We thank Saran Kupul for technical assistance. This work was supported in part by NIH grant R01-AI104952 to FW. Further support was provided by the University of Alabama at Birmingham (UAB) Center for AIDS Research (CFAR), an NIH funded program (P30 AI027767) that was made possible by the following NIH Institutes: NIAID, NIMH, NIDA, NICHD, NHLDI, NIA.

1. بيوفيلم بدء <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو ثقافة إنتاج بيوفيلم الكائن في وسط غني بالمغذيات. تطعيم المكورات العنقودية الذهبية سلالة نيومان في 10 مل من مولر هينتون المتوسطة من المخزون الجلسرين. أداء جميع الأعمال التي تنطوي على التعامل مع س. الذهبية مع قفازات وداخل مجلس الوزراء السلامة البيولوجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لمدة 16 ساعة على 37 درجة مئوية على شاكر دوارة (100-200 دورة في الدقيقة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد OD 600 من ثقافة باستخدام مقياس الطيف الضوئي وكفيت القياسية (طول المسار: 1CM). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب حجم (V) الثقافة اللازمة لإعداد 20 مل من اللقاح مع OD 600 (اللقاح) من 0.1 في chelexed سائل الإعلام معهد الحديقة التذكارية روزويل (CRPMI) 9 باستخدام المعادلة التالية: [V = 20 مل * 0.1 / OD 600 (ثقافة )] ملاحظة: مرجع 9 تفاصيل عن إعداد CRPMI. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الحجم ثقافة احتساب (من فوق) لأنبوب الطرد المركزي والخلايا بيليه عن طريق الدوران لمدة 1 دقيقة في 10000 ز س. لاستعداداتإعادة اللقاح بيوفيلم، نضح قضى متوسط ​​النمو و resuspend بيليه الخلية في 20 مل CRPMI. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب اللقاح في خزان 25 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعناية إزالة الغطاء من معقمة 96-جيدا لوحة الربط عن طريق سحبها على التوالي. ملاحظة: يجب الحرص على عدم تلويث أوتاد تتدلى من الغطاء. غطاء يمكن وضعها رأسا على عقب على سطح نظيف داخل مجلس الوزراء للسلامة الأحيائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام 200 ميكرولتر ماصة متعدد القنوات، إضافة 125 ميكرولتر اللقاح إلى كل بئر من الصفوف ألف إلى زاي من أسفل لوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء المتوسطة CRPMI 125 ميكرولتر العقيمة في كل بئر من الصف H كعنصر تحكم العقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتخاذ الربط بين الغطاء والاحتفاظ بها فوق الجزء السفلي لوحة مع أوتاد التي تواجه هبوطا. بعناية محاذاة أوتاد الفردية مع الآبار الخاصة بها. تجنب الاتصال الجسدي بين لوحة وأوتاد. مرة واحدة الانحياز، وانخفاض الغطاء بعناية أسفل. تجنب اختلالات كما تعديلات أجريت بعد أوتاد لمست لوحة أسفل قد تابعضوابط العقم يؤمين في H. التوالي </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ختم غطاء لوحة مع فيلم البارافين لمنع التبخر وضعها في كيس من البلاستيك قابل للغلق، وختم بإحكام. الحفاظ على حجم الهواء في الكيس عند أدنى مستوى ممكن لتقليل التبخر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان دون أن تهتز عند 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة في 5٪ CO 2 الحاضنة. ملاحظة: لقد تم 48 ساعة من النمو الأمثل لس. الذهبية، ولكن سوف تختلف استنادا إلى كائن المستخدمة. ملاحظة: على الرغم من الحضانة ثابتة هي نقطة انطلاق جيدة لتحسين الفحص، والهز برفق في 150 دورة في الدقيقة على شاكر صفيحة هو الاختلاف الممكن أن قد يعزز تشكيل بيوفيلم من بعض س. العنقودية الذهبية المعزولة. </li></ol> 2. إعداد لوحة بيوفيلم التحدي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم التحدي بيوفيلم تأخذ لوحة 96-جيدا الطازجة وإضافة 100 ميكرولتر من CRPMI، معايرتها إلى RT، إلى كل بئر من الصفوف B إلى H. لتجنب نتائج غير متناسقة، واستخدام لوحة 96-جيدا التي يمكن أن تعقد 200 ميكرولتروسائل الإعلام عندما أوتاد هي في الداخل، وتتميز الآبار ذات أبعاد مماثلة لتلك التي من لوحة بيوفيلم بدء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع تصل إلى 4 مركبات اختبار على حدة في 1.0 مل من CRPMI إلى 2x التركيز النهائي المطلوب، وذلك لحساب لتخفيف النهائي في الخطوة 2.7. ملاحظة: نقطة انطلاق جيدة 8 أضعاف أعلى تركيز مثبط للخلايا العوالق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 200 ميكرولتر من مركب 1 في الآبار A1 إلى A3، مجمع 2 في الآبار A4 إلى A6، مركب 3 في الآبار A7 إلى A9 ومجمع 4 في الآبار A10 إلى A12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مخفف تسلسليا المركبات الاختبار باستخدام ماصة الأقنية ونقل 100 ميكرولتر من الصف ألف إلى صف باء والمزيج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على هذا النحو، ومواصلة نقل 100 ميكرولتر جيدا جيدا. خلط بعد كل عملية تحويل ووقف في الصف F. