تصنيع الهياكل أنبوبي هو نهج واعد لهندسة الأنسجة من شبكات الأوعية الدموية، والتي لا تزال واحدة من التحديات الرئيسية في زراعة الأنسجة السميكة في المختبر. والميزة الرئيسية لتقنية الأساسية / شل هو إنتاج بسيط من السقالات خيوط جوفاء في خطوة واحدة، والحد من وقت التصنيع ويحتمل أن تسمح الطباعة المباشرة مع الخلايا. إن إعداد تركيبة هيدروجيل مع الخصائص الفيسكويلاستيكية المناسبة، والحفاظ على تدفق متوازن مستمر للمواد الأساسية/القشرية أمر بالغ الأهمية للطباعة ثلاثية الأبعاد للسقالات المستقرة.
للبدء، ملء حقنة 5 مل مع حقنة مع إعداد طازجة هيدروجيل. ملء حقنة ثانية 5 مل, مجهزة إبرة 27 قياس غير حادة نهاية, مع حل عبر الربط الطازجة. تجميع فوهة الأساسية / قذيفة.
أدخل إبرة G27 غير حادة كمكونات أساسية وربط الإبرة باستخدام المسمار. يجب أن تبرز الإبرة الداخلية حوالي 1 مم من فوهة الغلاف الخارجية لللب. قم بتوصيل الحقنة مع حل الربط المتبادل بإبرة G27 في الفوهة وتحميل الحقنة في واحدة من يتصاعد الطارد من طابعة ثلاثية الأبعاد معقمة الإيثانول.
جبل حقنة مع هيدروجيل في الطارد الثاني وربطه إلى فوهة. استخدام قفل Luer لتوصيل أنبوب قصير إلى الجانب مدخلات Luer من فوهة الأساسية / قذيفة. ضبط يدويا المحاذاة حتى فوهة اللمسات على السطح قبل سحب فوهة إلى مسافة مساوية لقطر فوهة الخارجي.
استيراد سقالة ولدت ز رمز واضغط على اللعب لبدء عملية الطباعة. بعد الطباعة، وإزالة بعناية الركيزة مع سقالة المطبوعة وصب حل عبر الثانوية على سقالة كامل. احتضان سقالة لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
لفصل السقالة عن الركيزة، سحب لطيف سقالة جانبية. إذا كان سقالة تتمسك بقوة الركيزة، إدراج حافة حادة بين كل من المواد لفصلها. نقل سقالة إلى حاوية جديدة.
الأشعة فوق البنفسجية تعقيم كلا الجانبين من سقالة لمدة 30 دقيقة لكل جانب. ثم ضع السقالة في خلية عديمة اللون ثقافة المتوسطة واحتضان سقالة في 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة على الأقل. في اليوم التالي، حصاد huvex من ثقافة في المختبر مع 0.25٪ التربسين لمدة خمس دقائق في 37 درجة مئوية.
عندما تكون الخلايا قد فصلت، ووقف رد فعل انزيمي مع 3 مل من خلية جديدة ثقافة المتوسطة وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي. إعادة تعليق بيليه في الثقافة الطازجة المتوسطة التي تحتوي على الفينول الأحمر، وتمييع الخلايا إلى 3.4 مرات 10 إلى الخلايا البطانية الخامسة لكل ملليلتر التركيز. قم بتحميل الخلايا في حقنة معقمة 5 مل مجهزة بإبرة قياس 27 وحدد نقطة دخول في السقالة.
محاذاة الإبرة مع الجزء المستقيم من خيوط السقالة، وثقب بعناية سقالة في زاوية منخفضة. تأكد من أن الإبرة هي ضمن خيوط جوفاء من القناة والاكتئاب بلطف المكبس لحقن ما يقرب من 1-2 مل من تعليق الخلية في سقالة. يجب أن يكون تدفق التعليق مرئيًا من خلال السقالة الشفافة.
عندما تم تعبئة سقالة كامل مع تعليق الخلية، غمر سقالة في خلية جديدة ثقافة المتوسطة، والعودة إلى سقالة حاضنة ثقافة الخلية لمدة تصل إلى 10 أيام. للتصوير الحي / الميت في نهاية الحضانة ، شطف السقالات مع برنامج تلفزيوني ، واستخدام إبرة حادة النهاية لحقن بعناية حل حية / ميتة في السقالة. تأكد من أن الحل قد ملأ السقالة بأكملها ، ووضع السقالة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
في نهاية الحضانة، شطف سقالة مع برنامج تلفزيوني، ونقل بعناية سقالة إلى شريحة زجاجية. ويمكن بعد ذلك أن يلاحظ الخلايا المُسَوَّجَة في السقالات تحت مجهر الفلورس. في هذا المقطع المقطع من سقالة مطبوعة حديثا و ما بعد المعالجة، يمكن ملاحظة قناة جوفاء واضحة وضوحا داخل خيوط.
حتى بعد 72 ساعة من الحضانة في خلية ثقافة المتوسطة في 37 درجة مئوية كما هو موضح، خيوط يحتفظ هيكل جوفاء في جميع أنحاء طول سقالة كامل. هنا، يظهر ممثل حية / ميتا من الخلايا البطانية بعد 48 ساعة من الثقافة داخل سقالة. يمكن التعرف على الخلايا الحية من خلال إشارة الفلورسنت الخضراء الساطعة.
هذه التقنية هي الأساس لتصنيع خطوة واحدة من السقالات الأنبوبية المجوفة ويمكن ترقيتها عن طريق الطباعة المباشرة باستخدام الخلايا المدمجة في الحبر الحيوي.
