular localization, accumulation efficiency, and target cell specificity. Currently, there is no consensus on standardized methods for preparing cells for evaluating AC intracellular accumulation and localization. The initial testing of ACs modified with virus-derived peptides is critical especially if several candidates have been constructed. Determining intracellular accumulation by fluorescence can be affected by background signal from ACs at the cell surface and complicate the interpretation of accumulation. For radioimmunoassays, typically treated cells are fractionated and the radioactivity in different cell compartments measured. However, cell lysis varies from cell to cell and often nuclear and cytoplasmic compartments are not adequately isolated. This can produce misleading data on payload delivery properties. The intravenous injection of radiolabeled virus-derived peptide-modified ACs in tumor bearing mice followed by radionuclide imaging is a powerful method for determining tumor targeting and payload delivery properties at the in vivo phase of development. However, this is a relatively recent advancement and few groups have evaluated virus-derived peptide-modified ACs in this manner. We describe the processing of treated cells to more accurately evaluate virus-derived peptide-modified AC accumulation when using confocal microscopy and radioimmunoassays. Specifically, a method for trypsinizing cells to remove cell surface bound ACs. We also provide a method for improving cellular fractionation. Lastly, this protocol provides an in vivo method using positron emission tomography (PET) for evaluating initial tumor targeting properties in tumor-bearing mice. We use the radioisotope 64Cu (t1/2 = 12.7 h) as an example payload in this protocol.

Viral-derived peptides coupled to antibody-conjugates (ACs) is an approach gaining momentum due to the potential of delivering molecular payloads with increased tumor cell accumulation. Utilizing common methods to evaluate peptide conjugation, AC and payload intracellular accumulation, and tumor targeting, this protocol helps researchers during the key initial development phases.

Evaluación inicial de los conjugados de anticuerpos modificados con péptidos virales derivados para aumentar la acumulación celular y mejorar Tumor Targeting

Antibody-conjugates (ACs) modified with virus-derived peptides are a potentially powerful class of tumor cell delivery agents for molecular payloads used ...

Synthesis of Functionalized 10-nm Polymer-coated Gold Particles for Endothelium Targeting and Drug Delivery

Gold nanoparticles (AuNPs) have been used extensively in medical research due to their size, biocompatibility, and modifiable surface. Specific targeting and drug delivery are some of the applications of these AuNPs, but endothelial extracellular matrices&#39; defensive properties hamper particle uptake. To address this issue, we describe a synthesis method for ultrasmall gold nanoparticles to improve vascular delivery, with customizable functional groups and polymer lengths for further adjustments. The protocol yields 2.5 nm AuNPs that are capped with tetrakis(hydroxymethyl)phosphonium chloride (THPC). The replacement of THPC with hetero-functional polyethylene glycol (PEG) on the surface of the AuNP increases the hydrodynamic radius to 10.5 nm while providing various functional groups on the surface. The last part of the protocol includes an optional addition of a fluorophore to allow the AuNPs to be visualized under fluorescence to track nanoparticle uptake. Dialysis and lyophilization were used to purify and isolate the AuNPs. These fluorescent nanoparticles can be visualized in both in vitro and in vivo experiments due to the biocompatible PEG coating and fluorescent probes. Additionally, the size range of these nanoparticles render them an ideal candidate for probing the glycocalyx without disrupting normal vasculature function, which may lead to improved delivery and therapeutics.

We describe a method of synthesizing biocompatible 10-nm gold nanoparticles, functionalized by coating poly-ethylene glycol onto the surface. These particles can be used in vitro and in vivo for delivering therapeutics to nanoscale cellular and extracellular spaces that are difficult to access with conventional nanoparticle sizes.

Síntesis de funcionalizados 10 nm recubierto de polímero partículas de oro para apuntar el endotelio y el suministro de medicamentos

Gold nanoparticles (AuNPs) have been used extensively in medical research due to their size, biocompatibility, and modifiable surface. Specific targeting ...

Quantification of Monocyte Transmigration and Foam Cell Formation from Individuals with Chronic Inflammatory Conditions