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الاختلاط، وطرد 100 ميكرولتر من الصف F في حاوية النفايات. لا نقل أي السائل إلى صفوف G و H. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 100 ميكرولتر من CRPMI إلى كل بئر من لوحة باستخدام ماصة الأقنية لتبرزي حجم إلى 200 ميكرولتر. انظر الشكل رقم 1 لتخطيط لوحة النهائي. </li></ol> 3. بيوفيلم التحدي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 200 ميكرولتر من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) إلى معقمة لوحة 96-جيدا الطازجة التي تتميز الآبار ذات أبعاد مماثلة لتلك التي من لوحة بيوفيلم بدء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كيس من البلاستيك وفيلم البارافين من المحتضنة لوحة بيوفيلم بدء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع الغطاء على التوالي. تجنب الاتصال بين أوتاد وأسفل لوحة لأن ذلك قد يؤدي إلى تلف بيوفيلم. حافظ على الجزء السفلي لتحليلها لاحقا OD 600 (انظر 3.8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف خلايا العوالق عن طريق وضع الربط بين غطاء على لوحة تحتوي على برنامج تلفزيوني (من الخطوة 3.1). غمر أوتاد لمدة 5 ثوان، ورفع من برنامج تلفزيوني، ويغرق مرة أخرى، والحرص على عدم ضرب أوتاد ضد الجانبين أيضا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع تشطف الربط بين غطاء في لوحة التحدي. تجنب الاتصال غير الضرورية بين أوتاد وأسفل اللوحة حيث سيؤدي ذلك إلى تلف بيوفيلم يؤدي إلىنتائج غير متناسقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة ختم مع فيلم البارافين وتضع في كيس من البلاستيك قابل للغلق كما هو موضح في الخطوة 1.10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان لوحة دون أن تهتز لمدة 24 ساعة على 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 الحاضنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ الجزء السفلي من لوحة بيوفيلم بدء من 3.3. Resuspend والبكتيريا في كل بئر باستخدام ماصة الأقنية وقياس OD 600 مع قارئ صفيحة مناسبة لتأكيد النمو التي تحدث في جميع الآبار ولكن الضوابط العقم في H. التوالي </li></ol> 4. بيوفيلم تحديد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام قارئ لوحة مجهزة غرفة الحضانة وقادرة على اتخاذ قراءات مضان الحركية للكشف عن ريسازورين التحويل. انشاء 24 ساعة قياس مضان الحركي باستخدام الإثارة 530 نانومتر و 590 نانومتر الانبعاثات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط درجة حرارة الغرفة إلى 37 درجة مئوية، ويكون لوحة تقرأ كل 20 دقيقة. تعيين قارئ لوحة لقياس من الجزء السفلي من لوحة وفقا لinstruc الشركة المصنعةستعقد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد لوحة غسل بإضافة 200 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني مع ماصة الأقنية إلى العقيمة 96 لوحة جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد بيوفيلم الانتعاش المتوسطة وذلك بإضافة 400 ميكرولتر من 0.8 ملغ / مل ريسازورين حل الأسهم إلى 20 مل من CRPMI المتوسطة إلى تركيز النهائي من 16 ميكروغرام / مل ريسازورين. ملاحظة: ريسازورين هو أنسجة الجلد المعروفة. استخدام معطف المختبر، نظارات البداية، والقفازات أثناء التعامل مع. وقد استخدم CRPMI باعتبارها وسائط استرداد بيوفيلم لأنه يوفر أدنى إشارة الخلفية، ولكن يمكن استبدال وسائل الاعلام مولر هينتون إذا كان ذلك مناسبا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 150 ميكرولتر من بيوفيلم المتوسطة الانتعاش مع ماصة الأقنية إلى كل بئر من لوحة 96-جيدا جديدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة نقل تحد من الحاضنة إلى خزانة السلامة البيولوجية وبعناية إزالة كيس من البلاستيك وختم الفيلم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الربط بين غطاء من لوحة التحدي وشطف خلايا العوالق في برنامج تلفزيوني كما هو موضح في 3.4. الحفاظ على الجزء السفلي من لوحة تحديا للOD لاحق 600 آناتحلل (انظر 4.10). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الشطف، وضع الربط بين الغطاء في الجزء السفلي لوحة تحتوي على المتوسطة انتعاش بيوفيلم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التفاف الجانب من لوحة مع فيلم البارافين، والحرص على عدم عرقلة الجزء السفلي من الآبار المحيطة. مباشرة بعد اختتام لوحة، ووضعه على قارئ لوحة وبدء القراءة الحركية على مدى فترة 24 ساعة قبل بدء التي سبق ريسازورين بروتوكول الحركية من الخطوة 4.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لقياس نمو خلايا العوالق التي قد أو قد لا يحدث خلال التحدي، وقراءة OD 600 من كامل أسفل لوحة التحدي باستخدام قارئ لوحة الجزئي. اتبع الإرشادات الواردة في الخطوة 3.8. ملاحظة: و resuspend بعناية محتوى كل كذلك خلايا ينفضون بيوفيلم تميل إلى النمو في كتل في أسفل البئر. وأي فقاعات داخل البئر تتداخل بقوة مع OD 600 قراءات ويجب تجنبها أو إزالتها قبل القراءة. </li></ol>

