Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die einzigartige Technik vertraut zu machen, die bei der Isolierung des mediastinalen Lymphknotens von Mäusen erforderlich ist. Die Operation wurde nach der Injektion von Immunstimulanzienmaterial auf sechs verschiedenen Routen bei Mäusen durchgeführt. In dieser Studie haben wir eine neue Klasse von Materialien verwendet, die nanogroße Strukturen bilden.
Tenside bestehen aus hydrophiler Kopfgruppe und hydrophobem Schwanz. Diese bilden sphärische Micelle oder andere sekundäre Struktur aufgrund der Mikrophagentrennung. Wir nutzten diese Eigenschaft zu einem Bio-Makromolekül, das DNA ist.
DNA-Amphiphile, hier gezeigt, als regelmäßige Nukleotide wie A, C, G, T, hat hydrophile Blöcke, während lipidmodifizierte Neurozellnukleobasen als hydrophobe Einheiten fungieren. Das modifizierte Oligo wurde durch DNA-Synthesizer in großen Octogrammen synthetisiert. In Äquimedien bilden die amphiphilen Lipid-DNAs spontan nanogroße sphärische Mizellen.
Bei der Bildung von Micelle bleibt die DNA als leerer Träger mit einem Durchmesser von etwa 10 Nanometern einsam. Um den Träger mit Immunstimulanzien auszustatten, ist es einfach, die DNA-Sequenz mit einem toll-ähnlichen Rezeptor neun adjuvanten, nämlich eCpG, zu erweitern. Lipid-DNA und eCpG-Basis wird hier daher die äußere Oberfläche von Micelle mit CpG-Sequenz abgebaut.
Wir nennen dieses immunstimulierende Nanoteilchen dann DAS INP. Um den richtigen Weg von INPs für die Immunantwort zu bestimmen, injizierten wir INPs an Mäuse in 64 Injektionsrouten und folglich wurde ein richtiges Lymphknotengewebe analysiert. Für eine ausführlichere Injektionsanleitung finden Sie einen JOB-Artikel, der 2012 von Charles River veröffentlicht wurde.
Der Hauptvorteil dieses Videos ist, visuell zu zeigen, wie man mediastinalen Lymphknoten erhält. Das Video zeigt explizit die Lage des mediastinalen Lymphknotens, die viele Menschen bei der Isolierung der Organe nur schwer isolieren können. Alle Experimente wurden nach den Richtlinien des Institutional Animal Care and Use Committee am Shanghai Public Health Clinical Center oder der University of Ulsan College of Medicine durchgeführt.
Dieser Teil zeigt die spezifische Lage von Organen oder Geweben, die für die immunologische Analyse von entscheidender Bedeutung sind. Milz und zwei Lymphknoten werden isoliert. Zunächst wurden Mäuse durch die Euthanasie in Kohlendioxid-Inhalation geopfert, und alle Anstrengungen wurden unternommen, um das Leiden so gering wie folgt an die Anleitung des Institutionellen Ausschusses für Tierpflege und -nutzung zu halten.
Von nun an wollen wir die Organe finden und isolieren. Fixieren Sie zunächst die Maus auf dem Operationstisch mit vier Pins auf der Handfläche der Maus. Sterilisieren Sie den Sezierenbereich mit Alkohol.
Sezieren Sie die äußere Abdeckung der Unterseite des Mausbauchs mit einer großen Schere. Verwenden Sie Zangen, um die beiden Seiten der Befestigung zu öffnen und mit Stiften auf dem Operationstisch zu fixieren. Die Position des Leistenlymphknotens wird durch die Suche nach der Konjunktion des Gefäßes, das in Richtung des linken Beins geht, exponiert.
Die Form des Gefäßes sieht aus wie der gekippte Alphabetbuchstabe Y.Undecken Sie die Schicht mit den Zangen und ziehen Sie sie von der Haut. Schneiden Sie das Peritoneum mit einer kleineren Schere, um innere Organe freizulegen. Bewegen Sie den Darm nach rechts, indem Sie Zangen verwenden und dann in geformte Milz wickeln, die auf der linken oberen Seite des Bauches zeigen.
Zusätzliche Aufmerksamkeit ist während des Verfahrens erforderlich, da Milz leicht zu stören ist. Schließlich der Kernpunkt dieses Videos: Ernte mediastinaler Lymphknoten. Es befindet sich unter der oberen Seite der Lunge, die aufgrund ihrer geringen Größe und etwas versteckten Lage schwer zu sehen ist.
Bedecken Sie den Bereich vorsichtig mit einer kleinen Schere und Zange. Schneiden Sie beide Seiten der Rippen und der Membran sowie. Clip die abgeschnittenen Rippen über der Brust.
Während des Eingriffs vermeiden Sie schädliche Herz- und Blutgefäße, da es die Stelle blenden könnte, den transluzenten mediastinalen Lymphknoten zu finden. Wenn durch Zufall das Blutgefäß platzt, wischen Sie das Blut vorsichtig mit Gaze aus. Schnappen Sie sich die linke Seite der Lunge und drehen Sie sie sanft auf die andere Seite, um unter der Lunge zu sehen.
Ziehen Sie den mediastinalen Lymphknoten mit Zangen hoch. Nach der Ernte des mediastinalen Lymphknotens, stellen Sie sicher, dass das gesamte Fett und Blut, das den Lymphknoten umgibt, perfekt entfernt werden, da unerwünschtes Gewebe die Analyse beeinflussen kann. Schließlich alle isolierten Organe auf einer Petrischale mit Medien gefüllt.
Insgesamt 0,1 mal 10 bis zu den sechsten Zellen wurden an dieser Durchflusszytometrie analysiert. Basierend auf Kraft getter und Größe getter LeukozytenPopulation wurde abgezäut und dass Zellen durch dunkle Färbung ausgeschlossen wurden. 24 Stunden nach der INP-Injektion durch 64 Injektionswege wurden Milz, Leistenlymphknoten und mediastinaler Lymphknoten geerntet und die DC-Aktivierung durch Durchflusszytometrie analysiert.
Basierend auf der Strategie der Durchflusszytometrie wurde die DC-Population als CD11C-positive und Abstammungsnegative Zellen in der lebenden Leukozyten definiert. Insbesondere förderte die intranasale Injektion von INP signifikante Erhöhungen der CD40, 80, 86-Expression im mediastinalen Lymphknoten im Vergleich zu PBS für die Kontrolle. Daher legten diese Daten nahe, dass die intranasale Injektion von INP als schleimhautadjuvant zur Verbesserung der Immunität in der Lunge verwendet werden kann.
