CD8+ T 细胞活化的各向异性聚合物人工抗原呈现细胞的制备

此方法有助于回答氨基工程领域的关键问题。例如，粒子物理特性对生物材料免疫细胞相互作用和活化的作用是什么？这种技术的主要优点是它能够独立控制仿生粒子的大小和形状。

这种技术的影响延伸到癌症的治疗，因为它是一种现成的粒子疗法，可导致体内细胞内调节的免疫反应。虽然这种方法可以提供癌症氨基治疗的见解，它也可以应用于其他系统。如，传染病或1型糖尿病。

对于微颗粒合成，首先称出100毫克聚（乳酸共糖酸）或PLGA，放入闪烁小瓶中，然后通过涡流将PLGA溶解在5毫升二氯甲烷中。将均质器放在含有 50 毫升 1%聚乙烯醇或 PVA 溶液的烧杯中，使均质器尽可能靠近烧杯底部，无需接触。以适当的速度打开均质器，并将 PLGA 溶液添加到烧杯中，实现一分钟的均质化。

在均质结束时，将聚乙烯醇 PLGA 微颗粒溶液倒入含有 100 毫升 5%PVA 溶液的烧杯中，放在化学罩中的搅拌板上，搅拌溶液至少 4 小时。当溶剂蒸发后，将颗粒溶液倒入50毫升锥形管中，通过离心收集颗粒。用20毫升去离子水更换每个管中的上流水，通过涡流重新悬浮颗粒。

然后用新鲜的去离子水将每个管中的最终体积调至50毫升，并像刚才展示的一样，再洗两次颗粒。对于纳米颗粒合成，将200毫克PLGA溶解在5毫升二氯甲烷中，并在含有50毫升1%PVA溶液的烧杯中放置一个声波探针，而不接触烧杯底部。以 12 瓦的速度开始声波化，并立即将 PLGA 溶液添加到烧杯中，进行两分钟的声波化，以生成直径约为 200 纳米的纳米粒子。

声波化后，将1%聚乙烯醇PLGA纳米颗粒溶液倒入含有100毫升5PVA溶液的烧杯中，在搅拌板上进行4小时的化学烟气罩溶剂蒸发。当所有溶剂蒸发时，将颗粒溶液倒入 50 毫升锥形管中进行离心，以去除任何微颗粒并去除中超剂。然后将纳米颗粒转移到高速离心管中，在去离子水中进行三次洗涤，如所证明的。

对于聚合物颗粒制造，在上次洗涤后，将颗粒重新悬浮在大约一毫升的新鲜去离子水中，并将薄膜铸造溶液添加到颗粒中，最终浓度为每毫升颗粒 2.5 毫克。将 10 毫升等分中的颗粒悬浮液转移到 75 乘 50 毫米矩形培养皿中，进行一维拉伸。或在15毫升等分成100由100毫米方培养皿的二维拉伸。

在化学罩中隔夜干燥后，使用钳子去除薄膜，用剪刀修剪边缘。对于 1D 拉伸，将一个薄膜的两个短边放在两块氯丁橡胶之间，用于安装在自动薄膜拉伸装置的一轴的铝块上。然后使用 Allen 扳手拧紧橡胶顶部的金属手柄，将薄膜固定到位。

对于 2D 拉伸，将所有四个边安装到四个铝块上，以在两个轴上拉伸薄膜，并在一个轴上记录铝块之间的薄膜长度，用于一个 D 拉伸或两个轴进行 2D 拉伸，并基于所需的折数拉伸计算在一个或两个方向上拉伸薄膜所需的距离。然后将装有薄膜的拉伸装置放在90摄氏度的烤箱中，放在少量水的更大烧杯旁边，使薄膜温度超过10分钟。拉伸完成后，让薄膜冷却到室温20分钟。

对于 1D 拉伸，将薄膜从边缘的拉伸设备中剪切出来。对于 2D 拉伸，剪切并保存两个轴上均匀拉伸的胶片中心方形。将薄膜放在 50 毫升锥形管中，每个管不超过两个薄膜，并将大约 25 毫升的去离子水添加到每个管中进行涡旋。

当薄膜溶解后，如所证明，在去离子水中清洗颗粒三次。上次洗涤后，将颗粒重新悬浮在大约一毫升的新鲜脱离子水中。然后在零下80摄氏度下冷冻颗粒一小时或过夜冻干。

第二天早上，在新鲜准备好的 MES 缓冲液中，以每毫升 20 毫克重新悬浮冻干的微颗粒或纳米颗粒，并进行涡旋。将 100 微升颗粒溶液添加到含有 900 微升 MES 缓冲液的聚丙烯微离心管中，并加入 100 微升新鲜准备的 EDC NHS 溶液。通过涡旋混合颗粒，并在室温下在逆变器上孵育颗粒30分钟。

在孵化结束时，通过离心收集颗粒，通过旋转或重新悬浮PBS一毫升的纳米颗粒，在2至3瓦的声波下再悬浮在PBS的一毫升中。接下来，向微粒添加8微克合适的信号一个蛋白质和10微克抗小鼠CD28抗体，或向纳米粒子添加16微克的信号一个蛋白质和20微克的抗小鼠CD28。使用 PBS 将每个管中的最终体积达到 1.1 毫升，并在 4 摄氏度的逆变器上孵育颗粒。

第二天，在去离子水中洗三次颗粒，如证明。这些PLGA纳米和微粒是使用单一乳液技术合成的，使用传输和扫描电子显微镜进行演示和成像。均质化后，微粒的平均直径约为3微米。

球面微粒子的纵横比例约为1，而1D拉伸前向椭圆粒子的纵横比较大约3个半，2D拉伸椭圆粒子的纵横比约为1.2，大致维持1的纵横比。结合效率结果揭示了球面和椭圆形微人造抗原呈现细胞（AAPC和纳米-AAPC）表面的蛋白质含量相似，表明AAPC合成过程中蛋白质耦合以浓度依赖的方式发生。发现蛋白酸椭圆形AAPLC在亚饱和剂量下诱导比球形AAP高浓度T细胞增殖，在01毫克剂量下达到最佳分离。

七天后，对T细胞的人工计数显示，与微和纳米尺度的球形细胞相比，蛋白酸酯AAPC以剂量依赖的方式更有效地刺激T细胞。按照这个程序，AAPC可以在体内进行管理，以测量其疗效和药代动力学。该技术开发后，为免疫工程领域的研究人员探索各向异性对AAPC疗效的影响铺平了道路。