تستخدم هذه الدراسة QPCR على الغشاء المخاطي في المعدة للكشف بسرعة عن هيليكوباكتر بيلوري ومقاومته للمضادات الحيوية ، مما يوفر أداة تشخيصية سريعة ودقيقة ذات أهمية سريرية كبيرة لعلاج هذه العدوى. من الأهمية بمكان ضمان معايير تباين الجودة ل QPCR. وبالتالي ، فإن IC QPCR للكشف عن هيليكوباكتر بيلوري وفقا لمعايير محددة ، ويجب استيفاء كل شرط بشكل متزامن.
الانحراف المبكر يبطل اختبار يتطلب إعادة التشغيل. نحن بحاجة إلى أداة تشخيصية قوية وشاملة للكشف عن هيليكوباكتر بيلوري ومقاومة الأدوية. نستخدم الغشاء المخاطي في المعدة QPCR.
نحن نستخدم بادئات محددة لهذا الغرض. نعتقد أن الدراسات المستقبلية مع مجموعات أكبر من المرضى ستتحقق من صحة الإمكانات الكاملة للغشاء المخاطي في المعدة وتحقق ، مما يعزز تشخيص هيليكوباكتر بيلوري ومراقبته وعلاجه. للبدء ، افتح صمام مشبك الخزعة وانقله ببطء إلى اليد المهيمنة.
عندما يكون رأس الملقط في مجال الرؤية ، افتح رفرف المشبك وقم بمعالجة المنظار عند الغشاء المخاطي للمعدة في موقع أخذ العينات. استخدم ضغطا طفيفا وأغلق ملقط الخزعة لتثبيت أنسجة الغشاء المخاطي في المعدة. باستخدام الكماشة ، استخرج عينات الأنسجة وضعها في أنبوب أخذ العينات الذي يحتوي على سائل الحفظ.
بمجرد أخذ عينات من جميع المواقع ، شد غطاء أنبوب أخذ العينات وأغلقه لمنع الجفاف. قم بتسمية الأنابيب برقم تعريف فريد من الخارج. أرسل العينات التي تم جمعها للاختبار في أسرع وقت ممكن ، مع تجنب التخزين.
اضبط درجة حرارة الحمام المعدني على 100 درجة مئوية مقدما. إذا تم تجميد العينة ، فقم بإزالتها واتركها تصل إلى درجة حرارة الغرفة. امزج المحللة جيدا لتعليق راتنج حمض أمينودياسيتيك.
خذ 100 ميكرولتر من المحللة في أنبوب طرد مركزي مع عنصر مرشح ، وأضف الغشاء المخاطي في المعدة. امزج المحتويات باستخدام تذبذب دوامة. ضع أنبوب الطرد المركزي في الحمام المعدني على حرارة 100 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
بعد التسخين ، قم بإزالة الأنبوب واتركه يبرد إلى درجة حرارة الغرفة. قم بالطرد المركزي للعينة عند 9 ، 500G لمدة خمس إلى 10 دقائق ، وانقل المادة الطافية بعناية إلى أنبوب طرد مركزي آخر معقم مسمى. إذا لم تنتقل إلى الخطوة التالية على الفور ، فقم بتخزين العينة مؤقتا عند أربع درجات مئوية.
قم بإزالة مسبار التمهيدي ومحلول الإنزيم المختلط ومخزن الكشف من المجموعة. قم بإذابة جميع المكونات على الجليد ، أو عند درجتين إلى ثماني درجات مئوية. لخلط العينات ، قم بهزها برفق وقم بإجراء طرد مركزي قصير بسرعة منخفضة.
امزج 12.5 ميكرولتر من المخزن المؤقت للكشف ، وسبعة ميكرولتر من المسبار التمهيدي ، و 0.5 ميكرولتر من محلول الإنزيم. امزج المحتويات في الأنبوب وقم بالطرد المركزي لفترة وجيزة. قم بتوزيع 20 ميكرولترا من محلول تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل وأضف خمسة ميكرولترات من الحمض النووي إلى كل تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل جيدا.
أدخل أنبوب التفاعل في جهاز التدوير الحراري PCR الفلوري. قم بتعيين معلمات الدورة وتشغيل البرنامج. اجمع إشارات التألق عند 58 درجة مئوية للعلامات المطلوبة.
بعد التفاعل ، احفظ البيانات وقم بتحليلها باستخدام برنامج QPCR محدد. أكدت فحوصات QPCR وجود هيليكوباكتر بيلوري في العينات A و B و C و E ، بينما كانت العينة F سلبية. كانت العينة أ عرضة لكلا المضادات الحيوية.
أظهرت العينة B مقاومة لكل من كلاريثرومايسين والليفوفلوكساسين. أظهرت العينة C مقاومة للكلاريثرومايسين ، لكنها لا تزال عرضة لليفوفلوكساسين. كانت العينة E مقاومة لليفوفلوكساسين ، ولكنها عرضة للكلاريثرومايسين.
