يصف هذا البروتوكول جميع الخطوات الرئيسية لإنشاء نموذج زرع الكلى التلقائي في العظام المسامية بنجاح باستخدام وقت الحفاظ على الأعضاء لمدة 24 ساعة والرصد عن بعد التشغيل. والميزة الرئيسية لهذا النموذج الحيواني الكبير لصناعة السيارات على دراسات الزرع في الجسم السابق على نماذج الحيوانات الصغيرة هي التشريحية الجراحية وأوجه التشابه الفيزيولوجية المرضية مع الإعداد السريري. سيقوم فريقنا في المستشفى الجامعي RWTH Aachen بإظهار الإجراءات.
بعد التأكد من المستوى المناسب من التخوم في خنزير أنثى أنثى بالغة صامية بين عشية وضحاها ، قم بعمل شق من ثلاثة إلى خمسة سنتيمترات في الفخذ وتشريح الشريان الفخذي بطريقة 360 درجة. استخدم مشرطًا رقم 11 لإجراء عملية استئصال الشرايين وإدخال مستشعر الشرايين لجهاز القياس عن بعد. بعد جعل الحقيبة تحت الجلد في الجناح الأيسر، نفق جهاز الإرسال والاستقبال عن بعد في الجناح وإصلاح جهاز الإرسال والاستقبال إلى اللفافة العضلات مع خياطة عقدة واحدة 3-O البولي بروبلين.
المقبل، وجعل اثنين من شقوق صغيرة على الجانب الأيسر والأيمين من الصدر ونفق أقطاب ECG الأحمر والأبيض إلى موقعها المعين. عندما يتم تأمين الأقطاب الكهربائية، ابدأ تسجيل بيانات القياس عن بعد. عند الحصول على إشارة مستقرة، إغلاق شق الفخذ مع الغرز ورذاذ فيلم خلع الملابس ووضع سترة porcine الحجم مناسبة على الحيوان.
بعد 14 يومًا من الجراحة الأولى ، قم بعمل شق من أربعة إلى خمسة سنتيمترات في الأخدود الوداجي على الجانب الأيمن من الحيوان المُخدَّر وتشريح الأنسجة تحت الجلد والعضلات لفضح الوريد المشعوذ. استخدم مقدمة ورقة قشر بعيدا أو طريقة Seldinger لإدخال القسطرة الوداجي. تأمين القسطرة مع خياطة البولي بروبلين 5-0 وإغلاق شق في طبقتين.
بعد التطهير الجراحي واللف العقيم، قم بإجراء عملية جراحية متوسطة لفتح البطن واستخدام مُناع البطن القياسي لفضح المجال الجراحي. فتح طبقة الصفاق واستخدام الكيكر، ملقط ثنائي القطب، ومقص غرامة لتشريح الكلى اليسرى والكالب من أي الأنسجة الملتصجة. ثم استخدم خياطة بوليجلاكتين 3-0 ل ligate وتقسيم الحالب الأيسر على الأقل 10 سنتيمترات إلى الكلى.
لاسترداد الكلى غير المشروع، استخدم المشابك الوعائية لإغلاق الشريان الكلوي والوريد بالقرب من الشريان الأورطي و vena cava. وقطع السفن فوق المحار. ثم تعطي الكلى لفريق الطاولة الخلفية لإعداد إضافية واستخدام خياطة البولي بروبلين 5-0 لإغلاق جذع الشريان الكلوي والوريد الكلوي.
مباشرة بعد استرجاع, استخدام معيار 14 قياس قسطرة الطرفية ل cannulate الشريان الكلوي وتدفق الكلى مع ما لا يقل عن 500 ملليلتر من الجليد الباردة الجهاز الحفاظ على الحل. بعد تدفق، التفاف الكسب غير المشروع في أكياس الأعضاء العقيمة لتخزين في حل الحفاظ على الجهاز مع وقت نقص تروية الباردة المستهدفة من 24 ساعة في أربع درجات مئوية باستخدام دائرة التبريد الكمبيوتر تسيطر عليها. قبل دقيقتين إلى خمس دقائق من لقط الأوعية الدموية، تحقن عن طريق الوريد 100 وحدة دولية لكل كيلوغرام من الهيبارين الناتيوم، ثم تزيل بعد ذلك الكلى اليمنى المقابلة كما هو موضح وإعادة فتح استئصال البطن المتوسط.