Coronary artery disease (CAD) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Atherosclerosis, a leading cause of CAD, is initiated by the transmigration of innate immune monocytes to inflammatory sites of deposited lipid called fatty streaks, which are present in arterial walls of medium to large arteries. The key pathogenic feature of lesions at this early stage of atherosclerosis is the maturation of monocytes which migrate into arteries to form foam cells or lipid-laden macrophages. Considerable evidence supports the hypothesis that risk of atherosclerosis is increased by chronic inflammatory conditions accompanying diseases such as rheumatoid arthritis and HIV, as well as general ageing, and that this risk is predicted by monocyte activation. While mouse models provide a good platform to investigate the role of monocytes in atherogenesis in vivo, they require genetic alteration of natural cholesterol metabolism and drastic alteration of normal mouse diets, and have limited suitability for the study of atherogenic influences of human comorbid diseases. This motivated us to develop a human in vitro model to measure the atherogenic potential of monocytes isolated from individuals with defined disease states. Currently, human in vitro models are limiting in that they evaluate monocyte transmigration and foam cell formation in isolation. Here we describe a protocol in which monocytes isolated from patient blood transmigrate across human endothelial cells into a type 1 collagen matrix, and their propensity to mature into foam cells in the presence or absence of exogenous lipid is measured. The protocol has been validated for the use of human monocytes purified from individuals with HIV infection and elderly HIV uninfected individuals. This model is versatile and allows monocyte transmigration and foam cell formation to be evaluated using either microscopy or flow cytometry as well as allowing the assessment of atherogenic factors present in serum or plasma.

We describe a protocol to measure transmigration by monocytes across human endothelial monolayers and their subsequent maturation into foam cells. This provides a versatile method to assess the atherogenic properties of monocytes isolated from people with different disease conditions and to evaluate factors in blood which may enhance this propensity.

Cuantificación de transmigración de monocitos y formación de la célula de la espuma de individuos con enfermedades inflamatorias crónicas

Coronary artery disease (CAD) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Atherosclerosis, a leading cause of CAD, is initiated by the ...

Inmunología e Infección

Preparation and Characterization of Targeted Microbubbles

Targeting of microbubbles (ultrasound contrast agents for molecular imaging) has been researched for more than two decades. However, methods of microbubble preparation and targeting ligand attachment are cumbersome, complicated, and lengthy. Therefore, there is a need to simplify the targeted microbubble preparation procedure to bring it closer to clinical translation. The purpose of this publication is to provide a detailed description and explanation of the steps necessary for targeted microbubble preparation, functional characterization and testing. A sequence of the optimized and simplified procedures is presented for two systems: a biotin-streptavidin targeting pair model, and a cyclic RGD peptide targeting the recombinant &#945;v&#946;3 protein, which is overexpressed on the endothelial lining of the tumor neovasculature.
Here, we show the following: covalent coupling of the targeting ligand to a lipid anchor, assessment of the reagent quality, and tests that confirm the successful completion of the reaction; preparation of the aqueous precursor medium containing microbubble shell components, followed by microbubble preparation via amalgamation; assessment of the efficacy of lipid transfer onto the microbubble stabilizer shell; adjustment of microbubble size distribution by flotation at normal gravity to remove larger microbubbles that might be detrimental for in vivo use; assessment of microbubble size distribution by electrozone sensing; evaluation of targeted binding of the microbubbles to receptor-coated surface in a static binding assay test (in an inverted dish); and evaluation of targeted binding of the microbubbles to receptor-coated surface in a parallel plate flow chamber test.

The goal of this protocol is to prepare, purify and characterize gas-filled microbubbles (targeted contrast agents for ultrasound molecular imaging). Two targeting systems are described: biotinylated bubbles adherent to streptavidin, and cyclic RGD peptide microbubbles that bind to &#945;v&#946;3, a known tumor neovasculature biomarker.

Síntesis de monocito-targeting Peptide Amphiphile micelas para la proyección de imagen de la aterosclerosis

Resumen

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Biopolímeros Nano basados en ácido polimálico de Focalización de múltiples Marcadores tumorales: una oportunidad para la medicina personalizada?

Un enfoque Facile y eficiente para la producción de micelas reticuladas reversible disulfuro

MR Imagen Molecular del cáncer de próstata con un agente de contraste dirigidos Pequeño Molecular CLT1 Péptido

Síntesis y caracterización de 1, 2-Dithiolane modifican uno mismo-montaje de péptidos

Análisis preparación y fotoacústica de Vehículos celulares que contienen oro Nanorods

Síntesis microondas impulsada de nanopartículas de óxido de hierro para la detección rápida de la aterosclerosis

Evaluación inicial de los conjugados de anticuerpos modificados con péptidos virales derivados para aumentar la acumulación celular y mejorar Tumor Targeting

Síntesis de funcionalizados 10 nm recubierto de polímero partículas de oro para apuntar el endotelio y el suministro de medicamentos

Cuantificación de transmigración de monocitos y formación de la célula de la espuma de individuos con enfermedades inflamatorias crónicas

Preparation and Characterization of Targeted Microbubbles

Síntesis de monocito-targeting Peptide Amphiphile micelas para la proyección de imagen de la aterosclerosis

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Biopolímeros Nano basados ​​en ácido polimálico de Focalización de múltiples Marcadores tumorales: una oportunidad para la medicina personalizada?

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MR Imagen Molecular del cáncer de próstata con un agente de contraste dirigidos Pequeño Molecular CLT1 Péptido

Síntesis y caracterización de 1, 2-Dithiolane modifican uno mismo-montaje de péptidos

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