测试基因改造食物

1.从食品样品中 DNA 提取

1. 每个使用转让吸管或 200 1,000 µ L 可调音量微管吸吮 2 螺旋帽管添加 500 µ L 的购买 PCR 混合矩阵。与之间每个分装均匀混合的 PCR 矩阵吸管吸管向上和向下。
2. 标签一螺旋帽管"非转基因"和其他"测试"。
3. 称出 0.5 g 认证的非转基因食品，放入砂浆。
4. 添加 2.5 毫升的蒸馏水和磨碎用杵 2 分钟，形成浆料。
5. 添加另一个 2.5 毫升的蒸馏水和继续用杵研磨，直到浆变得不够平滑，吸管。
6. 吸管 50 µ L 地面泥浆对螺旋帽筒内装 500 µ L PCR 预混料的标记为"非转基因"使用 50 µ L 标记上毕业的吸管。回顾一下管。
7. 重复步骤 1.3-1.6 准备测试食品样品。
8. 吸管 50 µ L 地面测试食品泥浆对螺旋帽管的标记为"测试"。回顾一下管。
9. 涡非转基因食品和试验食品 PCR 管 1 分钟和地方管在 95 ° C 水浴 5 分钟。如果没有涡是可用的几次轻弹管混合前放置在水浴中。
10. 将管放在离心机为 5 分钟。固体颗粒应形成底部的管。如果 5 分钟后，再一次为 2 分钟的时间间隔，直到颗粒形成离心机不形成颗粒。
11. 可以立即用于 PCR 管，或存于冰箱 1 周。

2.设置 PCR 反应

1. 数字 PCR 管 1 — — 6 和最初的他们。数字应对应于表 1中列出的以下管内容。
2. 将每个标记的 PCR 管放置在带盖打开的微细管持有人。
3. 为每个添加使用新鲜的提示，添加 20 微升向每个 PCR 管表示对表 1的底漆。帽管。
4. 每个管使用新鲜的提示，添加 20 微升的向每个 PCR 管，一定要只从上清液吸管和避免固体颗粒在管底部表示对表 1的 DNA 样本。
5. 每个 DNA 样本吸取到相应的 PCR 管后，用移液管 DNA 和底漆用枪吹打混轻轻向上和向下;回顾一下管。
6. PCR 管置于热循环中，程序的循环:
   初始的变性: 1 周期在 94 ° C 为 2 分钟。
   放大: 40 周期在 94 ° C 1 分钟 （变性），59 ° C （退火），1 分钟和 2 分钟 （扩展） 72 ° C。
   最后一次延长: 1 周期为 10 分钟，72 ℃。
   举行: 4 ° C 无限期。

3.3%琼脂糖凝胶制备

1. 使用实验室或美纹胶带、 安全地开放端粒胶盘磁带。确保磁带密封的纸盒，防止熔琼脂糖中漏出来的边缘。
2. 称出 3g 的琼脂糖凝胶成 250 毫升或更大的锥形瓶。
3. 添加 1 x TAE 缓冲区 （购买或准备从精矿） 100 毫升。
4. 磁热板用搅拌棒，加热烧杯，直到琼脂糖完全溶解在缓冲区中，解决方案把水煮沸，得一清二楚。或者，将烧杯放在烤箱和加热 30 s 间隔，用搅拌棒拌每 10 s，重复，直到沸腾混合物和轮流明确可以使用一台微波炉。
5. 转化成 250 毫升瓶作为回流，防止琼脂溶液蒸发开幕 50 毫升锥形瓶。
6. 允许琼脂溶液冷却到 60 ° C，并倒入每个录音的胶盘 30-50 毫升。
7. 将凝胶梳子放入凹槽打造凝胶井的第一双。
8. 允许凝胶完全冷却前删除磁带和梳子。凝胶将巩固和从明确转阴天时准备好，大约 10-20 分钟。

4.的 PCR 产物电泳

1. 放置在一个凝胶托盘上的预制的 3%琼脂糖凝胶或用已被用于铸造浇的 3%琼脂糖凝胶电泳凝胶托盘。
2. 凝胶托架滑入电泳室井接近阴极 （黑色） 结束。
3. 倒入分庭，足够有 2 毫米的缓冲胶盘上方 1 x TAE 缓冲区。
4. PCR 管得到的热循环和微管的持有人的地方。
5. 每次使用新鲜针提示，添加的加载染料 (LD) 对每个样本的购买橙 G 10 微升，拌匀。
6. 负荷 20 微升的分子量标尺和每个样品到顺序凝胶 20 微升表示 (表 2)。
7. 在 100 V 运行 30 分钟凝胶电泳。
8. 从分庭和幻灯片的凝胶，从纸盒中取出删除凝胶托盘。将凝胶放在染色的托盘。
9. 沉浸在购买 DNA 凝胶染色为 5 分钟，仔细地震动盘帮助分发整个凝胶染色的凝胶。
10. 将凝胶转移到清洗容器和冲洗用自来水 (40-55 ° C) 为大约 10 s。
11. 为获得最佳效果下轻轻摇动每 6 分钟的温暖自来水中洗 3 x destain。如有必要，继续脱色在温暖的水中，直到达到所需的对比度。

管数	底漆	Dna 样本
1	20 微升植物底漆 （绿色）	20 微升非转基因食品控制 DNA
2	20 微升转基因底漆 （红色）	20 微升非转基因食品控制 DNA
3	20 微升植物底漆 （绿色）	20 微升测试食品 DNA
4	20 微升转基因底漆 （红色）	20 微升测试食品 DNA
5	20 微升植物底漆 （绿色）	20 微升转基因阳性对照 DNA
6	20 微升转基因底漆 （红色）	20 微升转基因阳性对照 DNA

表 1。列表中的适当管数字、 引物和 DNA 样本。

1 井	样本 1 非转基因食品控制与植物引 20 微升。
2 井	样本 2 非转基因食品控制与转基因引 20 微升。
3 井	样本 3 测试食物与植物引 20 微升。
4 井	示例 4 测试食品与转基因引 20 微升。
5 井	示例 5 转基因阳性 DNA 与植物引 20 微升。
6 井	示例 6 转基因阳性 DNA 与转基因引 20 微升。
7 井	聚合酶链反应分子量标尺 20 微升。
8 井	请留空。

表 2。适当的顺序加载到凝胶 20 微升的分子量标尺和每个样本的 20 微升。