هذه التقنية الجديدة للتصوير المجهري في الوقت الحقيقي من آثار CSF فلوريسسنت من خلال الجمجمة سليمة من الفئران الحية يمكن استخدامها لتقييم النقل الزليفتيك. والميزة الرئيسية هي أن هذه التقنية تمكن من إجراء قياسات ديناميكية للمتتبعات في الجسم الحي في جزء صغير من تكلفة طرائق التصوير الأخرى. الإجراءات المطلوبة لوضع لوحة الرأس على cisterna magna cannula بسيطة وبضعية طفيفة ولكن تتطلب الممارسة ليتم تنفيذها بشكل صحيح.
إن العرض التوضيحي المرئي للخطوات الهامة لهذا الأسلوب مطلوب لزيادة جودة الصورة إلى أقصى حد ولتمكين المقارنات القابلة للتكرار بين فئران مختلفة ومجموعات تجريبية. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القارم الرطب الرقبة والرأس مع الماء المعقم وحلق الفراء مبلل. امسح الجلد المكشوف بمسحة كحولية لإزالة أي شعر متبقي ووضع الماوس في إطار مجسم فوق لوحة تحكمها درجة الحرارة.
تطبيق مرهم على عيون الحيوانات وتنظيف الجلد المكشوف مع مسحة الكلورهيكسيدين. بعد 2 دقيقة إزالة الكلورهيكسيدين مع مسح الكحول وتطبيق محلول iodone. عندما يجف يودون حقن مسكن تحت الجلد في الجزء العلوي من الجمجمة والرقبة.
بدءا من الجزء من الرقبة التي تغطي القشرة القذالي، وجعل قطع خط الوسط في الجلد مغالى مستمرة rostrally نحو خط داخلي. تمديد الشق الجانبي إلى الحدود حيث تدخل العضلات الصدغية في الجمجمة وإزالة كل من الجلد من شق fusiform لفضح كل من العظام الأمامية والضشمية. ري الجمجمة مع المالحة العقيمة، واستخدام مسحات القطن لتنظيف السطح حتى يكون خاليا من الحطام والشعر.
بعد إدراج cisterna magna cannula تطبيق خليط من الاسمنت الأسنان والصمغ سيانوكريلات على الجانب البطني من لوحة الرأس حول الحدود. ضع لوحة الرأس على الجمجمة بحيث تتحاذى الحدود الأمامية للصفيحة مع الطرف الخلفي لعظم الأنف والحدود الخلفية مع الجانب الأمامي للعظم بين السحوليين مع التأكد من أن خياطة القوس مركزة ومستقيمة بالنسبة إلى النافذة. من المهم التأكد من أن لوحة الرأس مؤمنة وأنه لا يعيق مجال الرؤية من تَكَلَب cisterna magna.
استخدام بضع قطرات من المسرع الغراء لإصلاح موقف لوحة الرأس وملء أي ثغرات المتبقية مع خليط الاسمنت. الغراء cannula cisterna magna إلى لوحة الرأس واستخدام لوحة الرأس لوضع الماوس في حامل الرأس في موقف ثابت. ضع الماوس ومضخة التسريب المرفقة بالقنية بعناية على عربة لنقلها إلى المنظار الكلي ووضع حامل الرأس على خشبة المسرح من المنظار.
تأكد من أن الخط من مضخة الحقنة إلى كانولا cisterna magna ليس مشدود وأنه لا يوجد لديه مكامن الخلل. مراقبة معدل التنفس والتلوين الوردي للأغشية المخاطية لتأكيد الأوكسجين الجيد. قم بتشغيل كاميرا macroscope والصمام الثنائي الباعث للضوء وابدأ تشغيل الوضع المباشر.
ضبط التكبير من مجال التصوير بحيث يمكن تصور خياطة الأنف الواجهة في الجزء العلوي من الحقل وخياطة لامدويد في الجزء السفلي بوضوح. مرة واحدة في مكان الشريط حامل الرأس إلى مرحلة macroscope والتركيز على macroscope الجمجمة المكشوفة حتى يقع على الجانبين الجانبيين من الجداري العظام الخلفية لخياطة التاجية. بالنسبة لضخ متتبع CSF، قم بتعيين مضخة التسريب إلى المعدل والحجم المناسبين وتعيين الطول الموجي الملائم للإثارة ووقت التعرض للمتتبع لكل قناة.
ثم تحقق من صحة وظيفة التشغيل على macroscope قبل بدء ضخ التتبع والتصوير في نفس الوقت. أثناء التصوير يمكن التعرف بسهولة على خياطة الأنف الأمامية، القوس، الإكلالي، واللامدويد. مرة واحدة وقد غرست متتبع CSF في ماغنا cisterna لوحظ أول مرة في الفلورانس التتبع في برك كبيرة من CSF تحت العنكبوت في خزان olfactofrontal وخز رباعي بالقرب من عطلة الصنوبر والمحيطة في نهاية المطاف الشرايين الدماغية الوسطى.
متتبعات CSF ثم تدخل دماغهم على طول مساحات الأوعية الدموية حول الأوعية الدموية من فروع البطلية القشرية في الشريان الدماغي الأوسط. CSF التصوير النقل بعد إصابة الدماغ الرضية يكشف التتبع في البداية في خزان olfactofrontal ولكن تدفق غليففاتيك على طول المساحات البريفيزيقية القشرية يتم إلغاؤها تماما على جانب الإصابة. ويبين التحليل الكمي في الصور في vivo أن انخفاض تدفق ipsilateral ما يقرب من ثلث بالمقارنة مع نصف الكرة الأرضية.
لتجنب الحركة والتحف التغييرات في الطائرة التركيز تذكر لتأمين لوحة الرأس وحامل لوحة الرأس بشكل صحيح والتحقق من مستوى التخدير من الحيوان. بعد التجربة في vivo نتائج التصوير يمكن التحقق من صحة مزيد من خلال تحديد كمية الاختراق التتبع باستخدام الفعلية هذه التقنية يسمح لدراسة النظام glymphatic بطريقة فسيولوجية وبضعية طفيفة ويمكن أن تساعد في معالجة الأسئلة المستقبلية حول هيدروديناميكية CSF في الصحة والمرض.
