تراكم وتوزيع البلاستيك الدقيق الفلوري في مراحل الحياة المبكرة من حمار وحشي. مقدمة. التراكم الحيوي للبلاستيك الدقيق تلعب دورا رئيسيا في آثارها السامة. ومع ذلك ، كجسيمات ، فإن تراكمها الحيوي يختلف عن العديد من الملوثات الأخرى.
الموصوفة هنا هو طريقة مجدية لتحديد بصريا تراكم وتوزيع البلاستيك الدقيق في أجنة حمار وحشي أو اليرقات باستخدام البلاستيك الدقيق الفلورسنت. وقد أجريت التجارب وفقا للمبدأ التوجيهي الوطني للمختبر بشأن الحيوانات لأغراض الاستعراض الأخلاقي لرعاية الحيوان. واحد، جمع الأجنة.
نشأت سمك الحمار الوحشي الكبار من مركز موارد حمار وحشي الصين. يتم الحفاظ على الأسماك في خزانات الزجاج سعة 20 لتر مع إعادة تدوير الفحم تصفية نظام مياه الصنبور في درجة حرارة ثابتة، وهي، 28 درجة مئوية، على photoperiod من 14 و 10 ساعة، والضوء: الظلام. يتم تغذية الأسماك مرتين يوميا مع أرتيميا ناوبلي.
من المستحسن أن يتم إعطاء الطعام بحد أقصى 3٪ وزن السمك يوميا، وينبغي أن تؤكل في غضون خمس دقائق في كل مرة. يتم نقل سمك الحمار الوحشي الكبار متطورة في خزان التفريخ بنسبة ذكر واحد إلى اثنين من الإناث في الليلة السابقة للتكاثر. في صباح اليوم التالي، تبدأ الأسماك في التفريخ بعد بداية دورة الضوء.
يتم جمع البيض باستخدام ماصة باستور، وشطف مع محلول هانك 10٪ عدة مرات، ومن ثم فحص للإخصاب باستخدام المجهر. تخضع البويضات المخصبة لفترة الانقسام بعد ما يقرب من ساعتين بعد الإخصاب ويمكن تحديدها بوضوح. يتم احتضان الأجنة المخصبة في كوب 500 ملليلتر يحتوي على 200 ملليلتر من محلول هانك بنسبة 10٪ مع 1٪ أزرق الميثيلين للتطهير عند 28 درجة مئوية.
معدل التحميل لا يتجاوز جنين واحد في كل حل 2 ملليلتر. اثنين، وإعداد تعليق البلاستيك الدقيق. يتم سونيكاتيد محلول المخزون من حبات البوليسترين الخضراء المسماة بالفلورسنت بقطر اسمي يبلغ 500 نانومتر لمدة 10 دقائق.
تمييع محلول المخزون مع حل هانك 10٪ لإنتاج حلول التعرض المطلوبة، وهي 0.1، 1، و 10 ملليغرام للتر الواحد. يتم إعداد حلول التعرض للبلاستيك الدقيق دائما طازجة قبل التعرض. ثالثا، التعرض للبلاستيك الدقيق.
يتم اختيار ستة أجنة مخصبة حديثا بشكل عشوائي ، ثم يتم نقلها إلى كل بئر من ستة أطباق تحتوي على خمسة ملليلتر من المحاليل البلاستيكية الدقيقة بتركيزات مختلفة. يتم تضمين مجموعات التحكم التي تحتوي على حل هانك 10٪. وتستخدم الآبار ثلاثية الليكات، التي تضم ما مجموعه 18 جنينا، في كل علاج.
يتم احتضان الأجنة تحت نفس دورة الضوء الداكن ودرجة الحرارة مثل البالغين ، ويتم ملاحظتها كل 12 ساعة. الموتى يتم إزالتهم فورا يتم تجديد حلول البلاستيك الدقيق بنسبة 90٪ كل 24 ساعة.
وخلال فترة التعرض، لا يتم إطعام الأسماك. بشكل عام، يبدأ فقس الجنين في 48 ساعة بعد الإخصاب ويكمل في حوالي 72 ساعة بعد الإخصاب. أربعة، تقييم توزيع البلاستيك الدقيق.
في 24-48-72-96-و 120 ساعة بعد الإخصاب ، يتم اختيار الأجنة واليرقات ، واحدة من كل من التكرارات الثلاثة ، بشكل عشوائي وشطفها بمحلول هانك بنسبة 10٪. يتم ترتيب الأجنة واليرقات وإعدادها للمراقبة. قبل ذلك ، يتم نقل اليرقات إلى طبق بيتري ، وتتعرض ل 0.016٪ tricaine للتخدير.
لوحظت السمكة مع مضان مجهر, وصورت مع تصوير برنامج. يتم قياس كثافة الفلورسينس في الأسماك بشكل أكبر مع ImageJ NIH. النتائج التمثيلية.
ويظهر في النتائج أن البلاستيك الدقيق يمكن أن يتراكم بيولوجيا في أجنة ويرقات حمار وحشي بطريقة تعتمد على التركيز. قبل الفقس ، تم العثور على مضان قوي حول المشيمة الجنينية ؛ بينما في يرقات أسماك الحمار الوحشي ، يعد كيس الصفار ، والتمور ، والجهاز الهضمي المواقع الرئيسية المتراكمة للبلاستيك الدقيق. مناقشة. وستؤدي هذه النتيجة إلى تعزيز فهمنا لسمية البلاستيك الدقيق للأسماك، ويمكن تعميم الطريقة الموصوفة هنا لتحديد تراكم وتوزيع أنواع أخرى من المواد الفلورية في مراحل الحياة المبكرة لسمك الحمار الوحشي.
وبما أن الكوريون سيكون بمثابة حاجز فعال ضد الجسيمات ذات الحجم الكبير ، فقد تكون هناك حاجة إلى عملية إزالة المشيمة قبل التعرض. ومع ذلك ، ينصح أكثر الجنين مع المشيمة سليمة لتقييم السمية البيئية للملوثات عند النظر في حالة التعرض في العالم الحقيقي. سلوك البلاستيك الدقيق في الحل أمر بالغ الأهمية للتوافر البيولوجي كذلك.
وينبغي تتبع الخصائص الفيزيائية الكيميائية للبلاستيك الدقيق على مدى فترة التعرض.