<ol>
	<li>Bjarnsholt, T., Ciofu, O., Molin, S., Givskov, M., Hoiby, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+insights+from+biofilm+biology+to+drug+development+-+can+a+new+approach+be+developed.">Applying insights from biofilm biology to drug development - can a new approach be developed.</a> Nat Rev Drug Discov. 12, 791-808 (2013).</li><li>Song, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prosthesis+infections+after+orthopedic+joint+replacement:+the+possible+role+of+bacterial+biofilms.">Prosthesis infections after orthopedic joint replacement: the possible role of bacterial biofilms.</a> Orthop Rev (Pavia). 5, 65-71 (2013).</li><li>Hall-Stoodley, L., Costerton, J. W., Stoodley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+biofilms:+from+the+natural+environment+to+infectious+diseases).">Bacterial biofilms: from the natural environment to infectious diseases).</a> Nat Rev Microbiol. 2, 95-108 (2004).</li><li>Bordi, C., de Bentzmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hacking+into+bacterial+biofilms:+a+new+therapeutic+challenge.">Hacking into bacterial biofilms: a new therapeutic challenge.</a> Ann Intensive Care. 1, 19 (2011).</li><li>Fux, C. A., Shirtliff, M., Stoodley, P., Costerton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+laboratory+reference+strains+mirror+'real-world'+pathogenesis?.">Can laboratory reference strains mirror 'real-world' pathogenesis?.</a> Trends Microbiol. 13, 58-63 (2005).</li><li>Kwasny, S. M., Opperman, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Static+biofilm+cultures+of+Gram-positive+pathogens+grown+in+a+microtiter+format+used+for+anti-biofilm+drug+discovery.">Static biofilm cultures of Gram-positive pathogens grown in a microtiter format used for anti-biofilm drug discovery.</a> Curr Protoc Pharmacol. Chapter 13, Unit 13A 18 (2010).</li><li>Ceri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MBEC+Assay+System:+multiple+equivalent+biofilms+for+antibiotic+and+biocide+susceptibility+testing.">The MBEC Assay System: multiple equivalent biofilms for antibiotic and biocide susceptibility testing.</a> Methods Enzymol. 337, 377-385 (2001).</li><li>Ceri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Calgary+Biofilm+Device:+new+technology+for+rapid+determination+of+antibiotic+susceptibilities+of+bacterial+biofilms.">The Calgary Biofilm Device: new technology for rapid determination of antibiotic susceptibilities of bacterial biofilms.</a> J Clinical Microbiol. 37, 1771-1776 (1999).</li><li>Baker, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper+stress+induces+a+global+stress+response+in+Staphylococcus+aureus+and+represses+sae+and+agr+expression+and+biofilm+formation.">Copper stress induces a global stress response in Staphylococcus aureus and represses sae and agr expression and biofilm formation.</a> Appl Environ Microbiol. 76, 150-160 (2010).</li><li>Haeili, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper+complexation+screen+reveals+compounds+with+potent+antibiotic+properties+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus.">Copper complexation screen reveals compounds with potent antibiotic properties against methicillin-resistant Staphylococcus aureus.</a> Antimicrob Agents Chemother. 58, 3727-3736 (2014).</li><li>O'Brien, J., Wilson, I., Orton, T., Pognan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+Alamar+Blue+(resazurin)+fluorescent+dye+for+the+assessment+of+mammalian+cell+cytotoxicity.">Investigation of the Alamar Blue (resazurin) fluorescent dye for the assessment of mammalian cell cytotoxicity.</a> Eur J Biochem. 267, 5421-5426 (2000).</li><li>Mah, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+the+minimal+bactericidal+concentration+of+an+antimicrobial+agent+for+planktonic+cells+(MBC-P)+and+biofilm+cells+(MBC-B).">Establishing the minimal bactericidal concentration of an antimicrobial agent for planktonic cells (MBC-P) and biofilm cells (MBC-B).</a> J Vis Exp. (83), e50854 (2014).</li><li>Junker, L. M., Clardy, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screens+for+small-molecule+inhibitors+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+development.">High-throughput screens for small-molecule inhibitors of Pseudomonas aeruginosa biofilm development.</a> Antimicrob Agents Chemother. 51, 3582-3590 (2007).</li><li>Shah, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persisters:+a+distinct+physiological+state+of+E.+coli.">Persisters: a distinct physiological state of E. coli.</a> BMC Microbiol. 6, 53 (2006).</li><li>Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Riddle+of+biofilm+resistance.">Riddle of biofilm resistance.</a> Antimicrob Agents Chemother. 45, 999-1007 (2001).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

