使用细胞追踪分析口腔器械再生期间和之后的张力模式

长期以来，桫椤一直被用作了解单细胞再生的模式生物。虽然视觉形态再生的时间表是已知的，但功能再生的时间表仍然未知。该测定跟踪经历同步再生的中心群体的运动，以便可以量化损失函数的恢复。

它可以适应与其他细胞类型一起使用。成像室缺乏安全密封将导致孔相互泄漏或在孔内形成气泡。对于不熟悉使用硅胶垫片的研究人员，我们强烈建议在使用前将PSW或其他清洁介质移液到每个孔中以测试泄漏。

样品室的结构比口头描述更容易显示。从采集的视频数据中提取运动模式的过程也是如此。首先，切一块250微米厚的硅胶间隔片，其高度和宽度都比显微镜载玻片略小。

使用整个冲头来创建圆形井，在相邻的井之间留出足够的空间，以确保良好的密封性。通过将弯曲体细胞在10%蔗糖或2%尿中孵育两分钟来启动口腔设备的再生。然后用新鲜培养基洗涤三次。

轻轻移液约10个扩口器到每个孔中。注意使样品体积与孔体积尽可能匹配。从一个边缘开始，轻轻地将一块盖板玻璃放在孔上，关闭孔。

使用狭窄且略微柔韧的物体，例如10微升移液器吸头，将其压在与硅胶片接触的盖玻片上，以确保良好的密封性。将样品放在显微镜载物台上，并将显微镜设置为最低的可用放大倍率，以便一个很好地适合框架。开始延时拍摄，并在每个时间点以每秒30帧的速度获取10秒的视频。

要进行校准，请以与视频相同的放大倍率设置获取校准载玻片的清晰图像或清晰的标尺。使用任何图像查看程序，计算已知物理距离的标记之间的像素数。下载两个脚本，跟踪单元格和清理跟踪到计算机上易于记忆的位置，并将数据视频传输到此计算机。

将数据视频组织到文件夹中。每个时间点一个。使用脚本跟踪单元格在数据视频中执行自动单元格跟踪，方法是打开跟踪单元格并运行脚本 选择添加到路径"如果弹出窗口提示，这通常仅在脚本首次从给定文件夹运行时发生。

出现提示时，选择一个或多个数据视频以启动跟踪。导航到数据视频，一旦对文件列表感到满意，请单击"打开""要手动拒绝异常或虚假跟踪，请在MATLAB编辑器窗口中双击文件以打开干净的跟踪。在提示符下，选择跟踪单元格输出的数据文件夹。

导航到其中一个创建的文件夹并选择它。出现提示时，输入 1 以保留跟踪，输入零以拒绝跟踪。然后按 Enter 键继续执行下一个跟踪。

首先下载标题为意大利面条情节的脚本。打开并运行脚本。当文件浏览器窗口弹出提示时，选择要打开的文件夹。

导航到其中一个时间点的文件夹。出现提示时，校准，每毫米的像素数是多少？输入校准值并按回车键。

根据需要通过更改脚本的第 55 行来调整绘图的轴，默认情况下，该行设置为 RR 等于 4。包括半径最大为四毫米。保存绘图。

结果显示了在进入口腔器官再生过程的2、3、7和8小时时，stentor细胞群的集体运动性。这些图显示了运动个体数量的预期增加和群体中运动性最强的细胞范围的四倍增加。最快的游泳细胞，如果开始靠近边缘，则被限制完全在一条直线上游泳，并且它们的运动范围看起来更小。

将支路细胞分为三个不同的类别，非运动性，无可见保持快速，非运动性，可见保持快速和运动。结果显示了一个堆叠直方图，总结了这些类别中的相对细胞计数，作为我们再生的函数。在后来的时间里，在具有可见的禁食的菌落中发现了大量细胞，强烈表明它们已经探索了环境并优先附着在同类中的其他细胞附近。

重要的是要选择适合直径约1毫米的试样孔尺寸。这包括直径为5/16英寸的硅胶垫片厚度，以及每孔10个细胞。在将此方案适用于其他细胞类型时，应调整这些数字。

该测定可以与RNA-I一起进行，以研究和比较不同张子表型的再生。