分离禽排卵前卵泡颗粒和卵泡膜细胞层用于下游应用

我们试图了解 Langhand 卵巢的特殊颗粒和膜细胞。我们研究了两种细胞类型在排卵期间不同时间点的差异基因表达。这提供了对繁殖效率和生育能力的见解，这些见解将用于可持续地提高鸡蛋产量。

目前正在使用下一代测序技术和代谢测定对家禽生殖生物学进行研究。这样做是为了研究生殖组织和性成熟和排卵所涉及的荷尔蒙相互作用。颗粒细胞层可能并不总是完整的片状。

实践中的患者需要确保更高的成功概率。颗粒层上残留的额外蛋黄是另一个问题。在冷 PBS 中较长的孵育时间可能会缓解这个问题。

否则，可能需要进行下游清理。这项技术将允许鸟类生殖生物学家之间的标准化。随着测序技术的进步，阐明器官内特化细胞的作用变得越来越容易。

因此，分离特殊细胞类型的技术的可视化对于未来的复制至关重要。首先，从性成熟的雌鸟身上分离出卵泡，并将它们放在冰上。在作之前，研究卵泡，注意茎的位置、柱头和生发盘。

然后在干纸巾上轻轻滚动卵泡，必要时从滤泡表面拉下浆膜。将卵泡的茎放在装满 PBS 的碗上，并利用重力来可视化茎在卵泡表面的结束位置。使用剪刀，只剪掉茎而不刺穿毛囊表面，然后继续去除浆膜，直到它不再可见。

使用灯箱照明，以生发盘为参考，将柱头重新定位在另一侧。轻轻握住卵泡，使柱头侧可见，并将卵泡直接放在一碗冰冷的 PBS 上。然后，拿起手术刀，沿着柱头的长度轻轻切片。

当卵黄开始脱落时，立即将卵泡滴入 PBS 中。使用一对直的无齿组织镊子，轻轻地从切片一侧的蛋黄上剥开滤泡壁的粉红色层。继续进行小捏和拉动动作，将卵泡壁从蛋黄上抬起。

要进行层分离，一次将滤泡壁组织从蛋黄中缩回约 5 毫米。缩回 5 毫米的切片后，使用倾斜的镊子和直镊子沿毛囊壳探查。找到颗粒层后，将其牢固地捏到 Theca 层，然后继续如前所述将两层从蛋黄中拉出。

接下来，用弯曲的镊子轻轻地将蛋黄从捏住的层上刷走。从碗中扫掉或去除多余的蛋黄，不要刮擦颗粒层，以免撕裂。在缩回卵泡壁的每 5 到 10 毫米切片后，暂停并使用镊子将卵泡膜层和颗粒层彼此剥开，也从蛋黄上剥落。

现在，使用直镊子小心地接近生发盘。将颗粒层牢牢地固定在 Theca 层上。使用弯曲的镊子，用轻微的刷牙动作将生发盘从颗粒细胞推到蛋黄表面。

如果需要将生发盘作为研究标本，请使用倾斜的镊子刷掉蛋黄。继续用弯曲的镊子将卵黄与卵泡壁分离，直到卵泡的整个球体都没有蛋黄。蛋黄的剩余部分被刷掉后，将颗粒层的最后一部分与 Theca 层分开。

确保完全分离的颗粒层尽可能干净，而不会被大量轭状物质覆盖。将颗粒层和卵泡膜层放入装有 4 摄氏度 PBS 的单独容器中。将颗粒层和膜层放入指定的容器中后，用镊子轻轻搅拌 PBS 中的膜层，以分离颗粒层的任何剩余残留物。