一种分离和扩增人类脂肪衍生的美源性干细胞的无酶方法

该协议提供了一种简单的成本效益方法，隔离 ASC，而无需使用苛刻的酶或离心步骤，这可以改变细胞表型和行为。缺乏苛刻的步骤比那些使用酶和离心分离的细胞产生更少的操纵细胞，从而最大限度地减少了实验观察是否是分离方法的神器的问题。这种外植方法可以产生临床相关的 ASC 引入患者，以治疗各种疾病或在生活中扩展，提供研究应用。

很难用语言来解释切碎的方法。视觉演示可以给其他科学家学习分解组织本身的麻烦。类似的外植方法可用于分离其他MSC种群，如脐带组织。

要切碎无菌组织样本，请先将组织转移到无菌 100 毫米板的盖子上。然后用无菌针将一块纸巾放在位上，然后用无菌手术刀将组织切成不到一毫米的碎片。将组织转移到新鲜管中，反转或摇动样品五至六次，以确保混合所有层。

然后，用无菌铲将2.5至5毫升组织转移到100毫米真空气体等离子体处理组织培养板。通过倒入新鲜的离心管来测量样品的体积。接下来，向板中添加等效体积的组织培养介质，轻轻旋转板以混合内容。

在37摄氏度的二氧化碳中孵育，直到在板底看到足够数量的细胞。一旦在盘子上或七天后注意到足够数量的细胞，以早者为准，取出所有剩余的组织。接下来，培养组织培养培养的 ASC，直到它们达到 70% 的汇合，或者直到聚类变得密集，此时细胞将被传递。

用 1X 磷酸盐缓冲盐水轻轻冲洗板。要对粘附细胞进行增殖，吸磷酸盐缓冲盐水，将一毫升三普辛加入每个板，并辅以0.25%EDTA，并在37摄氏度下孵育5分钟。向板中添加少量介质以停用 trypsin。

然后轻轻地从板的顶部向下移液介质 trypsin，从板中失去任何弱附的细胞。要播种单元格，请先将介质添加到板中。然后，以滴点方式添加细胞，然后旋转板，以确保在板上均匀分布。

经过三个段落后，继续进行流式细胞学和分化测定。经过三次通过后，从脂藻酸盐和异丙草体样本中分离的ASC被发现具有MSC形态和表型，类似于酶消化后分离的ASC。与其他 MSC 一样，外植隔离 ASC 对 CD45 为负值，对 CD73、CD90 和 CD105 为正值。

切碎组织时，每块的表面积必须足够大，ASC 才能从组织中迁移出来。这些是可用于广泛应用的基本干细胞。隔离的 ASC 可用于任何下游应用，在体内或体外。