طرق دراسة مساهمات الرحم في تأسيس الحمل في نموذج فأر استئصال المبيض

لذلك من الصعب فصل دور التأثيرات الهرمونية للرحم والمبيض على مؤسسة الحمل لأن كلاهما مرتبط ارتباطا وثيقا. لذلك يسمح لنا هذا البروتوكول بفحص مساهمات الرحم مباشرة. في حين أن بعض هذه التقنيات مثل استئصال المبيض غازية للغاية ، إلا أنها بسيطة نسبيا في الأداء بعد الممارسة والتدريب ، مما يجعلها مناسبة للباحثين الجدد في نماذج الفئران.

لذلك يمكن استخدام هذه الطريقة لفهم التنظيم الأوسع لمحور HPG حيث يلعب كل من المبيضين والرحم دورا مهما في تنظيم هذا المحور. إذا لم تكن قد أجريت هذه التقنيات من قبل ، فاستشر الفريق البيطري في معهدك للتدريب والدعم. للبدء ، ضع مادة تشحيم العين بسخاء على فأر مخدر عن طريق وضعه برفق على العين بعد حلق منطقة صغيرة عند الانبعاج أسفل حدس العمود الفقري.

حقن 0.1 ملليلتر من كاربروفين تحت الجلد في قشرة الرقبة. اختبر ما إذا كان الحيوان قد تم تخديره عن طريق الضغط على إصبع قدمه الخلفي والتحقق من وجود رد فعل. بعد ذلك ، ضع Betadine على موقع الجراحة.

ثم قم بتغطيتها بستارة جراحية. باستخدام ملقط ذو أسنان الفئران ، اسحب الجلد بعيدا عند الحدس لأعلى ، وقم بعمل شق طولي بخمسة ملليمترات. ثم ، باستخدام ملقط حاد ، قم بتشريح الجلد بعيدا عن طبقة العضلات الأساسية وصولا إلى جانب واحد باتجاه الكلى.

تحديد وسادة الدهون في الكلى والمبيض والمبيض من خلال جدار العضلات. الاستيلاء على ورفع طبقة العضلات مع ملقط. ثم ، باستخدام المقص ، قم بعمل شق بطول 0.5 إلى سنتيمتر واحد ، واسحب وسادة المبيض من خلال الشق باستخدام زوج من الملقط الحاد.

بعد ذلك ، باستخدام حامل إبرة منحني ، قم بتثبيت أسفل المبيض وقناة البيض في الطرف البعيد من قرن الرحم واستئصال المبيض بالمقص. بعد 30 ثانية ، قم بإزالة المشبك وربت بشاش معقم. لإغلاق شق جدار العضلات ، ارفع الجزء العلوي من الشق باستخدام الملقط.

ثم اربط الشق بعقدة الجراح باستخدام خيوط الحرير. ضع موضعيا بضع قطرات من بوبيفاكايين باستخدام حقنة سعة ملليلتر واحد بدون ملحق إبرة ، وربت الفائض بشاش معقم. بعد إجراء استئصال المبيض بالمثل على الجانب الآخر ، أغلق شق الجلد عن طريق الضغط على جانبي الجلد معا وتطبيق بضع مشابك جراحية بطول سبعة ملليمترات ، مما يترك مجالا لتورم الجرح.

ضع جميع المعدات المطلوبة على ورق القصدير داخل غطاء التدفق الصفحي أو غطاء السلامة البيولوجية من الفئة الثانية وتعقيم الأشعة فوق البنفسجية لمدة 20 دقيقة. اغسل أنبوب السيلاستيك في ديزينول 100٪ واتركه يجف في الهواء داخل الغطاء. بمجرد أن يجف ، اقطع الأنبوب إلى شرائح طولها سنتيمتر واحد باستخدام مشرط.

بعد ذلك ، قم بضغط ما يقرب من 200 ميكرولتر من المادة المانعة للتسرب في حقنة بدون مكبس. استبدل المكبس وادفع كمية صغيرة من مانع التسرب. ضع المادة المانعة للتسرب على أحد طرفي الأنبوب ، وقم بتنعيمها بإصبع قفاز.

واترك المادة المانعة للتسرب تجف طوال الليل أو تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة في الغطاء. بعد ذلك ، صب مسحوق البروجسترون في طبق بتري معقم. اغرف المسحوق في كريات بمساعدة ملقط.

اضغط على الطرف المختوم للحبيبات أسفل سطح غطاء المحرك لتكثيف المسحوق. ثم ختم الطرف المفتوح مع مانع التسرب. لف طبق بتري الذي يحتوي على الكريات بورق القصدير لحمايتها من الضوء.

قبل حوالي 72 ساعة من الإدخال تحت الجلد ، قم بتنشيط الكريات عن طريق احتضانها في FCS المجرد من الفحم. ومن بين المبادرين إلى هذا الإجراء، الدكتورة فيونا كوزينز، عالمة أبحاث مهنية مبكرة من معهد هدسون للبحوث الطبية. بعد هرمون فتيلة الحيوانات مع حقن استراديول تحت الجلد ، قم بتجهيز الحيوانات بكريات البروجسترون تحت الجلد قبل يومين من إزالة الترسيب الاصطناعي.

قبل الجراحة ، قم بتخدير الماوس واختبار عمق التخدير عن طريق التحقق من منعكس قرصة إصبع القدم. ثم ضع الماوس في وضعية الانبطاح ، وارفع ذيله وأدخل ببطء منظارا يبلغ طوله ستة ملليمترات في مهبله. ضع الجزء السفلي من جسم الماوس بين أول إصبعين من اليد غير المهيمنة.

ثم ، باستخدام السبابة ، ادفعي الذيل برفق لأعلى للسماح بإمكانية الوصول المهبلي بشكل أفضل. نقل 20 ميكرولتر من زيت السمسم إلى طرف نقل الأجنة غير الجراحي ، وإدخال الطرف من خلال المهبل وعنق الرحم في قرن الرحم. طرد النفط ببطء.

بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بإزالة المنظار من المهبل. في هذه الدراسة ، خضع 80٪ من الفئران لعملية إزالة الترسبات الناجحة ، بينما لم يخضع 20٪ لها. لذلك من المهم الحفاظ على جميع المعدات الجراحية ومناطق العمل معقمة واستقبال المرضى عند إدخال جهاز مضادات الالتهاب غير الستيروئيدية من خلال عنق الرحم في قرن الرحم للفأر.

بعد إحداث إزالة الترسيب الاصطناعي ، يمكن إزالة حنك البروجسترون لتقليد الحيض ودراسة انهيار بطانة الرحم. باستخدام هذه الطريقة ، يمكننا دراسة بيولوجيا الرحم وتنظيمه بشكل مستقل عن تأثير المبايض. هذا مثير حقا في مجال الخصوبة وصحة المرأة بشكل عام.