إعداد الترافيسيرات الشعرية -البلازما المقترنة الاستقرائي الطيف الطيفي (CE-ICP-MS) لقياس كمية من أنواع الأكسدة الحمراء الحديد (Fe(II), Fe(III))

يؤدي الحديد المفرط إلى الحديد النشط للأكسدة الحمراء المجاني الذي يمكن أن يسبب آثارًا مدمرة داخل الخلية ، مثل الإجهاد التأكسي ووفيات الخلايا بسبب بيروكسيد الدهون المعروف باسم ferroptosis. القياسات الكمية للحديد الحديدي والحديد هو المفتاح لنظرة أعمق في هذه العمليات الضارة. هذه التقنية CE-ICP-Ms توفر كلاً من التحليل السريع وحدود القياس الكمي المنخفضة، والتي كلاهما ضرورية لتحديد كمية أنواع الأكسدة الحديدية.

تبدأ عن طريق اختيار البخاخات مع حجم التعرق الذاتي منخفضة وإعداد الأجزاء المناسبة لتحميل واجهة محلية الصنع. قم بتوصيل موصلين ثلاثية الأنثى مع موصل مخروط مخروطي من الذكور عن طريق توصيل الطرف الأيسر من شريط العر الثلاثي السفلي بموصل الذكر والموصل الذكر إلى الاتصال الأوسط للور الثلاثية العلوي. بعد ذلك ، ضع أنبوبًا سنتيمترًا واحدًا فوق السلك البلاتيني واستخدم أنبوب سيليكون سنتيمتر واحد لتوصيل الأنبوب الأول فوهة موصل luer ذكر.

إصلاح التجميع إلى الاتصال الأوسط من الرابط luer الثلاثية الاتجاه السفلي بواسطة دوران المسمار. ادفع أنبوب سنتيمتر واحد فوق مقبِل الشعيرية CE، ثم ضعه في موضعه من ثمانية إلى تسعة سنتيمترات من النهاية، ثم قم بتوصيله بزوّتة موصل اللواء الذكر مع أنبوب سيليكون. وضع الجمعية بأكملها من خلال شريط من موصل T الثلاثي العلوي وإصلاح موصل luer الذكور والنهاية اليسرى من أنثى ثلاثية الاتجاه موصل luer بواسطة تناوب المسمار.

ثم إصلاح أنبوب سيليكون 25 سم في فوهة موصل luer الذكور وإصلاح الجمعية بأكملها في الجزء السفلي من شريط من الرابط إغراء أقل ثلاثة في الاتجاه. دفع بإحكام أنبوب السيليكون سنتيمتر واحد، خمسة ملليمترات على نهاية البخاخات. بينما يتم توصيل موصل مخروط luer الذكور الثاني في الجزء جاحظ من الأنبوب.

نقل جزء واجهة مع جاحظ CE الشعرية إلى مخروط الذكور في البخاخات، ثم إدراج بعناية شعرية من خلال مخروط الذكور والجزء الأوسع من الشعرية البخاخة. إذا لزم الأمر، ضبط طول شعري جاحظ عن طريق فك luer الذكور الأيسر، ونقل luer مع أنابيب المرفقة في الموقف المطلوب وإعادة تثبيته. وينبغي أن تناسب الإناث العلوية ثلاثية في اتجاه luer موصلات بإحكام إلى مخروط الذكور.

عند الانتهاء مع متابعة الإعداد مع ICP-Ms. تم إنشاء منحنيات المعايرة للحديد ثلاثة والحديد نوعين من الأكسدة الحمراء. وكانت حدود الكشف 3.1 ميكروغرام للتر الواحد للحديد اثنين و 3.2 ميكروغرام للتر الواحد للحديد ثلاثة وبرهن الخطية تصل إلى 150 ميكروغرام للتر الواحد.

أظهر تحليل Lysate الخلية SH-SY5Y هجرة أبطأ قليلا لأنواع الأكسدة الحمراء الحديدية بسبب الموصلية أعلى إلى حد ما. وكانت التركيزات المقاسة من الحديد ثلاثة والحديد اثنين 330 ميكروغرام للتر الواحد و 84 ميكروغرام لكل لتر، على التوالي. ونتج عن ذلك نسبة 2 إلى 3 من الحديد 0.25.

الخطوة الأكثر أهمية من هذا البروتوكول هو الإدراج الدقيق للشعرية CE جاحظ من خلال واجهة شنت وتحديد المواقع المناسبة المتعلقة الشعرية البخاخة. قد تصبح الأساليب المعروضة هنا أداة واعدة لتعميق البصيرة في العمليات الجزيئية المعتمدة على الحديد. هناك حاجة إلى دراسات مصممة بعناية للتحقق من صحة ما إذا كان الحديد زائد اثنين، الحديد ثلاثة زائد الكم يمكن أن تكون بمثابة المؤشرات الحيوية المحتملة لتحديد الأنسجة المعرضة لخطر الأضرار القاتلة بوساطة الحديد في سياق الأمراض العصبية والسرطان.