قبل دقيقتين إلى خمس دقائق من لقط الأوعية الدموية، وحقن الوريدي 100 وحدة دولية لكل كيلوغرام من الهيبارين الناتيوم وإزالة بعد ذلك الكلى اليمنى المقابلة كما هو موضح. ضع الكلى المحفوظة في المجال الجراحي وابدأ في إدارة 0.1 إلى 1 ميكروغرام لكل كيلوغرام في الدقيقة من النورادرينالين كضخ مستمر باستخدام متوسط ضغط الدم الشرياني ومعدل ضربات القلب لمراقبة الكفاءة. لالاستئصال من نهاية إلى نهاية من الوريد الكلوي، واستخدام 5-0 البولي بروبلين لوضع اثنين من غرز الزاوية وخياطة الجدار الخلفي بطريقة مستمرة.
بعد الانتهاء من الجدار الخلفي، استخدم أحد طرفي غرزة الزاوية القحفية لخياطة الجدار الأمامي في اتجاه القحف وطرد الوريد مع وحدة دولية 100 لكل ملليلتر من محلول ملحي Heparinized. لالعظم من نهاية إلى نهاية من الشريان الكلوي، واستخدام 6-0 البولي بروبلين غرزة الزاوية القحفية قبل استخدام تقنية المظلة لخياطة الجدار الخلفي بطريقة مستمرة كما هو موضح. خياطة الجدار الأمامي مع الطرف الآخر من خياطة البولي بروبلين مزدوجة المسلحة 6-0 وتدفق الشريان مع 100 وحدة دولية لكل ملليلتر من محلول ملحي Heparinized.
بعد الانتهاء من مرض الورم ، وربط الخيوط اثنين في الزاوية الدامالية وفتح متتابعة المشابك الوعائية والشروية الوريدية للسماح reperfusion من الكلى. بعد reperfusion, تدار موضعيا خمسة ملليلتر من بابافيرين إلى الجدار الخارجي للشريان الكلوي و تدار عن طريق الوريد 250 ملليلتر من 20٪ محلول الجلوكوز في جرعة واحدة 80 مليغرام من فوروسيميد. بعد ذلك، مرر قسطرة بول الأطفال الفرنسية الـ 12 عبر جدار البطن والجلد واستخدم الأربطة لتأمين القسطرة إلى الحالب.
أغلق طبقة الصفاق فوق الكلى لمنع خلع الطعم وصبغ الأوعية الدموية. و أغلق البطن في أربع طبقات كما هو موضح. وأخيرا، استخدام اللون دوبلر الموجات فوق الصوتية لضمان كافية الشريانية وريدي ضخ من الكسب غير المشروع في الكلى قبل العودة الحيوان recumbent تماما إلى مرفق الإسكان.
في هذه المجموعة التمثيلية من خمس تجارب زرع الكلى الذاتية في البورسين، نجحت عمليات زرع الجهاز المرسل والاستبداد وزرعها ذاتياً في كل مع وجود إشارات كافية للمتر عن بعد تم تسجيلها خلال فترة المراقبة. بعد إغلاق البطن، كشفت الأشعة فوق الصوتية دوبلر اللون مرضية الشرياني وريدي في الكلى في جميع الحالات. وصلت قيم البوتاسيوم والكياتين في مصل الدم إلى ذروتها في الأيام التالية للعمل الجراحي من ثلاثة إلى أربعة وأظهرت انتعاشًا تدريجيًا بعد ذلك.
بقي الدم pH ضمن المعدل الطبيعي وخرج البول تعافى إلى القيم الطبيعية خلال الأيام الأربعة الأولى بعد العملية الجراحية. يمكن استخدام هذا البروتوكول للإجابة على أسئلة مختلفة حول آثار تقنيات الحفاظ على الأعضاء أو العلاجات السابقة في الجسم الحي أو في الجسم الحي في نموذج كبير سريرياً.
