A Syngeneic العظام العظام سبراغ داولي نموذج الفئران مع بتر للسيطرة على معدل الانبثاث

زرع خلايا هشاشة العظام داخل البيئة الدقيقة الساق يعزز الانبثاث الرئة. يمكن أن يكون هذا النموذج مفيدا أيضا لدراسة آليات الانبثاث الرئوي أو علاجات السرطان الجديدة التي تتطلب جهازا مناعيا سليما. بمجرد أن يتم تأسيس الورم ، يكون البتر ضروريا للتحكم في معدل الانبثاث في دراسات البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل.

نحن نستخدم الحقن الوداجية للسماح بتصور تسليم المخدرات عن طريق الوريد. حقن الوريد الوداجي مفيد للعديد من نماذج الأمراض الأخرى التي يتطلب تسليم الدواء الدقيق. لقد استخدمنا هذه الطريقة لتقديم الجسيمات النانوية واللويغانات ذات اللوبيلات المشعة للتصوير في الجسم الحي.

ننصح المستخدمين الجدد بممارسة إزالة أحد الأطراف من خمسة إلى عشرة فئران قتل رحيم قبل محاولة إجراء تجربة لإتقان آليات بتر الأطراف دون فقدان الدم. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لرد الفعل القضيب، وتأمين الفئران تخدير في nosecone على وسادة حرارة الإعداد منخفضة الحرارة في موقف ضعيف. إزالة الشعر على الساق اليمنى، حتى البطن وأسفل الظهر.

استخدام الشاش أو رذاذ لتطهير المنطقة الجراحية مع 70٪ الإيثانول ومطهر المخفف المناسب وتطبيق مرهم على عيون الحيوان. باستخدام حركة تشبه الحفر لإجراء فتحة ، أدخل إبرة عيار 22 معلمة 10 ملليمترات من الطرف 10 ملليمترات في ديافيس من الساق في منتصف الهضبة الظنبوبية ، وتمديد الإبرة من خلال الميتافيزيقي إلى الانبثاث. بعد إزالة الإبرة، اخلط بلطف تعليق الخلية السرطانية ذات الأهمية للحصول على تعليق خلية متجانسة، وتحميل 7.5 × 10 إلى الرابع من الخلايا في 20 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في حقنة هاملتون.

ضع علامة على حقنة هاملتون بخلايا على بعد 10 ملليمترات من طرف الإبرة وأدخل الإبرة إلى علامة 10 ملليمترات في الحفرة التي صنعتها إبرة قياس 22. ثم تصريف بلطف حجم كامل من الخلايا في تجويف النخاع، ووضع الفئران في قفص على لوحة التدفئة مع الرصد حتى شغل كامل. بالنسبة لإدارة الدوكسوروبيسين عن طريق الوريد ، بعد تأكيد التخدير ، استخدم التشريح الدقيق لتصور الوريد الوداجي الأيمن أو الأيسر ، وأدخل الإبرة في أنسجة العضلات المفرطة.

توجيه الإبرة نحو الرأس في تجويف الوريد الوداجي، كما هو تصور في الوريد الوداجي الأمامي إلى العضلات الصدرية، ورسم حجم صغير من الدم في طرف إبرة لتأكيد الإدراج دقيقة. عندما تكون الإبرة في مكانها، قم بحقن 100 إلى 150 ميكرولتر ببطء من مليغرامين لكل كيلوغرام من الدوكسوروبيسين على مدى دقيقة واحدة. يجب أن يكون المحلول مرئيا داخل الوريد أثناء الولادة.

عندما يتم تسليم كل من الحل، استخدم الشاش العقيم لتطبيق ضغط لطيف على الوريد، واستخدام ثلاثة إلى أربعة مقاطع الجرح لإغلاق الشق. بعد تأكيد التخدير، قم بإزالة الشعر على الساق اليمنى، حتى البطن وأسفل البطن الظهري، ووضع الجرذ في وضع السطان على وسادة التدفئة. فرك الجلد من منتصف العجل إلى أعلى مفصل الورك من أسفل البطن الأيمن كما هو موضح وتطبيق مرهم على عيون الحيوان.

باستخدام قفازات وأدوات معقمة، اسحب الساق من خلال تنفيس الستائر الجراحية العقيمة واصنع شقا جلديا محيطيا قريب فقط من الخنق. قفاز الطرف الخلفي لفضح الشريان الفخذي والوريد على سطح البطن الوسطي من الطرف الخلفي، واستخدام الغرز 4-0 القابلة للامتصاص للتقاضي الأوعية على مستوى منتصف الفخذ وعبر استئصال distally. المشبك الوريد distally للحد من التسرب أثناء تشريح العضلات واستخدام تشريح حادة لاختطاف مفصل الورك مع تناوب خارجي الجانبية.

حدد موقع رئيس عظم الفخذ وافكه عن الأسيتابولوم، وأزل أي نسيج متبقي، مع الحفاظ على ربط الساق بالجسم. إدارة كتلة دفقة إلى الأسيتابولوم والعصب الوركي مع ما يقرب من ستة ملليغرام لكل كيلوغرام من ropivacaine، واستخدام خياطة بسيطة توقف 4-0 قابلة للامتصاص لإغلاق العضلات على الأسيتابولوم. ثم استخدم قصاصات الجرح الموضوعة من 5 إلى 10 ملليمترات لإغلاق حواف الجلد.

يسمح التصوير بالأشعة السينية لمراقبة الورم بتأكيد غزو ورم العظام ويمكن إجراؤه على أطراف مبتورة أو ثابتة مؤخرا. يسمح التصوير بالأشعة السينية أيضا بتقييم المورفولوجيا الإشعاعية للرئتين مع أو بدون الانبثاث ، مما يوفر طريقة سريعة وسهلة لتحديد الحاجة إلى القتل الرحيم لمنع الوفيات العفوية غير الضرورية. في سرطان العظام الفئران، يمكن تأكيد كل من مورفولوجيا الورم العظمي والعظام عن طريق علم الأنسجة من الطرف المبتور.

لاحظ أن العظم القشري غائب في هذا المثال وأن العظام المجاورة قد تم استبدالها أو محصنة بعظم منسوج جديد موجه عموديا إلى العمود الحالي للقشرة. ويمكن أيضا أن يتم تحديد جزر من osteoids غير ناضجة داخل الورم. في هذه الصور ، يمكن ملاحظة مورفولوجيا المجهرية من الانبثاث الرئة التمثيلية ، وبعضها مع العظام المعدنية والورم الاوعية الدموية emboli.

يمكن أن يكشف التأصل المناعي لأورام هشاشة العظام الأولية عن تسلل الأورام من قبل مجموعات الخلايا المناعية ، مثل الضامة الإيجابية CD68 أو الخلايا التائية الإيجابية CD3. يمكن استخدام النشاف الغربي لليسات بروتين الخلايا السرطانية لتحديد التعبير عن كيناسي البروتين، مستقبلات كيناز البروتين، وغيرها من البروتينات التي تتفاعل مع هذه المسارات. لزرع الظنبوب، بمجرد إجراء أول ثقب تيبي، والاستمرار في عقد الساق في يدك غير المهيمنة في نفس الزاوية للحفاظ على الجلد وثقوب العظام اصطف لجعل إدراج إبرة هاملتون أسهل.

للحقن الوداجي، أدخل الإبرة في العضلات، ولكن لا زاوية الإبرة كثيرا لتجنب فقدان الوريد. للبتر، وممارسة التفكك على الفئران القتل الرحيم أولا.