هنا، التي وصفناها فحص بيوفيلم المعدلة لتحديد نشاط مثبطات اختبارها على س. الأغشية الحيوية الذهبية التركيز على الدولة التمثيل الغذائي للخلايا بيوفيلم المرتبطة بها. في حين الشروع بيوفيلم وصف وإجراءات تحد توصيات الشركة معظمها تحاكي، واستخدام ريسازورين الصبغ...

يمكن الميكروبات المسببة للأمراض تشكل الأغشية الحيوية في الجسم الحي مما يؤدي إلى الالتهابات المزمنة غير الحادة 1. العدوى المرتبطة بيوفيلم هو عامل خطر جدي من الإجراءات الطبية التي تنطوي على زرع أجسام غريبة (على سبيل المثال، استبدال العظام الاصطناعية، ثدي) أو تركيب أنابيب القصبة الهوائية أو القسطرة البولية 2. في هذه السياقات، العلاج المضاد للعدوى هو دائما تقريبا عند الضرورة نادرا ما يتم مسح العدوى القائم على بيوفيلم من تلقاء نفسها، حتى في الأفراد المناعة. المكورات العنقودية الذهبية هي واحدة من مسببات الأمراض الأكثر لوحظ في كثير من الأحيان المتورطين في مضاعفات بيوفيلم التي تحدث أثناء استخدام الأجهزة الطبية الغازية 3. وللأسف، فإن طبيعة الأغشية الحيوية بمثابة حاجز وقائي يجعلها أكثر مقاومة للعلاج من خلايا العوالق 1،4، وتقييم الفعالية السريرية تنبأ هو جزء هام من كلا الأوليتطوير العقاقير وكذلك مراقبة مقاومة العقاقير. هناك اعتراف متزايد أن الظروف المختبرية، وتركز على ثقافات العوالق، قد لا تمثل بأمانة المرض في العالم الحقيقي 5. مما زاد من تفاقم المشكلة، وتكرار الظواهر بيوفيلم أمر صعب، ونماذج بيوفيلم القائمة ومملة ويعانون من ارتفاع المشترك بين وداخل فحص 6 التباين. وهكذا، كثير من الباحثين، من خلال ضرورة، افتراضية المقايسات خلية العوالق قابلية المخدرات، وبالتالي يحتمل أن إهمال جانب هام من جوانب الفوعة البكتيرية والأمراض. نحن هنا تصف البروتوكول لمعايرة البكتيريا، وتحديدا س. الذهبية، في الأغشية الحيوية نمت قبل استخدام مقرها 7،8 نظام بيوفيلم جيدا 96. بينما بروتوكول لتشكيل بيوفيلم والتحدي يتبع أساسا على توصية الصانع، ونحن تقديم منهجية غنية بالمعلومات بديلة لقياس جدوى biofILM بعد التحدي. لفترة وجيزة، والبكتيريا يتم تربيتها في لوحة الربط، حيث تشكل الأغشية الحيوية على أوتاد جاحظ تعلق على غطاء لوحة ل. بعد تشكيل بيوفيلم، وانخفض أوتاد بلطف في آبار لوحة جديدة مليئة PBS لإزالة الخلايا العوالق. و-غطاء الوتد، مع الأغشية الحيوية المرفقة، يتم نقلها إلى لوحة التحدي الجديدة، التي تحتوي على تركيزات مختلفة من المضادات الحيوية لأن يعاير. بعد الحضانة الثانية، تتم إزالة الأغطية مرة أخرى، وغسلها، ونقله إلى لوحة الانتعاش التي تحتوي على ريسازورين صبغ، حيث يخضع لعملية حضانة النهائية. تحويل ريسازورين يمكن تسجيل حركيا أو اعتباره قراءة نقطة النهاية بعد فترة نقاهة محددة. هذا الأسلوب القائم على صبغ قياس قابلية الأغشية الحيوية يختلف اختلافا كبيرا من كفو (وحدات تشكيل مستعمرة) مملة منهجية قائمة على العد هو موضح في البروتوكول الأصلي 7. OD 600 القياسات من لوحة التحدي المخدرات وريسازورين حركية تحويل بمثابة قابلية القراءةعموميات من العوالق وبيوفيلم الخلايا، على التوالي، وتقدم موثوق بها، فحص سريع، وبسيط من الناحية الفنية الغنية بالمعلومات من أجل البقاء بيوفيلم.

<table><tbody><tr><td>&amp;nbsp;Mueller-Hinton Medium</td><td>Oxoid</td><td>CM0405</td><td>Follow recommendations of manufacturer</td></tr><tr><td>RPMI-medium</td><td>Corning&amp;nbsp;</td><td>17-105-CV</td><td></td></tr><tr><td>CRPMI</td><td>Ref 9</td><td></td><td>RPMI-1640 medium chelexed for 1 hr with Chelex 100 resin and then supplemented with 10% unchelexed RPMI-1640</td></tr><tr><td>Chelex 100 Resin</td><td>Bio Rad</td><td>142-2822</td><td></td></tr><tr><td>MBEC-plates</td><td>Innovotech</td><td>19111</td><td></td></tr><tr><td>Resazurin Sodium Salt</td><td>Sigma</td><td>R7017</td><td>800 &amp;micro;g/ml in DI water&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; Filter sterile</td></tr><tr><td>Micro Plate Shaking Platform&amp;nbsp;</td><td>Heidolph Titramax 1000</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cytation 3 Plate Reader</td><td>Biotek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gen5 software</td><td>Biotek</td><td></td><td>Recording and analysis of resazurin conversion</td></tr><tr><td>Neocuproine</td><td>Sigma</td><td>N1501&amp;nbsp;</td><td>prepare 10 mM stock in 100% Ethanol, store at -80 &amp;ordm;C</td></tr><tr><td>Copper sulfate</td><td>Acros Organics</td><td>7758-99-8</td><td>prepare a 100 mM stock solution in water, store at 4 &amp;ordm;C</td></tr><tr><td>Cu-Neocuproine</td><td>Self-Made</td><td></td><td>Generated by mixing equal molarities of neocuproine and copper sulfate. Mix was diluted in CRPMI medium to desired concentration.</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Sigma</td><td>G3632-1G</td><td></td></tr></tbody></table>

targeting biofilm associated staphylococcus aureus using resazurin based drug-susceptibility assay

Most pathogenic bacteria are able to form biofilms during infection, but due to the difficulty of manipulating and assessing biofilms, the vast majority of laboratory work is conducted with planktonic cells. Here, we describe a peg plate biofilm assay as performed with Staphylococcus aureus. Bacterial biofilms are grown on pegs attached to a 96-well microtiter plate lid, washed through gentle submersion in buffer, and placed in a drug challenge plate. After subsequent incubation they are again washed and moved to a final recovery plate, in which the fluorescent dye resazurin serves as a viability indicator. This assay offers greatly increased ease-of-use, reliability, and reproducibility, as well as a wealth of data when conducted as a kinetic read. Moreover, this assay can be adapted to a medium-throughput drug screening approach by which an endpoint fluorescent readout is taken instead, offering a path for drug discovery efforts.

فحص ريسازورين حساسة بما يكفي للكشف موثوق عدد قليل جدا من خلايا قابلة للحياة قادرة على تكرار في مجال مكافحة المخدرات المتوسطة حرة بعد التحدي. في هذه المنهجية، نحدد الحد الأدنى بيوفيلم القضاء على التركيز كما أدنى تركيز الذي يعتبر أي تحويل ريسازورين خ...

Watch this Scientific Journal Video about Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay at JoVE.com

Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay

استهداف بيوفيلم أسوشيتد<em&gt; المكورات العنقودية الذهبية</em&gt; استخدام ريسازورين استنادا الفحص المخدرات-القابلية

Most bacterial infections produce a biofilm. By virtue of their environment, biofilm associated bacteria are often phenotypically drug resistant. Novel antibacterial molecules that kill bacteria in biofilms are thus a high priority. We establish an assay to quickly screen for antimicrobial compounds that are effective at eradicating biofilms.

