نظام التوجيهي "الثغور متفاوت" "السكر الحل العلاج الغمر" في شتلات نبات التمويل

وقد أجاب هذا الأسلوب على سؤال رئيسي من بيولوجيا النبات التنموي. أي ما هي أهمية التوزيع المكاني لـ stomata؟ نظامنا التعريفي لstomata متفاوت المسافات باستخدام محلول السكروز سهل إلى حد ما وقابل للتطبيق مباشرة على خطوط متحولة أو متحولة من ثالانا Arabidopsis.

للبدء، إضافة 1.1 غرام من الأملاح المتوسطة Murashige-Skoog و 15 غراما من السكروز إلى منقار. أضيفي 490 ملليلتر من الماء المقطر إلى القارق واخلطيه مع شريط التحريك. استخدام هيدروكسيد البوتاسيوم لضبط درجة الH إلى 5.8.

ثم تمييع المحلل مع 500 ملليلتر من الماء المقطر ونقل الحل المخفف إلى زجاجة متوسطة. بعد ذلك، أوتلاف الحل. إعداد حل التعقيم وفقا للبروتوكول النص.

ثم، والعمل في ظل ظروف معقمة، وضع حوالي 50 بذور A.thaliana المعدلة وراثيا تحمل علامة الفلورسنت في أنبوب 1.5 ملليلتر. أضف بعد ذلك ملليلتر واحد من 70٪ الإيثانول إلى الأنبوب ويخلط عن طريق عكس الأنبوب خمس مرات. بعد السماح للبذور بالغرق في الجزء السفلي من الأنبوب ، قم بإزالة الإيثانول بلطف مع ميكروبيبت.

إضافة ملليلتر واحد من حل التعقيم إلى البذور وعكس الأنبوب خمس مرات لخلط. إزالة بلطف حل التعقيم من البذور مع ميكروببيت. ثم يضاف ملليلتر واحد من الماء المعقم.

إضافة 1.5 ملليلتر من حل Murashige-Skoog إلى كل بئر من 24 لوحة جيدا. ثم إضافة اثنين من البذور تعقيم إلى كل بئر. باستخدام طبقتين من البارا فيلم، الشريط الغطاء إلى لوحة.

بعد ذلك، قم بنقل اللوحة إلى غرفة نمو لاحتضان لمدة 14 يومًا. أولا، نقل 30 ميكروليتر من حل Murashige-Skoog من لوحة 24 جيدا إلى وسط شريحة زجاجية. باستخدام مقص تشريح، وإزالة كوتيليدون من شتلة القديمة 14 يوما.

تعويم كوتيليدون مع الجانب المراقبة التي تواجه حتى على قطرة من حل Murashige-Skoog. إعداد كوتيليدون وفقا للأساليب المذكورة سابقا في مجلة التجارب المرئية. تعيين العينة على خشبة المسرح من مجهر الليزر confocal.

وأخيراً، استخدم إضاءة المجال الساطع لتحديد خلايا حراسة متفاوتة المسافات للمراقبة. في هذا البروتوكول، تم حث التجمّع الخوّي في شتلات A.thaliana. خلايا الحراسة المتجمعة التي تزرع في السكروز التي تحتوي على متوسطة وجود chloroplasts أكبر من خلايا الحراسة التي تزرع في ظروف خالية من السكروز.

تم تأكيد توسيع البلاستيدات بالبلاستيدات بالورم اللوائية الفلورية من الكلوروبلاستس و كلوروفيل، مما يشير إلى أن معالجة السكروز أدت إلى تراكم حبوب النشا في البلاستيدات الكلورية. بالإضافة إلى ذلك، كشفت المراقبة confocal من GFP الحوض-6 أن microtubules القشرية كانت موجهة شعاعيا في الخلايا المعالجة بالزروس، تماما كما هو الحال في خلايا الحرس خالية من السكروز. في الواقع اكتشفنا هذه الطريقة عن طريق الصدفة.

بعد هذه النتيجة، درسنا الاستجابة البيئية من stomata متفاوت المسافات. ونحن نعتقد أن نظامنا يمكن أن يساعد في دراسة أهمية توزيع الستوماتا.