同源原位骨肉瘤Sprague Dawley大鼠模型，截肢控制转移率

将骨肉瘤细胞植入胫骨微环境内会促进肺转移。该模型也可用于研究肺转移或需要完整免疫系统的新型癌症疗法的机制。一旦肿瘤已经确定，在长期生存研究中，截肢是必要的，以控制转移的速度。

我们使用颈静脉注射来可视化静脉注射药物递送。颈静脉注射对于需要精确药物递送的许多其他疾病模型很有用。我们已经使用这种方法来递送纳米颗粒和放射性标记的激光，用于体内成像。

我们建议新用户在尝试实验以掌握肢体截肢而不失血之前，练习从5到10只安乐死大鼠中移除肢体。在确认对反射缺乏反应后，将麻醉的大鼠固定在仰卧位的低热设置热垫上的鼻锥中。去除右腿上的毛发，直到腹侧和背侧下腹部。

使用纱布或喷雾剂用70%乙醇和适当稀释的防腐剂对手术区域进行消毒，并将软膏涂抹在动物的眼睛上。使用钻头状运动来开口，将一根标有10毫米的22号针插入胫骨平台中间的胫骨骨干中，将针通过形骺骨延伸到骺骨骺骨。取出针头后，轻轻混合感兴趣的肿瘤细胞悬浮液以获得均匀的细胞悬浮液，并将20微升PBS中的7.5×10至第四个细胞加载到Hamilton注射器中。

用距针尖10毫米的细胞标记汉密尔顿注射器，并将针头插入22号针头制成的孔中的10毫米标记。然后轻轻地将整个体积的细胞排入骨髓腔，并将大鼠放入加热垫上的笼子中，并进行监测，直到完全卧着。对于静脉注射阿霉素，在麻醉确认后，使用仔细解剖以观察右颈静脉或左颈静脉，并将针头插入覆盖的肌肉组织中。

将针头朝向头部，进入颈静脉腔，因为它在胸肌前方的颈静脉中可见，并将少量血液吸入针尖以确认准确插入。当针头就位时，在一分钟内缓慢注射100至150微升每公斤阿霉素2毫克。在分娩过程中，溶液应在静脉内可见。

当所有溶液都已送达后，使用无菌纱布对静脉施加轻柔的压力，并使用三到四个伤口夹来关闭切口。确认镇静后，去除右腿上的毛发，直到腹侧和背侧下腹部，并将大鼠置于加热垫的仰卧位。如图所示，从小腿中部擦洗皮肤至右下腹部髋关节上方，并将软膏涂抹在动物的眼睛上。

使用无菌手套和器械，将腿部拉过无菌手术悬垂物的通风口，并在窒息器的近端做一个圆周皮肤切口。使后肢变软，将股动脉和静脉暴露在后肢的腹内侧表面上，并使用4-0条可吸收缝合线对股骨中层和远端横断的血管提起诉讼。在肌肉夹层期间，将静脉夹在远端以减少渗漏，并使用钝性夹层通过横向向外旋转来外展髋关节。

定位股骨头并将其从髋臼上解脱出来，并去除任何剩余的组织，使腿部附着在身体上。用每公斤约6毫克罗哌卡因对髋臼和坐骨神经进行飞溅块，并使用简单中断的4-0可吸收缝合线关闭髋臼上的肌肉组织。然后使用放置5至10毫米的伤口夹来关闭皮肤的边缘。

用于肿瘤监测的 X 线成像可以确认骨肿瘤浸润，并且可以在最近截肢或福尔马林固定的肢体上进行。X射线成像还允许评估有和没有转移的肺部的放射成像形态，为确定是否需要安乐死提供一种快速简便的方法，以防止不必要的自发死亡。在大鼠骨肉瘤中，骨溶解和成骨肿瘤形态都可以通过截肢的组织病理学来确认。

请注意，本例中皮质骨不存在，并且相邻的骨骼已被垂直于皮层现有轴的新编织骨替换或强化。未成熟类骨质体的岛屿也可以在肿瘤内识别。在这些图像中，可以观察到代表性肺转移的微观形态，一些具有矿化的骨和肿瘤血管栓子。

原发性骨肉瘤肿瘤的免疫染色可以揭示免疫细胞群（例如CD68阳性巨噬细胞或CD3阳性T细胞）对肿瘤的浸润。肿瘤细胞蛋白裂解物的蛋白质印迹可用于确定蛋白激酶，蛋白激酶受体以及与这些途径相互作用的其他蛋白质的表达。对于胫骨植入，一旦第一个胫骨孔被制成，继续以相同的角度将腿握在非惯用手中，以保持皮肤和骨孔对齐，使Hamilton针插入更容易。

对于颈静脉注射，将针头插入肌肉，但不要将针头倾斜太多以避免错过静脉。对于截肢，首先对安乐死的大鼠进行解剖。