Most pathogenic bacteria are able to form biofilms during infection, but due to the difficulty of manipulating and assessing biofilms, the vast majority ...

targeting-biofilm-associated-staphylococcus-aureus-using-resazurin

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay

13.0K Views.  University of Alabama at Birmingham. Most bacterial infections produce a biofilm. By virtue of their environment, biofilm associated bacteria are often phenotypically drug resistant. Novel antibacterial molecules that kill bacteria in biofilms are thus a high priority. We establish an assay to quickly screen for antimicrobial compounds that are effective at eradicating biofilms. 

Video: Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings. In fact, life in a biofilm probably represents the predominate mode of growth for microbes in most environments. Mature biofilms have a few distinct characteristics. Biofilm microbes are typically surrounded by an extracellular matrix that provides structure and protection to the community. Microbes growing in a biofilm also have a characteristic architecture generally comprised of macrocolonies (containing thousands of cells) surrounded by fluid-filled channels. Biofilm-grown microbes are also notorious for their resistance to a range of antimicrobial agents including clinically relevant antibiotics.
The microtiter dish assay is an important tool for the study of the early stages in biofilm formation, and has been applied primarily for the study of bacterial biofilms, although this assay has also been used to study fungal biofilm formation. Because this assay uses static, batch-growth conditions, it does not allow for the formation of the mature biofilms typically associated with flow cell systems. However, the assay has been effective at identifying many factors required for initiation of biofilm formation (i.e, flagella, pili, adhesins, enzymes involved in cyclic-di-GMP binding and metabolism) and well as genes involved in extracellular polysaccharide production. Furthermore, published work indicates that biofilms grown in microtiter dishes do develop some properties of mature biofilms, such a antibiotic tolerance and resistance to immune system effectors.
This simple microtiter dish assay allows for the formation of a biofilm on the wall and/or bottom of a microtiter dish. The high throughput nature of the assay makes it useful for genetic screens, as well as testing biofilm formation by multiple strains under various growth conditions. Variants of this assay have been used to assess early biofilm formation for a wide variety of microbes, including but not limited to, pseudomonads, Vibrio cholerae, Escherichia coli, staphylocci, enterococci, mycobacteria and fungi.
In the protocol described here, we will focus on the use of this assay to study biofilm formation by the model organism Pseudomonas aeruginosa. In this assay, the extent of biofilm formation is measured using the dye crystal violet (CV). However, a number of other colorimetric and metabolic stains have been reported for the quantification of biofilm formation using the microtiter plate assay. The ease, low cost and flexibility of the microtiter plate assay has made it a critical tool for the study of biofilms.

The assay describes a rapid means to measure early biofilm formation in bacteria and fungi. This method uses a microtiter plate as the substratum for microbial biofilm formation, and the biofilm is visualized using crystal violet strain. The assay provides either a qualitative or quantitative assay for early biofilm formation.

Microtiter تشكيل بيوفيلم الطبق الفحص

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings.  In fact, life in a biofilm ...

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) antibody conjugated latex beads have been utilized to create a biosensor designed for discrimination of methicillin resistant (MRSA) and sensitive (MSSA) S. aureus species 1,2. The lytic phages have been converted into phage spheroids by contact with water-chloroform interface. Phage spheroid monolayers have been moved onto a biosensor surface by Langmuir-Blodgett (LB) technique 3. The created biosensors have been examined by a quartz crystal microbalance with dissipation tracking (QCM-D) to evaluate bacteria-phage interactions. Bacteria-spheroid interactions led to reduced resonance frequency and a rise in dissipation energy for both MRSA and MSSA strains. After the bacterial binding, these sensors have been further exposed to the penicillin-binding protein antibody latex beads. Sensors analyzed with MRSA responded to PBP 2a antibody beads; although sensors inspected with MSSA gave no response. This experimental distinction determines an unambiguous discrimination between methicillin resistant and sensitive S. aureus strains. Equally bound and unbound bacteriophages suppress bacterial growth on surfaces and in water suspensions. Once lytic phages are changed into spheroids, they retain their strong lytic activity and show high bacterial capture capability. The phage and phage spheroids can be utilized for testing and sterilization of antibiotic resistant microorganisms. Other applications may include use in bacteriophage therapy and antimicrobial surfaces.

Lytic phage biosensors and antibody beads are able to discriminate between methicillin resistant (MRSA) and sensitive staphylococcus bacteria. The phages were immobilized by a Langmuir-Blodgett method onto a surface of a quartz crystal microbalance sensor and worked as broad range staphylococcus probes. Antibody beads recognize MRSA.

جهاز الاستشعار البيولوجي للكشف عن المضادات الحيوية البكتيريا العنقودية الذهبية المقاومة لل

