使用标准化肠道循环模型对小鼠肠道渗透性和中性粒细胞转导的功能评估

肠道模型是一种适应性强、生理上的方法，可以测量肠道的泄漏程度以及白细胞在小鼠肠道中迁移的活体。这种方法有助于更好地了解肠道渗透性和病理性肠道炎症增加的机制。该技术可用于帮助我们理解肠道屏障功能和病理炎症背后的机制，如溃疡性结肠炎和克罗恩病。

该模型采用血管化、外化的肠道部分，无论是肠或近结肠，用于检查肠道屏障功能或小鼠免疫细胞的招募。有了这个广泛的应用，肠道循环模型可以提供洞察疾病造成的肠道屏障泄漏以及炎症反应。通过练习手术步骤可以克服斗争。

至关重要的是，要使完全血管化的肠道部分外化，并为结节选择合适的位置以避免出血。肠道循环模型是一种显微外科技术，因此，与其他外科手术一样，它从视觉演示和方法的分步演示中获益匪浅。在完成麻醉手术后，首先用酒精拭子或用70%乙醇浸泡的纱布海绵擦洗腹部中线的毛皮。

不要用酒精弄湿大面积的毛皮，以防止体温过低。用剪刀，进行中线腹腔切除术。在腹部中间做一个水平切口，并暴露腹膜，注意不要伤害腹内器官。

将预切湿棉纱布放在暴露的腹腔上。使用湿棉签来动员和外化塞库姆，并小心地将其放在湿棉纱布上。然后，动员并轻轻地将伊利姆外部化。

在湿棉纱布上部署至少六厘米的末端伊利姆，而不会中断血管和血液供应。使用温暖的 HBSS 随时保持暴露的组织湿润。识别在靠近塞库姆的中肠供应伊利姆的主要动脉。

然后，在没有关键血管的内河中找到两个连体位点。用钝组织钳牢牢抓住末期的伊利姆，并用细尖钳子来挡住肠胃，避免血管。将丝绸缝合线穿过穿孔，并系上手术结，以创建第一个结扎。

使用尺子测量距离第一个连字四厘米的地方，并创建第二个连字。用细剪刀小心地切开每个粘合处旁边，以隔离四厘米的环状环，保持血液供应和中间膜完好无损。使用连接到 10 毫升注射器的柔性黄色喂食管，使用温暖的 HBSS 轻轻冲洗卵石环段的内容。

确保将发光物冲出腹腔，保持手术部位清洁。用丝绸缝合线将冲洗的伊利尔环的两端唇裂开。使用一毫升注射器和一根30口径针头，慢慢将250微升试剂（如FITC-dextrans或切莫金）注射到肠道流明中。

虚化环会膨胀，导致粘膜的适度分散。使用针架、解剖钳和 3.0 个不可吸收的丝绸缝合线用反向切割针关闭腹壁。干燥动物以防止体温过低后，将其放入温度调节麻醉室进行孵化。

准备小鼠手术，并像以前演示的那样将腹腔外部化。使用湿棉签，将整个伊莱姆外部化，并将其放在湿棉纱布上。识别位于中子的近结肠和血液供应。

调动近体结肠，在中子克隆中没有船只的区域创建第一个连结体，距离舱位约0.5厘米。测量从第一个连体两厘米，并创建第二个连结在一个区域没有血液供应的中等体。使用细剪刀，小心地切割每个连体旁边，以隔离一个两厘米长的 pcLoop。

用温暖的 HBSS 轻轻冲洗 pcLoop，使用连接到 10 毫升注射器的柔性黄色喂食管去除粪便。确保将发光物冲出腹腔，保持手术部位清洁。然后，使用丝绸缝合线将冲洗的 pcLoop 的两端连结。

使用一毫升注射器和30米针，慢慢将200微升试剂，如FITC-德克斯特兰或切莫金，注射到肠道流明中。pcLoop 会膨胀， 导致粘膜的适度分散。使用湿棉签轻轻地将唇膏、伊利姆和塞库姆放回。

使用针架、解剖钳和 3.0 个不可吸收的丝绸缝合线用反向切割针关闭腹壁。潜伏期后，对麻醉小鼠实施安乐死，并收集组织进行分析。为了验证I环模型评估肠道渗透性的准确性，进行了FITC-dextran pcLoop检测，以评估紧结相关蛋白质Jam-a在体内肠道屏障功能调节中的作用。

与 pcLoop 模型相比，在 Jam -a 空鼠中，FITC-dextran 血清水平增加了 2.5 倍。在肠道上皮细胞上有选择性地失去Jam-a的小鼠也取得了类似的结果。pcLoop 模型用于研究多态核中性粒细胞嗜中性粒细胞（PMN），招募到肠道粘膜和随后的体内转世迁移。

pcLoop 的发光内容中的 PMN 数通过流细胞学分析进行量化。在生理条件下，近结肠部分的PMN数量很少。手术前用亲炎细胞因子、TNFα和IFN伽马进行预处理，结果在pcLoop流明中招募了更多的PMN。

PMN 化疗吸引剂 LTB4 的管理导致 PMN 计数急剧增加。结肠粘膜中PMN的免疫化学染色证实了在对细胞因子和LTB4的刺激后，PMN的招募率上升。使用 pcLoop 模型研究 Jam-a 对 PMN 转皮迁移的贡献，该模型对肠道上皮细胞上有选择性损失的 Jam-a 小鼠进行了研究。

上皮果酱的丧失导致结肠流明中移民的 PMN 数量与垃圾控制相比减少。这项技术的一个关键方面是记住在手术时保持对外化肠道段的血液供应。根据本协议，可以执行其他方法，如肠道渗透性检测和中性粒细胞转世迁移检测，以调查体内屏障完整性和肠道炎症的丧失。