Der Hauptzweck dieser Studie ist die Verwendung des Mausmodells der Stuhlligatur und der punktionierten Sepsis, um einen zuverlässigen Blutbiomarker für Sepsis zu bewerten. Die Ligatur und Punktion des Stuhls, kurz CLP, ist ein klinisch relevantes Modell der Sepsis. CLP ist ein häufig verwendetes Modell in der Sepsisforschung.
Citrulliniertes Histon H3 oder CitH3 stammt aus Sepsis-induzierter NETose. Unsere vorherige Studie zeigt, dass CitH3 ein zuverlässiger diagnostischer Biomarker für Sepsis ist. Wählen Sie männliche C57BL/6-Mäuse aus.
Wiegen Sie die Maus und betäuben Sie die Maus durch Einatmen von 1,5% Isofluran. Befestigen Sie die Maus auf einem Heizkissen. Tragen Sie die Enthaarungscreme auf den Bauch auf und lassen Sie sie nicht länger als eine Minute einwirken, bevor Sie die Creme und die Haare entfernen.
Bereiten Sie sterile chirurgische Instrumente vor, die für die Chirurgie von Nagetieren geeignet sind. Desinfizieren Sie die Bauchhaut mindestens dreimal mit Jod. Bedecken Sie den operativen Operationsbereich mit dem richtigen sterilen chirurgischen Tuch.
Verwenden Sie eine sterile chirurgische Schere, um einen etwa zwei Zentimeter großen Schnitt in die Bauchdecke entlang der Linea alba zu machen. Identifizieren und isolieren Sie den Blinddarm aus der Bauchhöhle mit einer sterilen Pinzette. Ligate 75 Volumen des Blinddarms mit 4-0 Seidennaht.
Ligatur die mesenterialen Blutgefäße nicht. Zu beachten ist, dass ein unterschiedlicher Prozentsatz des Blinddarms die Schwere der Sepsis bestimmt. 25% führt zu einer niedriggradigen Sepsis, 50% führt zur mittelgradigen Sepsis und 75% zu einer hochgradigen Sepsis.
Punktieren Sie den Blinddarm durch eine Durchgangsperforation mit einer 21-Gauge-Nadel in der Mitte zwischen dem Schwanzende und der Ligatur. Drücken Sie den Kot vorsichtig durch Eindringlöcher aus dem Blinddarm. Zu beachten ist, dass die Menge an Kot, die in die Peritonealhöhle gepresst wird, konsistent sein sollte, da Kot auch die Schwere der Sepsis bestimmt.
Ersetzen Sie den Blinddarm sowie Kot vorsichtig in die Bauchhöhle. Schließen Sie die Bauchmuskelschicht und die Hautschicht mit 6-0 Seidennaht. Desinfizieren Sie den Schnitt mit Jod.
Die Injektion von Ketoprofen, fünf Milligramm pro Kilogramm, sollte im unteren linken Quadranten des Abdomens durchgeführt werden, um den Blinddarm zu vermeiden. Legen Sie die Maus bis zur vollständigen Genesung auf ein Heizkissen. Die Maus ist in einem temperaturkontrollierten Raum untergebracht und erhält freien Zugang zu Nahrung und Wasser.
Die Tiere werden durch eine Überdosierung von Kohlendioxid mit Symptomen einer Sepsis eingeschläfert, die für unsere vordefinierten Endpunkte auf der Grundlage unserer vorgestellten Studie relevant ist. Die Mäuse werden nach dem Zufallsprinzip in die Scheingruppe, die CLP-Gruppe und die CLP plus Cl-Amidin- oder YW3-56-Behandlungsgruppe eingeteilt. Mäuse in der Scheingruppe erhalten alle CLP-Verfahren außer Blinddarmligatur und Punktion.
Entnehmen Sie peripheres Blut 24 Stunden nach der Operation und bereiten Sie das Serum durch Zentrifugation vor. Die CitH3-Konzentration wurde durch Western Blotting und ein selbst entwickeltes ELISA-Kit bestimmt. Wie in Abbildung zwei gezeigt, wurde in der Scheingruppe kein CitH3 nachgewiesen.
Die CitH3-Werte waren nach dem CLP-Einsetzen erhöht, was durch die PAD-Hemmung signifikant abgeschwächt wurde. Basierend auf unseren Daten schließen wir, dass zirkulierendes CitH3 ein zuverlässiger diagnostischer Biomarker für Sepsis ist.