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

Bioengineering

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

There is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from cystic fibrosis (CF) patients. Existing methods rely on single or a few isolates grown aerobically and planktonically. Predetermined cut-offs are used to define whether the bacteria are sensitive or resistant to any given antibiotic1. However, during chronic lung infections in CF, P. aeruginosa populations exist in biofilms and there is evidence that the environment is largely microaerophilic2. The stark difference in conditions between bacteria in the lung and those during diagnostic testing has called into question the reliability and even relevance of these tests3.
 Artificial sputum medium (ASM) is a culture medium containing the components of CF patient sputum, including amino acids, mucin and free DNA. P. aeruginosa growth in ASM mimics growth during CF infections, with the formation of self-aggregating biofilm structures and population divergence4,5,6. The aim of this study was to develop a microtitre-plate assay to study antimicrobial susceptibility of P. aeruginosa based on growth in ASM, which is applicable to both microaerophilic and aerobic conditions.
 An ASM assay was developed in a microtitre plate format. P. aeruginosa biofilms were allowed to develop for 3 days prior to incubation with antimicrobial agents at different concentrations for 24 hours. After biofilm disruption, cell viability was measured by staining with resazurin. This assay was used to ascertain the sessile cell minimum inhibitory concentration (SMIC) of tobramycin for 15 different P. aeruginosa isolates under aerobic and microaerophilic conditions and SMIC values were compared to those obtained with standard broth growth. Whilst there was some evidence for increased MIC values for isolates grown in ASM when compared to their planktonic counterparts, the biggest differences were found with bacteria tested in microaerophilic conditions, which showed a much increased resistance up to a &gt;128 fold, towards tobramycin in the ASM system when compared to assays carried out in aerobic conditions.
 The lack of association between current susceptibility testing methods and clinical outcome has questioned the validity of current methods3. Several in vitro models have been used previously to study P. aeruginosa biofilms7, 8. However, these methods rely on surface attached biofilms, whereas the ASM biofilms resemble those observed in the CF lung9 . In addition, reduced oxygen concentration in the mucus has been shown to alter the behavior of P. aeruginosa2 and affect antibiotic susceptibility10. Therefore using ASM under microaerophilic conditions may provide a more realistic environment in which to study antimicrobial susceptibility.

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Current diagnostic antimicrobial susceptibility testing relies on the planktonic growth of isolates in nutrient rich, aerobic conditions. Here, we employ an alternative artificial sputum medium to study antimicrobial susceptibility of Pseudomonas aeruginosa biofilms under both aerobic and microaerophilic conditions more representative of the cystic fibrosis lung.

استخدام متوسط ​​البلغم الاصطناعي لاختبار فعالية المضادات الحيوية لمكافحة<em&gt; الزائفة الزنجارية</em&gt; في شروط أكثر ملاءمة لالرئة التليف الكيسي

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Stress-induced Antibiotic Susceptibility Testing on a Chip

We have developed a rapid microfluidic method for antibiotic susceptibility testing in a stress-based environment. Fluid is passed at high speeds over bacteria immobilized on the bottom of a microfluidic channel. In the presence of stress and antibiotic, susceptible strains of bacteria die rapidly. However, resistant bacteria survive these stressful conditions. The hypothesis behind this method is new: stress activation of biochemical pathways, which are targets of antibiotics, can accelerate antibiotic susceptibility testing. As compared to standard antibiotic susceptibility testing methods, the rate-limiting step -&#160;bacterial growth -&#160;is omitted during antibiotic application. The technical implementation of the method is in a combination of standard techniques and innovative approaches. The standard parts of the method include bacterial culture protocols, defining microfluidic channels in polydimethylsiloxane&#160;(PDMS), cell viability monitoring with fluorescence, and batch image processing for bacteria counting. Innovative parts of the method are in the use of culture media flow for mechanical stress application, use of enzymes to damage but not kill the bacteria, and use of microarray substrates for bacterial attachment. The developed platform can be used in antibiotic and nonantibiotic related drug development and testing. As compared to the standard bacterial suspension experiments, the effect of the drug can be turned on and off repeatedly over controlled time periods. Repetitive observation of the same bacterial population is possible over the course of the same experiment.

We have developed a microfluidic platform for rapid antibiotic susceptibility testing. Fluid is passed at high speeds over bacteria immobilized on the bottom of a microfluidic channel. In the presence of stress and antibiotic, susceptible strains of bacteria die rapidly. However, resistant bacteria can survive these stressful conditions.

اختبار قابلية المضادات الحيوية الناجم عن الإجهاد على رقاقة

We have developed a rapid microfluidic method for antibiotic susceptibility testing in a stress-based environment. Fluid is passed at high speeds over ...

A Platform of Anti-biofilm Assays Suited to the Exploration of Natural Compound Libraries

Biofilms are regarded as one of the most challenging topics of modern biomedicine, and they are potentially responsible for over 80% of antibiotic-tolerant infections. Biofilms have displayed an exceptionally high tolerance for chemotherapy, which is thought to be multifactorial. For instance, the matrix provides a physical barrier that decreases the penetration of antibiotics into the biofilm. Also, cells within the biofilms are phenotypically diverse. Likely, biofilm resilience arises from a combination of these and other, yet unknown, mechanisms. All of the currently existing antibiotics have been developed against single-cells (planktonic) bacteria. Therefore, so far, a very limited repertoire of molecules exists that can selectively act on mature biofilms. This situation has driven a progressive paradigm shift in drug discovery, in which searching for anti-biofilms has been urged to occupy a more prominent place. An additional challenge is that there are a very limited number of standardized methods for biofilm research, especially those that can be used for large-throughput screening of chemical libraries. Here, an experimental anti-biofilm platform for chemical screening is presented. It uses three assays to measure biofilm viability (with resazurin staining), total biomass (with crystal violet staining), and biofilm matrix (using a wheat germ agglutinin, WGA-fluorescence-based staining of the poly-N-acetyl-glucosamine, PNAG, fraction). All the assays were developed using Staphylococcus aureus as the model bacteria. Examples of how the platform can be used for primary screening as well as for functional characterization of identified anti-biofilm hits are presented. This experimental sequence further allows for the classification of the hits based upon the measured end-points. It also provides information on their mode of action, especially on long-term versus short-term chemotherapeutic effects. Thus, it is very advantageous for the quick identification of high-quality hit compounds that can serve as starting points for various biomedical applications.

Biofilm infections show high tolerance towards chemotherapy. No single assay captures the complexity of biofilms. Instead, complementary assays are needed. We present a screening platform (developed for S. aureus) that combines assays for viability, biomass, and biofilm matrix. It allows anti-biofilm drug discovery, including the assessment of long-term chemotherapeutic effects.

ومنصة للفحوصات مكافحة بيوفيلم مناسبة لاستكشاف المكتبات مركب طبيعي

Biofilms are regarded as one of the most challenging topics of modern biomedicine, and they are potentially responsible for over 80% of ...

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread of multi drug-resistant TB (MDR-TB), there is a real urgency to develop new therapeutic strategies against M. tuberculosis infections. Traditionally, compounds are evaluated based on their antibacterial activity under in vitro growth conditions in broth; however, results are often misleading for intracellular pathogens like M. tuberculosis since in-broth phenotypic screening conditions are significantly different from the actual disease conditions within the human body. Screening for inhibitors that work inside macrophages has been traditionally difficult due to the complexity, variability in infection, and slow replication rate of M. tuberculosis. In this study, we report a new approach to rapidly assess the effectiveness of compounds on the viability of M. tuberculosis in a macrophage infection model. Using a combination of a cytotoxicity assay and an in-broth M. tuberculosis viability assay, we were able to create a screening system that generates a comprehensive analysis of compounds of interest. This system is capable of producing quantitative data at a low cost that is within reach of most labs and yet is highly scalable to fit large industrial settings.

System for Efficacy and Cytotoxicity Screening of Inhibitors Targeting Intracellular Mycobacterium tuberculosis

We have developed a modular high-throughput screening system for discovering novel compounds against Mycobacterium tuberculosis, targeting intracellular and in-broth growing bacteria as well as cytotoxicity against the mammalian host cell.

نظام لفعالية والسمسة فحص مثبطات استهداف بين الخلايا<em&gt; المتفطرة السلية</em

Mycobacterium tuberculosis, the causative agent of tuberculosis (TB), is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. With the increased spread ...

Standardized In vitro Assays to Visualize and Quantify Interactions between Human Neutrophils and Staphylococcus aureus Biofilms

Neutrophils are the first line of defense deployed by the immune system during microbial infection. In vivo, neutrophils are recruited to the site of infection where they use processes such as phagocytosis, production of reactive oxygen and nitrogen species (ROS, RNS, respectively), NETosis (neutrophil extracellular trap), and degranulation to kill microbes and resolve the infection. Interactions between neutrophils and planktonic microbes have been extensively studied. There have been emerging interests in studying infections caused by biofilms in recent years. Biofilms exhibit properties, including tolerance to killing by neutrophils, distinct from their planktonic-grown counterparts. With the successful establishment of both in vitro and in vivo biofilm models, interactions between these microbial communities with different immune cells can now be investigated. Here, techniques that use a combination of traditional biofilm models and well-established neutrophil activity assays are tailored specifically to study neutrophil and biofilm interactions. Wide-field fluorescence microscopy is used to monitor the localization of neutrophils in biofilms. These biofilms are grown in static conditions, followed by the addition of neutrophils derived from human peripheral blood. The samples are stained with appropriate dyes prior to visualization under the microscope. Additionally, the production of ROS, which is one of the many neutrophil responses against pathogens, is quantified in the presence of a biofilm. The addition of immune cells to this established system will expand the understanding of host-pathogen interactions while ensuring the use of standardized and optimized conditions to measure these processes accurately.

Standardized In vitro Assays to Visualize and Quantify Interactions between Human Neutrophils and Staphylococcus aureus Biofilms

The present protocol describes the study of neutrophil-biofilm interactions. Staphylococcus aureus biofilms are established in vitro and incubated with peripheral blood-derived human neutrophils. The oxidative burst response from neutrophils is quantified, and the neutrophil localization within the biofilm is determined by microscopy.

فحوصات موحدة في المختبر لتصور وتحديد التفاعلات بين العدلات البشرية والمكورات العنقودية الذهبية الأغشية الحيوية

Neutrophils are the first line of defense deployed by the immune system during microbial infection. In vivo, neutrophils are recruited to the site of ...

A Soluble Tetrazolium-Based Reduction Assay to Evaluate the Effect of Antibodies on Candida tropicalis Biofilms

Candida species are the fourth-most common cause of systemic nosocomial infections. Systemic or invasive candidiasis frequently involves biofilm formation on implanted devices or catheters, which is associated with increased virulence and mortality. Biofilms produced by different Candida species exhibit enhanced resistance against various antifungal drugs. Therefore, there is a need to develop effective immunotherapies or adjunctive treatments against Candida biofilms. While the role of cellular immunity is well established in anti-Candida protection, the role of humoral immunity has been studied less.
It has been hypothesized that inhibition of biofilm formation and maturation is one of the major functions of protective antibodies, and Candida albicans germ tube antibodies (CAGTA) have been shown to suppress in vitro growth and biofilm formation of C. albicans earlier. This paper outlines a detailed protocol for evaluating the role of antibodies on biofilms formed by C. tropicalis. The methodology for this protocol involves C. tropicalis biofilm formation in 96-well microtiter plates, which were then incubated in the presence or absence of antigen-specific antibodies, followed by a 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-carboxanilide-2H-tetrazolium (XTT) assay for measuring the metabolic activity of fungal cells in the biofilm.
The specificity was confirmed by using appropriate serum controls, including Sap2-specific antibody-depleted serum. The results demonstrate that antibodies present in the serum of immunized animals can inhibit Candida biofilm maturation in vitro. In summary, this paper provides important insights regarding the potential of antibodies in developing novel immunotherapies and synergistic or adjunctive treatments against biofilms during invasive candidiasis. This in vitro protocol can be used to check the effect of potential new antifungal compounds on the metabolic activity of Candida species cells in biofilms.

A Soluble Tetrazolium-Based Reduction Assay to Evaluate the Effect of Antibodies on Candida tropicalis Biofilms

A 96-well microtiter plate-based protocol using a 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-carboxanilide-2H-tetrazolium (XTT) reduction assay is described herein, to study antibodies' effects on biofilms formed by C. tropicalis. This in vitro protocol can be used to check the effect of potential new antifungal compounds on the metabolic activity of Candida species cells in biofilms.

مقايسة اختزال قابلة للذوبان تعتمد على التترازوليوم لتقييم تأثير الأجسام المضادة على الأغشية الحيوية المبيضات الاستوائية

Candida species are the fourth-most common cause of systemic nosocomial infections. Systemic or invasive candidiasis frequently involves biofilm formation ...

Improved Enzyme Protection Assay to Study Staphylococcus aureus Internalization and Intracellular Efficacy of Antimicrobial Compounds

Staphylococcus aureus expresses virulence factors to trigger its internalization into eukaryote cells and to survive inside different subcellular compartments. This paper describes an enzyme protection assay to study the extent of S. aureus internalization and its intracellular survival in adherent non-professional phagocytic cells (NPPCs) as well as the intracellular efficacy of antimicrobial compounds. NPPCs are grown in a multi-well plate until they reach 100% confluence. S. aureus cultures are grown overnight in cell culture medium. The bacterial suspension is diluted according to the number of cells per well to inoculate the cells at a controlled multiplicity of infection. Inoculated cells are incubated for 2 h to allow the bacteria to be internalized by the NPPCs, following which lysostaphin is added to the culture medium to selectively kill extracellular bacteria. Lysostaphin is present in the culture medium for the rest of the experiment. 
At this point, the infected cells could be incubated with antimicrobial compounds to assess their intracellular activities against S. aureus. Next, the cells are washed three times to remove the drugs, and intracellular S. aureus load is then quantified by culturing on agar plates. Alternatively, for studying staphylococcal virulence factors involved in intracellular survival and cell toxicity, lysostaphin could be inactivated with proteinase K to eliminate the need for washing steps. This tip improves the reliability of the intracellular bacterial load quantification, especially if cells tend to detach from the culture plate when they become heavily infected because of the multiplication of intracellular S. aureus. These protocols can be used with virtually all types of adherent NPPCs and with 3D cell culture models such as organoids.

Improved Enzyme Protection Assay to Study Staphylococcus aureus Internalization and Intracellular Efficacy of Antimicrobial Compounds

This protocol aims to describe how to study the extent of Staphylococcus aureus internalization and its ability to survive inside the human host cell, as well as the intracellular efficacy of antimicrobial compounds.

تحسين فحص حماية الإنزيم لدراسة استوعب المكورات العنقودية والفعالية داخل الخلايا للمركبات المضادة للميكروبات

Staphylococcus aureus expresses virulence factors to trigger its internalization into eukaryote cells and to survive inside different subcellular ...

Biology

In Vitro Biofilm Synthesis by Staphylococcus aureus

Source: Rana, P. S. et al., <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/63773">Standardized In vitro Assays to Visualize and Quantify Interactions between Human Neutrophils and Staphylococcus aureus Biofilms.</a> J. Vis. Exp. (2022)
In this video, we demonstrate the preparation of in vitro biofilm by S. aureus in a poly-L-Lysine-coated multi-well plate. The biofilm-formed plate can be used for downstream experiments.

تخليق الأغشية الحيوية في المختبر بواسطة المكورات العنقودية الذهبية

Source: Rana, P. S. et al., Standardized In vitro Assays to Visualize and Quantify Interactions between Human Neutrophils and Staphylococcus aureus ...

استهداف بيوفيلم أسوشيتد

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Microtiter تشكيل بيوفيلم الطبق الفحص

جهاز الاستشعار البيولوجي للكشف عن المضادات الحيوية البكتيريا العنقودية الذهبية المقاومة لل

استخدام متوسط البلغم الاصطناعي لاختبار فعالية المضادات الحيوية لمكافحة

اختبار قابلية المضادات الحيوية الناجم عن الإجهاد على رقاقة

ومنصة للفحوصات مكافحة بيوفيلم مناسبة لاستكشاف المكتبات مركب طبيعي

نظام لفعالية والسمسة فحص مثبطات استهداف بين الخلايا

فحوصات موحدة في المختبر لتصور وتحديد التفاعلات بين العدلات البشرية والمكورات العنقودية الذهبية الأغشية الحيوية

مقايسة اختزال قابلة للذوبان تعتمد على التترازوليوم لتقييم تأثير الأجسام المضادة على الأغشية الحيوية المبيضات الاستوائية

تحسين فحص حماية الإنزيم لدراسة استوعب المكورات العنقودية والفعالية داخل الخلايا للمركبات المضادة للميكروبات

تخليق الأغشية الحيوية في المختبر بواسطة المكورات العنقودية الذهبية

استهداف بيوفيلم أسوشيتد

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Microtiter تشكيل بيوفيلم الطبق الفحص

جهاز الاستشعار البيولوجي للكشف عن المضادات الحيوية البكتيريا العنقودية الذهبية المقاومة لل

استخدام متوسط ​​البلغم الاصطناعي لاختبار فعالية المضادات الحيوية لمكافحة

اختبار قابلية المضادات الحيوية الناجم عن الإجهاد على رقاقة

ومنصة للفحوصات مكافحة بيوفيلم مناسبة لاستكشاف المكتبات مركب طبيعي

نظام لفعالية والسمسة فحص مثبطات استهداف بين الخلايا

فحوصات موحدة في المختبر لتصور وتحديد التفاعلات بين العدلات البشرية والمكورات العنقودية الذهبية الأغشية الحيوية

مقايسة اختزال قابلة للذوبان تعتمد على التترازوليوم لتقييم تأثير الأجسام المضادة على الأغشية الحيوية المبيضات الاستوائية

تحسين فحص حماية الإنزيم لدراسة استوعب المكورات العنقودية والفعالية داخل الخلايا للمركبات المضادة للميكروبات

تخليق الأغشية الحيوية في المختبر بواسطة المكورات العنقودية الذهبية

استخدام متوسط البلغم الاصطناعي لاختبار فعالية المضادات الحيوية لمكافحة